一种高纯度低分子量黄芪多糖及其制备方法和应用

本发明涉及医药，具体涉及一种高纯度低分子量黄芪多糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、黄芪是一种补气药，为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。黄芪中含有多糖、黄酮和蛋白质等多种成分，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿等多种作用，用于药材至今已有两千多年的历史。黄芪多糖是黄芪中主要的生物活性成分之一，既往研究表明黄芪多糖平均分子量为8.7~4800 kda，主要由9种单糖组成，即葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、木糖、岩藻糖、果糖和核糖[structural features and biological activitiesof the polysaccharides from astragalus membranaceus. international journal ofbiological macromolecules, 2014, 64: 257-266.]，因其具有双向调节血糖、免疫调节、抗炎、抗辐射、抗衰老、抗肿瘤等生物活性，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。

2、多糖的生物活性与其结构直接相关，如分子量、单糖组成、糖苷键类型、三维构象等。不同植物来源、不同提取方法所制备的黄芪多糖不同。目前黄芪多糖的提取方法常用的有碱液提取法、酶解法、超声波提取法、水提法等。水提法提取率较高，但水的极性较大，目前提取方法提取得到的黄芪多糖基本都是大分子极性物质组，分子量较大，成分复杂，效果并不稳定。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种高纯度低分子量黄芪多糖及其制备方法和应用。本发明提取得到的黄芪多糖具有分子量低、纯度提升的特点。

2、本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

3、本发明提供一种高纯度低分子量黄芪多糖的制备方法，包括以下步骤：

4、s1：将黄芪的根洗净、烘干、粉碎，将黄芪粉末和水混合，使用ph调节剂将ph调至9后，加热提取，得到黄芪多糖提取液；所得提取液加热浓缩后进行旋转蒸发、干燥，干燥物过80目筛，得到黄芪粗多糖；

5、s2：黄芪粗多糖水溶，使用ph调节剂将ph调至7后，加入sevag试剂除蛋白，减压浓缩、醇沉、离心，沉淀得脱蛋白粗制黄芪多糖；

6、s3：脱蛋白粗制黄芪多糖水溶液使用deae-52阴离子交换柱进行洗脱，收集洗脱流分并合并，冷冻干燥制得低分子量黄芪多糖；

7、s4：低分子量黄芪多糖水溶液使用sephadex g-100凝胶柱进一步分离纯化，收集洗脱流分并合并，冷冻干燥制得高纯度低分子量黄芪多糖。

8、优选的，所述步骤s1中的ph调节剂为naoh溶液。

9、优选的，所述步骤s1中的加热提取条件为：100ºc提取3次，每次2~5小时。

10、优选的，所述步骤s2中的ph调节剂为hcl溶液。

11、优选的，所述步骤s3中脱蛋白粗制黄芪多糖水溶液的上样浓度为10 mg/ml~30mg/ml，洗脱液为nacl溶液，洗脱浓度梯度为0、0.1 mol/l、0.3 mol/l、0.5 mol/l。

12、优选的，所述步骤s4中低分子量黄芪多糖水溶液的上样浓度为10 mg/ml~30 mg/ml，洗脱液为水。

13、本发明还提供一种高纯度低分子量黄芪多糖，所述高纯度低分子量黄芪多糖根据所述的制备方法得到，所述高纯度低分子量黄芪多糖总糖含量大于99%，平均分子量为7.36kda；所述高纯度低分子量黄芪多糖具有如下结构式：

14、

15、上述结构式中，

16、a、b、c分别为α-d-葡萄糖-1-基；

17、d为β-d-葡萄糖-1-基；

18、e为β-d-半乳糖-1-基。

19、优选的，所述高纯度低分子量黄芪多糖由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，其中，葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖的摩尔百分比为97.51%:1.56%:0.93%。

20、本发明还提供了一种高纯度低分子量黄芪多糖的应用，所述高纯度低分子量黄芪多糖具有抗炎作用，所述应用为高纯度低分子量黄芪多糖在制备抗炎药物中的应用。

21、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

22、本发明所述的高纯度低分子量黄芪多糖aps-d1纯度大于99%，平均分子量为7.36kda，其由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成（百分摩尔比为97.51%:1.56%:0.93%），aps-d1的结构由(1→4)-α-d-glcp和(1→3)-β-d-galp为主链，末端α-d-glcp或者β-d-glcp为侧链组成。本发明提供的高纯度低分子量黄芪多糖结构清晰、分子量低、纯度高、水溶性强。经验证，本发明的高纯度低分子量黄芪多糖可以显著抑制促炎因子的分泌、促进抗炎因子分泌，具有显著抗炎活性，具有广阔的前景。

技术特征：

1.一种高纯度低分子量黄芪多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中的ph调节剂为naoh溶液。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中的加热提取条件为：100ºc提取3次，每次2~5小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中的ph调节剂为hcl溶液。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s3中，所述脱蛋白粗制黄芪多糖水溶液的上样浓度为10 mg/ml~30 mg/ml，洗脱液为nacl溶液，洗脱浓度梯度为0、0.1 mol/l、0.3 mol/l、0.5 mol/l。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s4中，所述低分子量黄芪多糖水溶液的上样浓度为10 mg/ml~30 mg/ml，洗脱液为水。

7.一种高纯度低分子量黄芪多糖，其特征在于，所述高纯度低分子量黄芪多糖根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法制备得到，所述高纯度低分子量黄芪多糖总糖含量大于99%，平均分子量为7.36 kda。

8.根据权利要求7所述的高纯度低分子量黄芪多糖，其特征在于，所述高纯度低分子量黄芪多糖由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，其中，葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖的摩尔百分比为97.51%:1.56%:0.93%。

9.权利要求7所述的高纯度低分子量黄芪多糖在制备抗炎药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种高纯度低分子量黄芪多糖及其制备方法与应用。本发明公开的高纯度低分子量黄芪多糖的纯度大于99%，平均分子量为7.36 kDa，其由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，且葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖百分摩尔比为97.51%:1.56%:0.93%。高纯度低分子量黄芪多糖通过弱碱水提取、Sevag试剂脱蛋白、阴离子交换柱DEAE‑52层析柱、Sephadex G‑100凝胶柱层析纯化制备得到。体内实验证实了高纯度低分子量黄芪多糖可以显著抑制促炎因子的分泌、促进抗炎因子分泌，具有显著抗炎活性。本发明提供的方法简便，降低生产成本，具有广阔的前景。

技术研发人员：龙江兰,王爱婷,鄢丹,张瑜
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京友谊医院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29