可编辑细胞系的制作方法

本公开提供了可编辑细胞系，包括使用基因编辑蛋白来产生所述细胞系。通过制备可编辑细胞系，所述可编辑细胞系具有被进一步修饰以单独产生所期望的抗体的能力，可以减少抗体制备过程的成本和时间。

背景技术：

1、随着先进的抗体疗法的临床采用开始受到关注，因此更多的注意力转向将使这些疗法惠及全世界患者的基础制造策略。虽然抗体疗法在临床上拥有广阔的前景，但相对于偿付的高制备成本是商业化的巨大障碍。

2、抗体疗法所面临的挑战之一是产生所期望的抗体的多阶段和复杂的制备过程。当前的制备过程依赖于引入载体来构建细胞系，以表达所关注的基因并获得所期望的抗体。此过程需要为每种待表达的新抗体构建载体，随后进行基因引入和池恢复。此过程进一步需要克隆选择以找到高产克隆，这是耗时的，其中每个克隆都需要进行稳定性评估，并可能导致偏差和失败。

3、克服这些挑战所需的是缩短和简化制备过程的方法。可编辑细胞系能够表达抗体恒定区，并且可以充当抗体可变区的平台并去除载体构建的需要，并且提供可靠的抗体制备平台。本发明满足了这些需要。

技术实现思路

1、在一些实施例中，本公开提供了一种细胞，其包含基因组核酸序列，所述基因组核酸序列包含第一序列，所述第一序列在所述基因组核酸序列的一条链上编码抗体重链恒定区1、2和3，其中所述第一序列未侧接有编码抗体重链可变区的序列，以及第二序列，所述第二序列在所述基因组核酸序列的相对链上编码抗体轻链恒定区1，其中所述第二序列未侧接有编码抗体轻链可变区的序列。

2、在另外的实施例中，本文提供了一种产生可编辑细胞的方法，所述方法包含：在细胞的基因组核酸序列的一条链上引入编码抗体重链恒定区1、2和3的第一序列；以及在所述细胞的基因组核酸序列的相对链上引入编码抗体轻链恒定区1的第二序列。

3、本文还提供了一种制备产生抗体的可编辑细胞的方法，所述方法包含：提供包含基因组核酸序列的细胞，所述基因组核酸序列包含第一序列，所述第一序列在所述基因组核酸序列的一条链上编码抗体重链恒定区1、2和3，其中所述第一序列未侧接有编码抗体重链可变区的序列，以及第二序列，所述第二序列在所述基因组核酸序列的相对链上编码抗体轻链恒定区1，其中所述第二序列未侧接有编码抗体轻链可变区的序列，将编码抗体重链可变区的序列引入到所述抗体重链恒定区上游的所述第一序列；以及将编码抗体轻链可变区的序列引入到所述抗体轻链恒定区1上游的所述第二序列。

技术特征：

1.一种细胞，其包含基因组核酸序列，所述基因组核酸序列包含，

2.根据权利要求1所述的细胞，其进一步包含编码可选择标志物的序列。

3.根据权利要求1或2所述的细胞，其进一步包含编码基因编辑蛋白的序列。

4.根据权利要求3所述的细胞，其中所述基因编辑蛋白是cas基因编辑蛋白。

5.根据权利要求3所述的细胞，其中所述基因编辑蛋白选自cas9、cas12、cas12i2talens、mad7核酸酶和锌指核酸酶。

6.根据权利要求5所述的细胞，其中所述基因编辑蛋白是cas9。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的细胞，其中基因编辑蛋白序列与诱导型启动子可操作地连接。

8.根据权利要求7所述的细胞，其中所述诱导型启动子是tet-on系统。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的细胞，其进一步包含与所述第一序列可操作地连接的第一启动子和与所述第二序列可操作地连接的第二启动子。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的细胞，其中所述细胞是高表达稳定克隆。

11.根据权利要求10所述的细胞，其中所述细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。

12.一种产生可编辑细胞的方法，所述方法包含：

13.根据权利要求12所述的方法，其进一步包含引入编码可选择标志物的序列。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其进一步包含将编码基因编辑蛋白的序列引入到所述基因组核酸序列。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述基因编辑蛋白是cas基因编辑蛋白。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述基因编辑蛋白选自cas9、cas12、cas12i2、talens、mad7核酸酶和锌指核酸酶。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述基因编辑蛋白是cas9。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的方法，其中基因编辑蛋白序列与诱导型启动子可操作地连接。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述诱导型启动子是tet-on系统。

20.根据权利要求12至19中任一项所述的方法，其进一步包含引入与所述第一序列可操作地连接的第一启动子和与所述第二序列可操作地连接的第二启动子。

21.根据权利要求12至20中任一项所述的方法，其中所述细胞是高表达稳定克隆。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。

23.一种制备产生抗体的细胞的方法，所述方法包含：

24.根据权利要求23所述的方法，其进一步包含引入与编码所述抗体重链可变区的所述序列可操作地连接的第一启动子和与编码所述抗体轻链可变区的所述序列可操作地连接的第二启动子。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其进一步包含在所述细胞中表达所述抗体。

26.根据权利要求23至25中任一项所述的方法，其进一步包含引入编码可选择标志物的序列。

27.根据权利要求26所述的方法，其进一步包含使用所述可选择标志物选择表达所述抗体的细胞。

28.一种制备产生抗体的细胞的方法，所述方法包含：

29.根据权利要求28所述的方法，其进一步包含引入具有编码所述抗体重链可变区的所述序列的第一启动子。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述第一启动子与编码所述抗体重链可变区的所述序列可操作地连接。

31.根据权利要求28至30中任一项所述的方法，其进一步包含引入具有编码所述抗体轻链可变区的所述序列的第二启动子。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述第二启动子与编码所述抗体轻链可变区的所述序列可操作地连接。

技术总结
本公开提供了可编辑细胞系，包括使用基因编辑蛋白来产生所述细胞系。所述可编辑细胞系能够表达抗体恒定区，所述抗体恒定区可以充当抗体可变区的平台以产生定制抗体。

技术研发人员：A·吉勒特,K·拉多塞维奇,B·施莱布曼,F·G·戈特利布,M·菲亚瑞,B·斯威尼
受保护的技术使用者：隆萨销售股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/4/10