一种富集松茸活性成分的菌株及松茸发酵油的制备方法与流程

本发明涉及生物工程，具体涉及一种富集松茸活性成分的菌株及松茸发酵油的制备方法。

背景技术：

1、云南香格里拉松茸是一种珍贵的食用菌类，主要分布在云南省迪庆藏族自治州和丽江市境内的高山森林中。它生长在海拔2500-4500米的针阔混交林中，以松树、云杉等树木为营养基质，含有丰富的蛋白质、氨基酸、矿物质、维生素等多种营养成分，尤其是富含β-葡聚糖等免疫活性物质，具有增强免疫力、抗肿瘤等保健功效，因此也被称为“松茸之王”。

2、当前，随着人们对美容养颜的需求不断增加，松茸类成分在化妆品行业中的市场规模逐年扩大。根据相关机构预测，未来几年内，全球松茸类成分在化妆品行业中的市场规模将持续增长。目前市场上的松茸类成分主要应用于护肤品、面膜、眼霜等化妆品中，其中，以松茸精华液和松茸面霜最为常见。松茸类成分在化妆品行业中的市场需求主要来自以下几个方面：一是美容养颜，如抗衰老、淡化细纹、提亮肤色等；二是保湿滋润，如补水保湿、改善干燥肌肤等；三是舒缓修护，如缓解皮肤过敏、修复受损肌肤等。目前，国内外许多企业都在生产和销售松茸类成分化妆品。其中，日本企业在松茸类成分化妆品市场中占据较大份额。国内企业也在积极布局这一市场，如稀物集、相宜本草、植物医生等知名企业均推出了自己的松茸类成分化妆品，这也侧面体现了松茸成分的珍贵。但是松茸中包含多种成分，其中的有效成分不易被直接提取出来，需要经过复杂的加工过程才能得到纯度较高的提取物。南极拟酵母具有能够高表达重组蛋白的能力，是大肠杆菌(bl21(de3))中重组脂肪酶活性的3倍。因此，采用改造后的南极拟酵母进行与松茸进行共发酵，通过代谢调控和发酵过程控制等手段有效地提高松茸主要活性成分的含量，增加渗透吸收，产生新的次级代谢活性产物，全方位提高松茸提取物的护肤功效。

3、目前市面上的松茸提取物多指的是其水溶性物质，绝大多数研究的都是其多糖，多肽等，但对其中的脂溶性活性物却显少研究，如松茸中的萜类，黄酮类等物质，这造成了松茸活性成分综合利用的大大浪费。特别是松茸中含有一种任何其它植物都没有的特殊生物活性物质—松茸醇，它具有超强抗基因突变能力和强抗癌作用，同时研究发现松茸醇还具有可刺激胶原蛋白再生，具有抗衰老作用和抑菌作用等。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中存在的缺乏松茸脂溶性提取物的问题，提供一种富集松茸活性成分的菌株及松茸发酵油的制备方法。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种重组质粒，所述重组质粒含有脂肪酶基因、脂氧合酶基因和氢过氧化物裂解酶基因，所述脂肪酶基因、脂氧合酶基因和氢过氧化物裂解酶基因的核苷酸序列依次如seq idno.1-seq id no.3所示。

3、本发明同时提供了一种富集松茸活性成分的菌株，所述菌株含有上述重组质粒。

4、优选地，将重组质粒转化南极拟酵母的感受态细胞中，筛选得到富集松茸活性成分的菌株。

5、本发明还提供了一种松茸发酵油的制备方法，包括以下步骤：

6、s1、将上述菌株接种至10ml ypd培养基中，30℃、180rpm培养12-16h至对数中期，得到种子液；

7、s2、转移2ml种子液至含100ml ypd培养基的500ml摇瓶中，30℃、180rpm培养至od600达到12-15；

8、s3、将松茸研磨至浆状，并按照料液比1:20加入发酵培养基(酵母粉10g/l,蛋白胨20g/l，甘油20g/l)，接入1％s2中的种子液，而后于30℃培养12-16h，进行一步发酵；

9、s4、发酵完成后，按照s3中纯净水添加量1:1等体积加入植物油，再继续于30℃摇床培养24h，于10 000rpm条件下离心10min后，取上层油相得到松茸发酵油。

10、优选地，所述植物油为月见草油、亚麻籽油、红花籽油、紫苏籽油、核桃油中的一种。

11、本发明所具有的有益效果：

12、(1)本发明制备得到含有脂肪酶基因、脂氧合酶基因和氢过氧化物裂解酶基因的重组质粒pjjl-23-026-2，将该重组质粒pjjl-23-026-2转化南极拟酵母中，筛选得到可以富集松茸活性成分的菌株jjl-23-026。

13、(2)本发明将菌株jjl-23-026接种于松茸溶液中，用于松茸脂溶性活性物质的发酵培养，通过该菌株处理能够破环油脂中的甘油三酯，生成甘油单酯、甘油双酯及其他脂肪酸衍生物，降低油脂的分子量，使其轻薄好吸收。

14、(3)本发明通过菌株jjl-23-026对松茸油脂发酵培养，可利用油脂本身为前体物质，参与其生源合成途径，增加松茸醇产物含量，本发明制备的松茸发酵油中含有9.68mg/kg的松茸醇，较未经处理的松茸直提油中松茸醇的含量提升55.38％。

15、(4)本发明制备得到的松茸发酵油对h2o2/fe2+体系经fenton反应产生的·oh有清除作用，且随着加入量的增加清除率均呈上升趋势。

技术特征：

1.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有脂肪酶基因、脂氧合酶基因和氢过氧化物裂解酶基因，所述脂肪酶基因、脂氧合酶基因和氢过氧化物裂解酶基因的核苷酸序列依次如seq id no.1-seq id no.3所示。

2.一种富集松茸活性成分的菌株，其特征在于，所述菌株含有如权利要求1所述的重组质粒。

3.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，将重组质粒转化南极拟酵母的感受态细胞中，筛选得到富集松茸活性成分的菌株。

4.一种松茸发酵油的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述植物油为月见草油、亚麻籽油、红花籽油、紫苏籽油、核桃油中的一种。

6.如权利要求4所述的制备方法制备得到的松茸发酵油。

7.根据权利要求6所述的松茸发酵油，其特征在于，所述松茸发酵油在制备抗氧化活性制剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种富集松茸活性成分的新菌株及其在制备松茸发酵油中的应用，将重组质粒pJJL‑23‑026‑2转化至南极拟酵母中，筛选得到可以富集松茸活性成分的新菌株JJL‑23‑026。将菌株JJL‑23‑026接种于松茸溶液中，用于松茸脂溶性活性物质的发酵培养。该菌株处理能够破环油脂中的甘油三酯，生成系列甘油单酯、甘油双酯及其他衍生物，从而降低油脂的分子量，使其更轻薄好吸收。同时，利用该菌株对松茸油脂进行发酵培养，可利用油脂本身为前体物质，参与其生源合成，增加松茸醇产物含量。因此，本发明制备得到的松茸发酵油具有显著的抗氧化活性，在对H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;/Fe<supgt;2+</supgt;体系中可明显清除Fenton反应产生的·OH，其清除率呈剂量依赖性上升，预示这种松茸发酵油在化妆品等领域具有良好的应用前景。

技术研发人员：胡露,黄楚杰,张嘉恒,王紫琴,薛欣怡
受保护的技术使用者：稀物集（广州）生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29