一种塔里木兔来源的DNA分子、蛋白、表达载体及其应用

本发明涉及基因工程，特别是涉及一种塔里木兔来源的dna分子、蛋白、表达载体及其应用。

背景技术：

1、在家兔养殖过程中，家兔极易被革兰氏阴性菌感染患上肠炎性复合病死亡，给家兔养殖业带来巨大的经济损失。炎症性肠病是一种慢性、复发性和无法治愈的肠道疾病，主要发生在结肠黏膜上皮，可能累及整个结肠。该病的免疫功能失调表现为炎症细胞因子的失衡，最终导致肠上皮组织破坏，il-6、il-1β、tnf-α等是常见的炎症细胞因子。研究表明，toll样受体4(toll-like receptor 4，tlr4)在炎症性肠病的发病机制中起重要作用，是启动并维持肠道炎症的原因。tlr4可以识别革兰氏阴性菌的脂多糖(lipopolysaccharide，lps)，来激活炎症反应导致肠道组织损伤以及加剧肠炎反应。

2、塔里木兔(lepus yarkandensis)是中国特有物种，主要分布在中国西北部新疆维吾尔自治区南部环境极度干旱的塔里木盆地，它们主要的活动地点会集中在长有红柳的松软沙丘地带，以挖掘芦苇、罗布麻、甘草、骆驼刺等植物的根为食。通过在新疆阿拉尔市沙漠附近野外调查发现，塔里木兔粪便干燥，呈黑褐色、颗粒状。塔里木兔长期生活在沙漠环境中，面临着巨大的炎症挑战，然而并未发现呈腹泻症状的粪便。目前养殖场应对肠炎主要以抗生素为主，但长期滥用抗生素会使病菌产生抗药性，通过基因工程手段提高家兔的抗病性还尚未报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种塔里木兔来源的dna分子、蛋白、表达载体及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种塔里木兔来源、降低细胞炎症的dna分子，其核苷酸序列如seq idno.3所示。

4、本发明还提供所述dna分子所编码的蛋白，其氨基酸序列如seq id no.4所示。

5、本发明还提供扩增所述dna分子的引物，由如seq id no.1所示的上游引物和如seq id no.2所示的下游引物组成。

6、本发明还提供含有所述dna分子的表达载体，所述表达载体为pegfp-n1-tlr4。

7、本发明还提供含有所述dna分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备降低细胞炎症的药物中的应用。

8、优选的是，所述炎症包括lps引起的炎症。

9、优选的是，所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌通过过表达所述dna分子，从而降低细胞炎症。

10、本发明还提供含有所述dna分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备降低炎症因子il-1β表达水平的药物中的应用。

11、优选的是，所述炎症因子包括il-6、il-1β、tnf-α和tgf-β。

12、基于上述技术方案，本发明具有以下技术效果：

13、本发明从塔里木兔结肠中克隆出tlr4基因，成功构建了重组过表达载体并转染到家兔结肠上皮细胞中，发现与野生型家兔结肠上皮细胞相比，导入塔里木兔tlr4基因的家兔结肠上皮细胞在lps诱导下细胞炎症因子水平要显著低于野生型，这说明塔里木兔tlr4基因具有影响lps易感性，降低细胞炎症因子水平的功能。本发明提供的塔里木兔tlr4基因可以作为一个优良的基因资源，为提高家兔的抗病能力以及促进塔里木兔优异基因的开发利用奠定基础。

技术特征：

1.一种塔里木兔来源、降低细胞炎症的dna分子，其特征在于，其核苷酸序列如seq idno.3所示。

2.如权利要求1所述dna分子所编码的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.4所示。

3.扩增如权利要求1所述dna分子的引物，其特征在于，由如seq id no.1所示的上游引物和如seq id no.2所示的下游引物组成。

4.含有如权利要求1所述dna分子的表达载体，其特征在于，所述表达载体为pegfp-n1-tlr4。

5.含有如权利要求1所述dna分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备降低细胞炎症的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述炎症包括lps引起的炎症。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌通过过表达所述dna分子，从而降低细胞炎症。

8.含有如权利要求1所述dna分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备降低炎症因子il-1β表达水平的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述炎症因子包括il-6、il-1β、tnf-α和tgf-β。

技术总结
本发明公开了一种塔里木兔来源的DNA分子、蛋白、表达载体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明从塔里木兔结肠中克隆出TLR4基因，成功构建了重组过表达载体并转染到家兔结肠上皮细胞中，发现与野生型家兔结肠上皮细胞相比，导入塔里木兔TLR4基因的结肠上皮细胞在LPS诱导下细胞炎症因子水平显著低于野生型，这说明塔里木兔TLR4基因具有影响LPS易感性，降低细胞炎症因子水平的功能。本发明提供的塔里木兔TLR4基因可以作为一个优良的基因资源，为提高家兔的抗病能力以及促进塔里木兔优异基因的开发利用奠定基础。

技术研发人员：张建萍,张刘凯,李树伟,邓芳
受保护的技术使用者：塔里木大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29