肌萎缩侧索硬化症的SQSTM1的p.P374TfsTer18突变致病基因及其应用

本发明涉及生物医学检测，特别涉及肌萎缩侧索硬化症的突变致病基因及其应用。

背景技术：

1、肌萎缩侧索硬化症（als）是种进行性四肢无力、致死致残的神经系统变性病，目前缺乏有效治疗方法。致病基因包括常见的 sod1， c9orf72等，鉴定als致病基因和突变有利于帮助明确该病发病机制。基于肌萎缩侧索硬化症（als）发病过程的复杂度、临床转归的恶性度，识别als致病基因对于早期诊断非常重要，如果能及早的应用医疗检测手段检查出病变的可能性，及时的进行治疗干预，尽可能的减少患者运动功能衰退是当前科研人员迫不及待的心愿。

2、因此，有必要完善肌萎缩侧索硬化症的新突变致病基因，在临床发现前期能通过生物基因筛查手段更及时的发现als病变的可能性，寻找可能治疗办法，及时进行治疗干预。

技术实现思路

1、本发明目的是提供肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因及其应用，为在临床发现前期能通过生物基因筛查手段更及时的发现肌萎缩侧索硬化症提供更多更有力的检测工具，能及时的进行治疗干预。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、在本发明的第一方面，提供了一种肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因，所述突变致病基因的核酸样本与sqstm1基因如seq id no：1所示的核苷酸序列相比，核苷酸变化为：人类第5号染色体第179260735位碱基g存在1个重复的位点突变，所述位点突变为chr5:179260735:c.1118dup。

4、突变前的sqstm1基因的核苷酸序列如seq id no：1所示，氨基酸序列如seq idno：2所示；突变后sqstm1基因的突变致病位点p.p374tfster18的核苷酸序列如seq id no：3所示，氨基酸序列如seq id no：4所示。

5、肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因，与sqstm1基因如seq id no：1所示的核苷酸序列相比，第1118位的g存在1个重复的位点突变，导致产生移码突变。

6、在本发明的第二方面，提供了用于检测所述的肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的试剂在制备肌萎缩侧索硬化症的诊断产品中的应用。

7、在本发明的第三方面，提供了一种筛选肌萎缩侧索硬化症的试剂盒，所述试剂盒包含检测所述的肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的试剂。

8、进一步地，所述试剂盒包括：用于扩增肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的引物对。

9、进一步地，所述引物对的核苷酸序列如seq id no：7-seq id no：8所示。

10、进一步地，所述用试剂盒还包括：dntps、taq酶、mg2+和pcr反应缓冲液。

11、本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

12、1、本发明提供的肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因及其应用，本申请发明人在als队列基因筛查中检测到sqstm1突变病人，病人表现为典型的上下运动神经元损害，为确诊的als病例，经过基因检测首次发现了p.p374tfster18位点突变，突变位点位于人类第5号染色体sqstm1基因的7号外显子，该位点在不同种属中具有高保守性，并证实了该位点突变和肌萎缩侧索硬化症疾病密切相关。

13、2、本发明设计出直接检测该突变基因的试剂盒。本发明所述的试剂盒可以直接通过一代测序，减少繁琐程序，跳过高通量筛选，直接针对目的基因测序。本发明所提供的引物设计，pcr扩增加上一代测序对基因突变进行检测，操作简单，技术成熟，成本极低，不受突变大小(20bp)影响，可对单碱基变异及大片段缺失插入进行检测。并且该试剂盒实用范围广，所检测的dna可以提取自新鲜组织、外周血以及石蜡切片样本。

技术特征：

1. 一种肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因，其特征在于，所述突变致病基因的核苷酸序列如seq id no：3所示，与sqstm1基因如seq id no：1所示的核苷酸序列相比，核苷酸变化为：人类第5号染色体第179260735位碱基g存在1个重复的位点突变。

2.用于检测权利要求1所述的肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的试剂在制备肌萎缩侧索硬化症的诊断产品中的应用。

3.一种筛选肌萎缩侧索硬化症的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含检测权利要求1所述的肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的试剂。

4.根据权利要求3所述的剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：用于扩增肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变致病基因的引物对。

5. 根据权利要求4所述的剂盒，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如seq id no：7-seq id no：8所示。

6.根据权利要求3所述的剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：dntps、taq酶、mg2+和pcr反应缓冲液。

7.根据权利要求3所述的剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：premix taq。

8.一种肌萎缩侧索硬化症的sqstm1的p.p374tfster18突变的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq id no：4所示。

技术总结
本发明提供了肌萎缩侧索硬化症的SQSTM1的p.P374TfsTer18突变致病基因及其应用，所述突变致病基因的核酸样本与SQSTM1基因的序列相比，核苷酸变化为：人类第5号染色体第179260735位碱基G存在1个重复的位点突变。本发明首次揭示了SQSTM1基因p.P374TfsTer18位点突变与肌萎缩侧索硬化症相关，进一步提供筛选肌萎缩侧索硬化症的试剂盒，用于筛选由这种突变致病基因导致的肌萎缩侧索硬化症，为患者及时发现及时治疗提供指导。同时为SQSTM1是ALS致病基因及其致病机制提供了新的证据，为ALS的精准治疗提供新靶点。

技术研发人员：柳青,张信哲,沈东超,王立静,孙晔,王高杰
受保护的技术使用者：中国医学科学院北京协和医院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29