水稻黄单胞菌NuoEF复合体蛋白晶体的制备方法及其用途

本发明属于药物靶标材料，具体涉及水稻黄单胞菌nuoef复合体蛋白晶体的制备方法及其用途。

背景技术：

1、水稻黄单胞菌（ xanthomonas oryzae）引起的水稻细菌性病害（水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病）在全球范围内广泛发生，对水稻的产量和品质造成了严重的影响，造成了巨大的经济损失。当前，可用于防治水稻细菌病害的药剂种类较为有限，并且部分常用药剂已经出现了抗药性问题，防治效果逐渐降低。因此，急需研发新型防治药剂与现有药剂进行交替使用，以减少产量损失并缓解抗药性问题。

2、呼吸链复合物i是水稻黄单胞菌呼吸作用的关键组成部分，其中nuoef是复合物i电子输入模块的核心部分，也是呼吸电子传递链的起始电子传递模块。针对这一模块进行药物设计与合成，有望开发出新型的水稻黄单胞菌抑制剂。然而，目前关于植物病原细菌nuoef的蛋白晶体结构尚未有相关报道。因此，针对水稻黄单胞菌nuoef复合体蛋白晶体结构的研究与药物开发具有重要的科学意义和应用价值。

技术实现思路

1、针对以上不足，本发明提供了一种水稻黄单胞菌nuoef复合体蛋白晶体的制备方法及其用途。

2、本发明是通过以下技术方案实现的。

3、所述的nuoef复合体蛋白是使用petduet1-h6sumo和pcdfduet-h6sumo质粒在大肠杆菌中对nuof和nuoe蛋白进行共表达和亲和纯化后获得的。

4、进一步的，通过坐滴蒸汽扩散法对纯化后的高质量nuoef复合体蛋白进行结晶，从而获得高分辨率的nuoef复合体蛋白晶体。

5、所述的用途是指将nuoef复合体晶体结构应用于深入探究抑制水稻黄单胞菌呼吸链复合物i药物小分子的作用机制，以及进行结构优化。

6、所述的作用机制研究是通过药物小分子与nuoef复合体蛋白的分子对接、点突变和表面等离子共振技术分析等技术手段进行的；所述的结构优化是基于复合体蛋白结构和化学合成方法，通过化合物设计、合成和抑菌活性测试等技术手段实现的。

7、总的来说，本发明通过解析水稻黄单胞菌呼吸链复合物i中的电子输入模块nuoef复合体的蛋白晶体结构，将晶体结构应用于药物小分子的作用机制研究和结构优化上，以促进水稻黄单胞菌呼吸链复合物i抑制剂的研究与开发。本发明为新型植物细菌病害防治药剂的研发提供了有力支持。

技术特征：

1.一种水稻黄单胞菌nuoef复合体蛋白晶体的制备方法及其用途。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于使用petduet1-h6sumo和pcdfduet-h6sumo质粒在大肠杆菌中共表达nuof和nuoe蛋白，并通过亲和纯化获得高质量的nuoef复合体蛋白；所述的nuoef复合体蛋白晶体是通过坐滴蒸汽扩散法获得的。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于水稻黄单胞菌nuoef复合体蛋白晶体结构可用于研究抑制呼吸链复合物i药物小分子的作用机制和结构优化，为植物细菌病害防治药剂的创制提供支持。

技术总结
水稻黄单胞菌NuoEF复合体蛋白晶体的制备方法及其用途，涉及药物靶标材料技术领域。本发明通过蛋白原核表达与纯化和蛋白结晶方法，成功制备了水稻黄单胞菌呼吸链复合物I电子输入模块NuoEF复合体蛋白晶体，采用X射线‑衍射法解析了蛋白晶体结构，分辨率达到2.36Å。进一步验证表明该蛋白晶体结构可用于水稻黄单胞菌呼吸链复合物I抑制剂的作用机制研究和结构优化，在植物细菌病害防治药剂的创制方面展现出良好的应用前景。

技术研发人员：徐曙,张峰,李磊,李林蔚,刘飞,周倩,王碧,陈雨,单宇,冯煦
受保护的技术使用者：江苏省中国科学院植物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16