一种鱼腥草多糖的提取方法

本发明属于天然产物提取，具体涉及一种鱼腥草多糖的提取方法。

背景技术：

1、鱼腥草(houttuynia cordatathunb)，又名蕺菜、紫蕺等，在西南地区又名折耳根，三白草科植物蕺菜的干燥地上部分，喜欢在潮湿的土壤和温暖的环境中生长。因其具有特殊的腥味，得名“鱼腥草”，属于我国传统的药食两用的草药。《滇南本草》中记载道，鱼腥草“治肺痈咳嗽带脓血，痰有腥臭，大肠热毒，疗痔疮。”在药理学研究中，鱼腥草表现出调节机体免疫力、器官保护活性、抗菌、抗病毒活性、抗肿瘤作用以及抗炎活性等药理作用。鱼腥草主要产于我国长江流域以南区域，鱼腥草在浙江也有悠久的应用和食用历史。磐安、台州等多地产的鱼腥草均可作为药材用。

2、多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。对于构成生物体而言，多糖是一类十分重要的有机化合物。它是生命的物质基础，并与种种生理机能有着密切的关系。近年来，随着不断深入的研究多糖，多糖的多种生物学功能日益受到了研究人员的高度重视。大量研究表明，多糖的生物活性主要表现在免疫调节活性、抗肿瘤活性、抗病毒活性、抗氧化活性、血脂调节活性以及血糖调节活性等，在药品开发和食品保健领域具有广泛的应用前景。鱼腥草中富含多糖，因此，以鱼腥草为原料获取鱼腥草多糖具有十分重要的研究意义。

3、低共熔溶剂(des)是近些年才快速兴起的一类优良绿色溶剂。与传统有机溶剂相比，低共熔溶剂具有价格低廉、配制简单、化学性质稳定、易于储存、无毒性及可生物降解等优点，是一种理想的传统有机溶剂替代溶剂和天然产物绿色提取溶剂。低共熔溶剂在天然产物提取方面有着广泛应用，已有研究人员报道用来提取多糖、酚类、多糖、蛋白质、花青素和生物碱等物质。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种鱼腥草多糖的提取方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种鱼腥草多糖的提取方法，所述方法如下：

4、将鱼腥草烘干，粉碎，得到鱼腥草粉末；所得鱼腥草粉末经纤维素酶和果胶酶的混合酶液酶解后，加入低共熔溶剂进行超声提取，之后离心取上清液，即得鱼腥草多糖提取液；

5、优选纤维素酶占总酶量(纤维素酶和果胶酶合计)的80％；

6、优选低共熔溶剂由氯化胆碱、丙三醇和水组成，并且氯化胆碱与丙三醇的摩尔比为1：3，含水量40％；

7、优选鱼腥草粉末与低共熔溶剂的料液比为1：60，g/ml；

8、优选超声提取的功率240w，时间2h。

9、进一步，可使用苯酚-硫酸比色法测定鱼腥草多糖提取液中的多糖含量，具体如下：

10、步骤1，称取50mg葡萄糖溶于去离子水中，至50ml容量瓶定容，即得到1mg/ml葡萄糖标准溶液，作为母液，于室温下保存待用；

11、步骤2，将母液分别稀释成0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml葡萄糖标准溶液，分别取1ml稀释后的葡萄糖溶液与1ml 5％苯酚溶液，利用涡旋震荡仪混匀后加入5ml浓硫酸，混匀静置30min，在490nm波长下测定吸光度；

12、步骤3，以葡萄糖浓度为横坐标，490nm波长下吸光度为纵坐标，制作葡萄糖浓度标准曲线，得到线性方程：y＝9.2333x+0.0172，r2＝0.9991；

13、步骤4，将所得到的鱼腥草多糖提取液代替葡萄糖标准溶液，按步骤2的方法测定稀释的多糖提取液于490nm波长下的吸光度值；

14、步骤5，根据步骤3得到的葡萄糖标准曲线回归方程，计算鱼腥草多糖提取液中多糖含量；公式如下：多糖含量(mg/g)＝[(y-0.0172)×v×n]/(9.2333×m)；其中，y为490nm波长下的吸光度值，v为鱼腥草多糖提取液体积(ml)，n为鱼腥草多糖提取液稀释倍数；0.0172为线性回归方程的截距，9.2333为该方程的斜率，m为鱼腥草粉末干重(g)。

15、本发明还提供了鱼腥草多糖提取方法的工艺优化过程，具体如下：

16、(1)筛选出5个影响鱼腥草多糖提取率的因素：提取溶剂的种类、低共熔溶剂中氢键受体和氢键供体的摩尔比、低共熔溶剂的含水量、纤维素酶在总酶量中的占比、提取料液比；

17、(2)以鱼腥草多糖提取液中多糖含量为指标，根据步骤(1)筛选出的5个因素进行单因素实验；

18、(3)经过单因素实验选取对鱼腥草多糖提取液中多糖含量影响较为显著的三个因素：低共熔溶剂中氢键受体和氢键供体的摩尔比(a)、提取料液比(b)、纤维素酶在总酶量中的占比(c)为自变量，以鱼腥草多糖提取液中多糖含量为响应值，采用box-behnken设计法设计三因素三水平的响应面分析试验；

19、应用统计学软件design-expert 8.0.6对上述响应面试验设计数据进行回归拟合分析，得到鱼腥草提取液多糖含量(y)的二次多项回归方程预测模型：

20、y＝14.682+(6.2500e-003)a-0.2325b+0.06625c-0.0425ab-0.0525bc-0.076a2-0.6185b2-0.

21、321c2

22、应用统计学软件design-expert 8.0.6对提取工艺进行优化，得到最佳提取工艺条件，并根据所得最佳提取工艺进行验证试验。

23、经过上述工艺优化过程，得出的最佳提取工艺条件为：低共熔溶剂氢键受体和氢键供体摩尔比1：3.1、提取料液比1：58g/ml、纤维素酶在总酶量中的占比82.4％；鱼腥草多糖提取液多糖含量预测值为14.78mg/g(鱼腥草粉干重)。

24、本发明的有益效果在于：

25、本发明所提供的鱼腥草多糖的提取方法以新型绿色低共熔溶剂为提取剂，避免了传统有机溶剂的使用，从根本上解决了多糖传统化学提取中有机溶剂的大量使用所带来的高成本、高风险、高危害以及高污染等一系列问题。

26、本发明所提供的鱼腥草多糖的提取方法将低共熔溶剂与酶解与超声辅助提取三种提取方式有机地结合到鱼腥草多糖地提取中，与常规提取方法相比，该方法新颖、绿色环保、且鱼腥草多糖提取率高，提取成本低，提取条件温和，提取工艺简单且稳定可靠，提取能耗低。

技术特征：

1.一种鱼腥草多糖的提取方法，其特征在于，所述方法如下：

2.如权利要求1所述的鱼腥草多糖的提取方法，其特征在于，低共熔溶剂中氯化胆碱与丙三醇的摩尔比为1：3，低共熔溶剂的含水量为40％。

3.如权利要求1所述的鱼腥草多糖的提取方法，其特征在于，鱼腥草粉末与低共熔溶剂的料液比为1：60，g/ml。

4.如权利要求1所述的鱼腥草多糖的提取方法，其特征在于，纤维素酶占总酶量的80％。

5.如权利要求1所述的鱼腥草多糖的提取方法，其特征在于，超声提取的功率240w，时间2h。

技术总结
本发明公开了一种鱼腥草多糖的提取方法，所述方法如下：将鱼腥草烘干，粉碎，得到鱼腥草粉末；所得鱼腥草粉末经纤维素酶和果胶酶的混合酶液酶解后，加入低共熔溶剂进行超声提取，之后离心取上清液，即得鱼腥草多糖提取液；其中，低共熔溶剂由氯化胆碱、丙三醇和水组成；该方法提取的鱼腥草多糖与常规提取法相比含量提高了147％，该方法新颖、高效、绿色环保，避免了有机溶剂的大量使用，能够有效缓解环境污染问题，在天然产物中活性成分的提取方面具有广泛的应用前景。

技术研发人员：饶佳悦,杨胜利,陈建澍,张慧,刘兴泉,肖功年
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29