一种鸭圆环病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用与流程

本发明属于兽用生物制品，具体涉及一种鸭圆环病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

1、鸭圆环病毒病是近些年新发现的一种禽类的病毒病，本病除了能引起鸭只的原发性感染导致死亡外，主要引起鸭的免疫系统受到损害，导致免疫抑制而继发其他传染性疾病，导致鸭群的大量死亡，造成巨大的经济损失。

2、鸭圆环病毒(duckcircovirus,ducv)首先由德国的学者hattermann等于2003年发现的一种新病毒。经研究表明.鸭圆环病毒属圆环病毒科圆环病毒属的成员。鸭圆环病毒为单股环状dna病毒，侯光华等经研究发现分离我国感染病鸭的病毒大小为1995bp，呈二十面体对称，圆形，无囊膜。直径为15～16nm左右，是目前已知最小的鸭病毒。

3、因此，针对该病的防治以疫苗为最好，但国内外暂没有相关的疫苗上市，因此，开发一款较好的鸭圆环病毒疫苗至关重要。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明的目在于提供鸭圆环病毒重组蛋白及其制备方法和应用。

2、因此，本发明一方面提供了一种鸭圆环病毒重组蛋白，所述鸭圆环病毒重组蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3、优选地，本发明所述鸭圆环病毒重组蛋白以鸭圆环病毒1型cap蛋白作为骨架蛋白，从n端去除36个氨基酸，在剩余的氨基酸的n端添加一段b细胞抗原表位，并在b细胞抗原表位前后分别添加鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa101～aa110和aa231～aa240的氨基酸序列。

4、优选地，本发明所述的b细胞抗原表位的氨基酸序列为kltnkhspepknndnn。

5、优选地，本发明所述的鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa101～aa110的氨基酸序列为symqgnkpqy；所述的鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa231～aa240的氨基酸序列为natgdegkyd。

6、再一方面，本发明还提供了一种鸭圆环病毒亚单位疫苗，所述疫苗含有有效量所述的鸭圆环病毒重组蛋白和药学上可接受的佐剂。

7、优选地，本发明所述的鸭圆环病毒重组蛋白的浓度为50g/ml。

8、再一方面，本发明还提供了一种鸭圆环病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体能特异性结合所述的鸭圆环病毒重组蛋白，所述的单克隆抗体包括特异性结合鸭圆环病毒1型cap蛋白的单克隆抗体1和特异性结合鸭圆环病毒2型cap蛋白的单克隆抗体2，其中单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区的序列如seq id no.2和seq id no.3所示，单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区的序列如seq id no.4和seq id no.5所示。

9、优选地，本发明所述的单克隆抗体1的抗原结合位点为鸭圆环病毒1型cap蛋白的aa232～aa238，其氨基酸序列为ttgvnaq。

10、优选地，本发明所述的单克隆抗体2的抗原结合位点为鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa232～aa238，其氨基酸序列为atgdegk。

11、再一方面，本发明还提供了一种所述的鸭圆环病毒重组蛋白在制备鸭圆环病毒亚单位疫苗中的应用。

12、本发明制备的鸭圆环病毒重组蛋白具有良好的免疫原性，相对于未修饰的鸭圆环病毒1型(ducv-1)cap蛋白、未修饰的鸭圆环病毒2型(ducv-2)cap蛋白以及两者的组合均具有较好的免疫效果，且在制备时更简单(无需两者蛋白分开制备，降低生产成本)。且以此鸭圆环病毒重组蛋白制备的亚单位疫苗，具有良好的免疫保护，适用于鸭圆环病毒的防治。

13、另外，本发明提供的单克隆抗体1和单克隆抗体2具有良好的特异性，可以作为鸭圆环病毒1型和鸭圆环病毒2型特异性检测用。

技术特征：

1.一种鸭圆环病毒重组蛋白，其特征在于，所述鸭圆环病毒重组蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的鸭圆环病毒重组蛋白，其特征在于，所述鸭圆环病毒重组蛋白以鸭圆环病毒1型cap蛋白作为骨架蛋白，从n端去除36个氨基酸，在剩余的氨基酸的n端添加一段b细胞抗原表位，并在b细胞抗原表位前后分别添加鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa101～aa110和aa231～aa240的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的鸭圆环病毒重组蛋白，其特征在于，所述的b细胞抗原表位的氨基酸序列为kltnkhspepknndnn。

4.根据权利要求2所述的鸭圆环病毒重组蛋白，其特征在于，所述的鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa101～aa110的氨基酸序列为symqgnkpqy；所述的鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa231～aa240的氨基酸序列为natgdegkyd。

5.一种鸭圆环病毒亚单位疫苗，其特征在于，所述疫苗含有有效量的权利要求1所述的鸭圆环病毒重组蛋白和药学上可接受的佐剂。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述的鸭圆环病毒重组蛋白的浓度为50μg/ml。

7.一种鸭圆环病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体能特异性结合权利要求1所述的鸭圆环病毒重组蛋白，其特征在于，所述的单克隆抗体包括特异性结合鸭圆环病毒1型cap蛋白的单克隆抗体1和特异性结合鸭圆环病毒2型cap蛋白的单克隆抗体2，其中单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区的序列如seq id no.2和seq id no.3所示，单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区的序列如seq id no.4和seq id no.5所示。

8.根据权利要求7所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体1的抗原结合位点为鸭圆环病毒1型cap蛋白的aa232～aa238，其氨基酸序列为ttgvnaq。

9.根据权利要求7所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体2的抗原结合位点为鸭圆环病毒2型cap蛋白的aa232～aa238，其氨基酸序列为atgdegk。

10.一种如权利要求1所述的鸭圆环病毒重组蛋白在制备鸭圆环病毒亚单位疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鸭圆环病毒重组蛋白，所述鸭圆环病毒重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述鸭圆环病毒重组蛋白以鸭圆环病毒1型Cap蛋白作为骨架蛋白，从N端去除36个氨基酸，在剩余的氨基酸的N端添加一段B细胞抗原表位，并在B细胞抗原表位前后分别添加鸭圆环病毒2型Cap蛋白的aa101～aa110和aa231～aa240的氨基酸序列。本发明还公开了一种鸭圆环病毒亚单位疫苗，所述疫苗含有有效量所述的鸭圆环病毒重组蛋白和药学上可接受的佐剂。本发明制备的鸭圆环病毒重组蛋白具有良好的免疫原性，以此鸭圆环病毒重组蛋白制备的亚单位疫苗，具有良好的免疫保护，适用于鸭圆环病毒的防治。

技术研发人员：虞志明,曾庆辉,刘雯雯
受保护的技术使用者：广东光峰生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17