一种黑曲霉及其应用的制作方法

本发明涉及一种黑曲霉及其应用，属于医药领域。

背景技术：

1、我国发酵技术应用历史悠久，也是传统中药加工炮制的重要方法之一，一般主要是起到中药复合炮制的作用。即将药材与辅料拌和，一定温度和湿度下通过微生物的发酵达到提高药效、改变药性、降低毒副作用等目的。直到现在，临床仍在应用的发酵中药，如六神曲、淡豆豉、建曲、沉香曲、半夏曲、红曲、豆黄等，均是利用炮制环境中的野生微生物(多为霉菌、酵母、细菌等)进行多菌种固体发酵而成。

2、半夏(pinellia ternata)是常用中药之一，由于具有毒性，临床入药多用其炮制品。半夏可燥湿痰，润肾燥，散结除痞，宣通阴阳，前贤针对痰邪的不同性质，把半夏或用药汁浸或加其它药物制成曲，使半夏更能发挥功效。“韩飞霞造曲十法”记载了10种半夏炮制品，开郁曲为其中一种，可治郁痰。

3、申请号2018105876956，发明名称：一种开郁曲的制备方法，公开了一种开郁曲的制备方法，它包括如下步骤：(1)原料药的称取：(2)煎汁；(3)发酵；(4)出曲。本发明还公开了制备得到的开郁曲产品。实验结果表明，采用本发明方法可显著提高提取物出膏率及开郁曲中活性物质阿魏酸含量，并且可以减少开郁曲炮制时间、杂霉生长。该申请采用的发酵工艺是自然发酵，自然发酵会有很多影响，质量不可控，其中制备的总酚酸的含量波动较大，最低含量为0.528mg/ml，最高含量也仅有1.15mg/ml。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本申请提供了一种新的黑曲霉，将作为发酵剂用于制备开郁曲。

2、本发明提供了一种黑曲霉aspergillus nigerxk-kyq-bq-1，它是保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no:m 20232398。

3、本发明提供了所述的黑曲霉在制备开郁曲中的应用。

4、本发明提供了一种发酵剂，它含有所述的黑曲霉aspergillus niger xk-kyq-bq-1。

5、其中，每毫升孢悬液中xk-kyq-bq-1孢子数≥1×105。

6、所述的发酵剂是采用无菌水洗黑曲霉孢子后稀释或以马铃薯葡萄糖液体培养基发酵制得。

7、本发明提供了一种开郁曲的制备方法，它包括如下步骤：

8、a、原料药的称取：取川芎、香附、苍术、清半夏，备用；

9、b、煎汁：将川芎、香附、苍术，加水煎煮，过滤，浓缩，得煎汁；

10、c、清半夏粉和麦麸混合制为发酵基质；

11、d、将所述的发酵剂加入c步骤的发酵基质中、加入b步骤的煎汁，进行发酵；发酵条件为：30-40℃，湿度≥80％，发酵3-7天；发酵至终点收料，烘干，即得。

12、其中，步骤a中所述的川芎、香附、苍术、清半夏的重量配比为1-10：1-10：1-10：1-10。进一步优选地，步骤a中所述的川芎、香附、苍术、清半夏的重量配比为1:1:1:1。

13、本发明还提供了所述的制备方法制备得到的开郁曲。

14、阿魏酸为开郁曲重要的有效成分，具有抗血小板聚集、抗脂质过氧化及清除自由基等作用，具有抗氧化、降血脂、抗突变和防癌等功能。黑曲霉可以分泌包括能够水解没食子酰基、阿魏酰基等的单宁酶、阿魏酸酯酶(feruloyl esterase，fae)，黑曲霉分泌的fae可以断开植物细胞壁中阿魏酸和细胞壁多糖的酯键得到阿魏酸(见式1)，提高开郁曲中阿魏酸的含量。经黑曲霉发酵后可得到游离和非游离态的阿魏酸(ferulic acid extractionfrom fermented-whent brarn fa-wb)，后者抗氧化活性优于游离阿魏酸，极大提高开郁曲活性。

15、

16、式1黑曲霉断裂细胞壁脂键释放阿魏酸

17、本发明提供的黑曲霉xk-kyq-bq-1已于2023年11月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc m 20232398。该菌株阿魏酸脂酶酶活达3598-3712u/ml，发酵制备的开郁曲阿魏酸含量稳定在0.035％以上，远高于现有标准，以该菌株发酵制备的开郁曲浸出物高达75.0％以上，远超现有标准。

18、本发明的有益效果：

19、(1)本发明提升开郁曲中阿魏酸含量的黑曲霉xk-kyq-bq-1及其制备的发酵剂，固体发酵制备的开郁曲中阿魏酸含量稳定在0.035％以上，且均未检出黄曲霉毒素b1，能有效保证中药饮片质量、功效和安全。黄曲霉毒素(aft)是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素，其衍生物有约20种，分别命名为b1、b2、g1、g2、m1、m2、gm、p1、q1、毒醇等，其中以b1的毒性最大，致癌性最强。

20、(2)目前，现有标准开郁曲浸出物为50.0％，本发明制备的开郁曲浸出物高达75.0％以上。

技术特征：

1.一种黑曲霉aspergillus nigerxk-kyq-bq-1，其特征在于：它是保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no:m 20232398。

2.权利要求1所述的黑曲霉在制备开郁曲中的应用。

3.一种发酵剂，其特征在于：它含有权利要求1所述的黑曲霉aspergillus niger xk-kyq-bq-1。

4.根据权利要求3所述的发酵剂，其特征在于：每毫升孢悬液中xk-kyq-bq-1孢子数≥1×105。

5.根据权利要求3或4所述的发酵剂，其特征在于：它是采用无菌水洗黑曲霉孢子后稀释或以马铃薯葡萄糖液体培养基发酵制得。

6.一种开郁曲的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的开郁曲的制备方法，其特征在于：步骤a中所述的川芎、香附、苍术、清半夏的重量配比为1-10：1-10：1-10：1-10。

8.根据权利要求7所述的开郁曲的制备方法，其特征在于：步骤a中所述的川芎、香附、苍术、清半夏的重量配比为1:1:1:1。

9.权利要求6-8任意一项所述的制备方法制备得到的开郁曲。

技术总结
本发明涉及一种黑曲霉Aspergillus nigerXK‑KYQ‑BQ‑1，其特征在于：它是保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 20232398。本发明提供了一种发酵剂，它含有所述的黑曲霉。本发明还提供了一种开郁曲的制备方法。本发明固体发酵制备的开郁曲中阿魏酸含量稳定在0.035％以上，且均未检出黄曲霉毒素B<subgt;1</subgt;，能有效保证中药饮片质量、功效和安全；制备的开郁曲浸出物高达75.0％以上。制备的开郁曲饮片，其浸出物、总酚酸、阿魏酸的含量显著高于自然发酵工艺，且不含有黄曲霉毒素B<subgt;1</subgt;，本发明为开郁曲的工艺大生产提供了新的选择。

技术研发人员：万兴东,纪奇森,岳顺疆,胡久平,徐海英,张海
受保护的技术使用者：雅安迅康药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29