ccdC基因的新用途

本发明属于微生物基因工程，更具体地说，涉及ccdc基因的新用途。

背景技术：

1、生物膜是自然界中大部分细菌的主要存在形式，同时也是细菌定殖在宿主表面的关键因素。在生物膜形成初期，细菌利用鞭毛等胞外细胞器和外层膜蛋白附着在载体表面，再通过分泌eps增强细菌与载体间的粘附力。粘附在载体表面的细菌通过分裂增加种群数量促进菌落的形成。菌落成长为成熟的生物膜。然而随着生物膜继续发展，生物膜内部细菌远离环境中生长必需的营养或能量，同时积累的废物和毒素威胁细菌自身安全，此时少部分膜内细菌会主动分散。分散的细菌在新的环境中会重新吸附在载体表面，形成新的生物膜，这就是生物膜发育的完整周期。

2、ccdc基因在瓦雷兹芽孢杆菌的基因组中是位于ccda的下游，紧接在ccdb后面。目前数据库中还没有ccdc基因的功能注释和报导。与之同源的是torbjorn schiott在枯草芽孢杆菌中研究ccda在细胞色素c合成中的作用时发现的与之共转录的两个开放阅读框orf120和orf160中的orf160(又称之为ynej开放阅读框)。但研究显示仅有ccda在细胞色素c的成熟过程中必需，而另外两个基因在此过程中并不发挥作用，orf160只是一个预测的18-kd的疏水蛋白，该蛋白在数据库中没有比对到任何相关信息。研究显示，ccdc的缺失在瓦雷兹芽孢杆菌中引起了诸多表型，提示该基因在瓦雷兹芽孢杆菌fzb42中是有功能且发挥着重要的作用。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供ccdc基因的新用途，用于筛选优良菌株；本发明所要解决的另一技术问题在于提供一株ccdc基因突变株szz06，用于筛选优良促生菌株。

2、为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

3、ccdc基因的新用途，所述新用途为提高菌株运动能力、降低细菌生物膜的褶皱性、破坏生物膜结构的稳定性、促进细菌分散、促进芽孢形成、抑制本氏烟草生长、抑制菌株分泌吲哚乙酸；所述ccdc基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、ccdc基因在提高菌株运动能力和/或降低细菌生物膜的褶皱性和/或破坏生物膜结构的稳定性和/或促进细菌分散和/或促进芽孢形成和/或抑制本氏烟草生长和/或抑制菌株分泌吲哚乙酸中的应用。

5、ccdc基因突变株的构建方法，包括：

6、1)构建生物膜分散调控基因ccdc敲除片段；

7、2)将所构建的生物膜分散调控基因ccdc敲除片段转化到瓦雷兹芽孢杆菌fzb42中；

8、3)培育筛选得到生物膜分散调控基因ccdc突变株；

9、所述生物膜分散调控基因ccdc敲除片段的核苷酸序列如seq id no.2所示。

10、ccdc基因突变株的构建方法构建得到的生物膜分散调控基因ccdc突变株。

11、ccdc基因突变株在降低瓦雷兹芽孢杆菌菌株运动能力中的应用。

12、ccdc基因突变株在增强瓦雷兹芽孢杆菌生物膜的褶皱性和维持结构的稳定性中的应用。

13、ccdc基因突变株在抑制瓦雷兹芽孢杆菌分散中的应用。

14、ccdc基因突变株在抑制瓦雷兹芽孢杆菌芽孢形成中的应用。

15、ccdc基因突变株在促进本氏烟草生长中的应用，其特征在于，所述促进本氏烟草生长为促进本氏烟草株高、根长、鲜重、干重增大，促进本氏烟草叶片变厚、颜色变绿。

16、ccdc基因突变株在分泌吲哚乙酸中的应用。

17、相比于现有技术，本发明的有益效果为：

18、1)本发明ccdc基因突变株szz06与野生型fzb42相比，菌株运动能力降低、生物膜的褶皱性更大、生物膜的结构更稳定、细菌分散更慢、芽孢形成更少。

19、2)本发明以ddh2o为对照，利用szz06mut菌液按1×107cfu/g土对本氏烟草进行灌根处理，用szz06mut处理的本氏烟草株高提高了497.16％、根长提高了59.74％、鲜重增加了4225.16％、干重增加了2268.42％。

20、以lb培养基为对照，用szz06mut处理的本氏烟草株高提高了73.51％；根长增加了5.16％，鲜重增加了201.95％，干重增加了209.08％。

21、并且，szz06mut处理的本氏烟草较用fb01mut、lb、ddh2o处理的本氏烟草的根系更为发达，同时叶片更为宽厚且叶色更为浓绿。

22、3)在0-24h内，本发明szz06培养液中iaa浓度/od600值均较fzb42大。结果说明，相同数量的ccdc突变株szz06可以分泌更多的iaa。

技术特征：

1.ccdc基因的新用途，所述新用途为提高菌株运动能力、降低细菌生物膜的褶皱性、破坏生物膜结构的稳定性、促进细菌分散、促进芽孢形成、抑制本氏烟草生长、抑制菌株分泌吲哚乙酸；所述ccdc基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.权利要求1所述的ccdc基因在提高菌株运动能力和/或降低细菌生物膜的褶皱性和/或破坏生物膜结构的稳定性和/或促进细菌分散和/或促进芽孢形成和/或抑制本氏烟草生长和/或抑制菌株分泌吲哚乙酸中的应用。

3.ccdc基因突变株的构建方法，其特征在于，包括：

4.权利要求3所述ccdc基因突变株的构建方法构建得到的生物膜分散调控基因ccdc突变株。

5.权利要求4所述的ccdc基因突变株在降低瓦雷兹芽孢杆菌菌株运动能力中的应用。

6.权利要求4所述的ccdc基因突变株在增强瓦雷兹芽孢杆菌生物膜的褶皱性和维持结构的稳定性中的应用。

7.权利要求4所述的ccdc基因突变株在抑制瓦雷兹芽孢杆菌分散中的应用。

8.权利要求4所述的ccdc基因突变株在抑制瓦雷兹芽孢杆菌芽孢形成中的应用。

9.权利要求4所述的ccdc基因突变株在促进本氏烟草生长中的应用，其特征在于，所述促进本氏烟草生长为促进本氏烟草株高、根长、鲜重、干重增大，促进本氏烟草叶片变厚、颜色变绿。

10.权利要求4所述的ccdc基因突变株在分泌吲哚乙酸中的应用。

技术总结
本发明公开了ccdC基因的新用途，属于微生物基因工程技术领域。本发明公开的ccdC基因的新用途，所述新用途为提高菌株运动能力、降低细菌生物膜的褶皱性、破坏生物膜结构的稳定性、促进细菌分散、促进芽孢形成、抑制本氏烟草生长、抑制菌株分泌吲哚乙酸；所述ccdC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了一株ccdC基因突变株SZZ06，本发明ccdC基因突变株SZZ06与野生型FZB42相比，菌株运动能力降低、生物膜的褶皱性更大、生物膜的结构更稳定、细菌分散更慢、芽孢形成更少、促进菌株分泌吲哚乙酸、促进植物生长。

技术研发人员：赵银娟,邵林,沈紫竹,樊奔
受保护的技术使用者：南京林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/5/8