一种在线荧光细胞计数器的制作方法

本技术涉及细胞计数领域，特别是涉及一种在线荧光细胞计数器。

背景技术：

1、细胞计数是生化、制药相关的细胞培养中，最常见的测试需求之一。基于区分培养液中的活细胞与死细胞，并对其分别计数的需求，多种荧光试剂被广泛应用。最常见的荧光染色体系是吖啶橙和溴化乙啶合用双染色。

2、现有的荧光细胞计数器，动态范围窄，不适合高浓度样品的分析；需要使用特异性荧光标记对样品进行前处理，且一般是手动操作；装置体积大，不适合原位测试。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本实用新型提供一种在线荧光细胞计数器，可自动进行细胞洗涤、重悬、染色、孵育和动态调整浓缩或稀释倍数的在线采样装置，装置简单小巧可以原位工作的led荧光检测部分，为细胞培养中宽动态范围(104～108cells/ml)的样本测定提供了便利的解决方案。

2、为解决上述技术问题，本实用新型提供如下技术方案：一种在线荧光细胞计数器，包括流路单元和光路单元，其中，所述流路单元包括第一细胞培养容器、第二细胞培养容器、缓冲瓶、染色瓶、多通选择阀、注射泵、换向阀、荧光流通池，所述第一细胞培养容器、第二细胞培养容器、缓冲瓶、染色瓶通过管路分别与多通选择阀上的不同端口连接，所述荧光流通池与换向阀连接，所述注射泵上设有缓冲环，其吸取样品或清洗溶剂至荧光流通池内；所述光路单元包括聚焦透镜、光电池、第一透镜、第二透镜，所述聚焦透镜上设置有可移动滤光片，所述第一透镜、第二透镜分别过滤不同的激发光信号；

3、进一步地，所述荧光流通池上分别设置有流通池入口、流通池出口，所述荧光流通池靠近流通池出口的一侧安装有可拆卸的筛板，对于常见的细胞直径(10-20μm)，所述筛板的孔径5μm，有效厚度0.5-1mm，材质为聚丙烯、聚四氟乙烯或不锈钢等生物惰性材料；

4、再进一步地，所述管路采用聚醚醚酮、聚四氟乙烯或者不锈钢管，其内径为0.5mm-10mm，外径为1/16英寸-1/2英寸；

5、再进一步地，所述多通选择阀、换向阀均采用不锈钢、peek或者ptfe材质；

6、再进一步地，所述缓冲瓶中填充有pbs缓冲液，所述染色瓶中填充有吖啶橙-溴化乙啶染色液；

7、作为本实用新型的一种优选技术方案，所述多通选择阀包括六个带数字编号的端口和一个公共端口，其中端口1做为排废管通往废液容器，端口2连接换向阀的1号端口，端口3连接荧光染色试剂，实例中以ao-eb染色液为例，端口4连接荧光染色试剂，实例中以ao-eb染色液为例，端口5、6连接两个细胞培养容器。

8、作为本实用新型的一种优选技术方案，所述换向阀有两个不同相位、六个端口，用于切换流通池部分液流的方向，其中端口2连接往荧光检测器流通池入口，端口3连接往荧光检测器流通池出口，端口4做为废液排出口，做为排废管通往废液容器，端口5、6之间用管线相互连接。

9、作为本实用新型的一种优选技术方案，第一透镜对应的激发光源使用490nm窄带发射波长的发光二极管，置于凸透镜焦点上获得传输方向和流通池垂直的一束平行单色激发光；第二透镜对应的激发光源使用530nm窄带发射波长的发光二极管，置于另一个凸透镜焦点上获得传输方向和流通池垂直的另一束平行单色激发光。

10、作为本实用新型的一种优选技术方案，当激发光源射入时，在入射光接近90°夹角的方向，设置发射光的检测部分，和激发光垂直方向的发射光，首先经过一个使用电机控制，有两个对应不同波长滤光片位置的可移动滤光片，每个滤光位置安装一个发射光波长的窄带滤光片，其中，滤光片1使用530nm窄带滤光片，带宽20nm(520-540nm允许通过)；滤光片2使用600nm窄带滤光片，带宽20nm(590-610nm允许通过)，在测量活细胞荧光信号时，滤光片1在光路中的工作位置，过滤530nm激发光信号，在测量死细胞荧光信号时，滤光片2在光路中的工作位置，过滤600nm激发光信号。

11、与现有技术相比，本实用新型能达到的有益效果是：

12、本实用新型不使用显微镜光路和/或视觉识别系统，光路构成简单，小型化的装置可以直接连接一个或多个细胞培养容器，进行细胞计数和细胞活率的原位、实时监测，前处理完全自动进行；同时，系统可以自动调整流通池内细胞浓度，解决了当前设备动态范围小的缺点，为细胞培养中宽动态范围(104～108cells/ml)的样本测定提供了便利的解决方案。

技术特征：

1.一种在线荧光细胞计数器，其特征在于：包括流路单元和光路单元，其中:

2.根据权利要求1所述的一种在线荧光细胞计数器，其特征在于：所述荧光流通池(9)上分别设置有流通池入口(10)、流通池出口(11)，所述荧光流通池(9)靠近流通池出口(11)的一侧安装有可拆卸的筛板(12)。

3.根据权利要求1所述的一种在线荧光细胞计数器，其特征在于：所述管路采用聚醚醚酮、聚四氟乙烯或者不锈钢管，其内径为0.5mm-10mm，外径为1/16英寸-1/2英寸。

4.根据权利要求1所述的一种在线荧光细胞计数器，其特征在于：所述多通选择阀(5)、换向阀(8)均采用不锈钢、peek或者ptfe材质。

5.根据权利要求1所述的一种在线荧光细胞计数器，其特征在于：所述缓冲瓶(3)中填充有pbs缓冲液，所述染色瓶(4)中填充有吖啶橙-溴化乙啶染色液。

技术总结
本技术公开了一种在线荧光细胞计数器，包括流路单元和光路单元，其中，流路单元包括第一细胞培养容器、第二细胞培养容器、缓冲瓶、染色瓶、多通选择阀、注射泵、换向阀、荧光流通池，第一细胞培养容器、第二细胞培养容器、缓冲瓶、染色瓶通过管路分别与多通选择阀上的不同端口连接，荧光流通池与换向阀连接，荧光流通池上分别设置有流通池入口、流通池出口，荧光流通池靠近流通池出口的一侧安装有可拆卸的筛板，材质为聚丙烯、聚四氟乙烯或不锈钢等生物惰性材料，注射泵上设有缓冲环，其吸取样品或清洗溶剂至荧光流通池内；光路单元包括聚焦透镜、光电池、第一透镜、第二透镜，聚焦透镜上设置有可移动滤光片。

技术研发人员：文大为,马志强,杨定忠,张博
受保护的技术使用者：北京橙达仪器有限公司
技术研发日：20230517
技术公布日：2024/1/15