从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法

本发明属于生物农药，具体涉及高纯度尼莫克汀的制备。

背景技术：

1、尼莫克汀(nemadectin)分子式为c36h52o8，cas号为102130-84-7，由一种链霉素菌发酵产生的十六环内酯，外观为白色结晶粉末或白色晶体，具有驱虫活性、可作为广谱杀螨剂，对牛羊犬胃肠道寄生虫的自然感染都是非常有效的。广泛应用于制备新型抗寄生虫药莫西克汀(moxidectin)。尼莫克汀结构式如下：

2、

3、专利cn104628802 b公开了一种从发酵液中提取并纯化尼莫克汀的方法，该方法将发酵液进行絮凝过滤，得到湿菌丝渣，然后用非水溶性的有机溶剂萃取，将得到的提取液进行酸洗、碱洗，接着对尼莫克汀利用含苯环的酰氯或者酸酐进行衍生化处理，将衍生物结晶分离，最后对其进行水解还原得到尼莫克汀。但此方法所得的尼莫克汀的质量及纯度均不够高。

4、专利cn104292283 a公开了尼莫克汀的纯化方法，该方法将尼莫克汀粗品与液态有机盐混合，过滤，得到滤液，将滤液与c5-c20烷烃混合，洗涤，分离得到液态有机盐溶液，低温结晶后得尼莫克汀。但此方法结晶成功率低，实验操作难度系数较高。

5、专利cn103772458 a公开了一种尼莫克汀的提纯方法，该方法通过用两种不同极性大小的有机溶剂对尼莫克汀菌渣进行萃取，第二次萃取溶剂极性小于第一次，然后将萃取液浓缩后结晶。专利cn106046020 b同样也是利用两种不同极性的有机溶剂对菌渣进行萃取，与专利cn103772458 a不同之处在于专利cn106046020 b采用梯度降温的结晶方法。但这两个方法都存在不适用于低纯度的尼莫克汀粗品，否则存在难以成功结晶的问题。

6、专利cn108117562 a公开了一种制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，该方法利用有机溶剂萃取、活性炭脱色后，制备色谱分离得高纯度尼莫克汀，但此方法存在非水溶性有机溶剂中活性炭脱色效果不佳、操作难度系数高，对设备要求高，不利于工业化生产等问题。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供了一种从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，该方法操作简单，溶剂易于回收，适用于工业化生产。

2、本发明提供的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，包括下述步骤：

3、步骤1：将尼莫克汀菌丝体用有机溶剂萃取，抽滤除去不溶物，得到尼莫克汀萃取液；

4、步骤2：旋去尼莫克汀萃取液中的部分有机溶剂，加入活性炭，在有机溶剂沸点温度下脱色，冷却后抽滤除去活性炭，旋干滤液得到尼莫克汀粗品ⅰ；

5、步骤3：将尼莫克汀粗品ⅰ溶解于非水溶性有机溶剂中，水洗，干燥有机相，旋干溶剂得到尼莫克汀粗品ⅱ；

6、步骤4：将尼莫克汀粗品ⅱ通过硅胶柱色谱快速分离，得到纯度82％～85％的尼莫克汀；

7、步骤5：将步骤4的尼莫克汀用叔丁基二苯基氯硅烷进行上保护反应，得上保护产物粗品；

8、步骤6：将上保护产物粗品通过硅胶柱色谱分离后结晶，得到纯度为93％～96％的上保护产物；

9、步骤7：将上保护产物经脱保护处理，得到纯度为93％～96％的尼莫克汀。

10、上述步骤1中，优选所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正庚烷中任意一种或多种。

11、上述步骤1中，所述萃取的温度为有机溶剂的沸点温度，优选萃取时间为1小时，萃取1～2次。

12、上述步骤2中，优选所述活性炭的加入量为步骤1所得萃取液中尼莫克汀粗品质量的7％～10％。

13、上述步骤3中，优选所述非水溶性有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷中任意一种。

14、上述步骤4中，优选硅胶柱色谱分离所用洗脱剂为乙酸乙酯与二氯甲烷体积比1:20的混合液或者甲醇与二氯甲烷体积比为1:80的混合液。

15、上述步骤5中，优选上保护反应以咪唑作碱，溶剂为二氯甲烷，反应温度为20～40℃，反应时间3～5小时。反应方程式如下所示：

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17、上述步骤6中，优选硅胶柱色谱分离的洗脱剂为工业纯二氯甲烷，结晶所用溶剂为分析纯乙腈，室温下结晶。

18、上述步骤7中，优选脱保护处理所用试剂为对甲苯磺酸，甲醇为反应溶剂，反应温度为-10℃至室温，反应时间为2～6小时。

19、本发明的有益效果如下：

20、1、本发明步骤4中采用硅胶柱色谱分离的洗脱剂为乙酸乙酯与二氯甲烷体积比为1:20的混合液，较传统硅胶柱色谱分离方法更有效，尼莫克汀纯度提高10％。

21、2、本发明步骤5中采用叔丁基二苯基氯硅烷作为上保护试剂，该上保护试剂带有两个苯环，质量分数大，较传统的上保护试剂所得的上保护反应产物更容易固化、结晶；用响应面法对尼莫克汀的上保护反应进行了优化，得到了最佳反应条件。

22、3、本发明操作简单，成本较低，所得尼莫克汀纯度高，可用于尼莫克汀标准品的制备，可以应用于工业化生产。

技术特征：

1.一种从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤1中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正庚烷中任意一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，所述萃取的温度为有机溶剂的沸点温度，萃取时间为1小时，萃取1～2次。

4.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤2中，所述活性炭的加入量为步骤1所得萃取液中尼莫克汀粗品质量的7％～10％。

5.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤3中，所述非水溶性有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷中任意一种。

6.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤4中，硅胶柱色谱分离所用洗脱剂为乙酸乙酯与二氯甲烷体积比1:20的混合液或者甲醇与二氯甲烷体积比为1:80的混合液。

7.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤5中，上保护反应选用咪唑作碱，溶剂为二氯甲烷，反应温度为20～40℃，反应时间3～5小时。

8.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤6中，硅胶柱色谱分离所用洗脱剂为工业纯二氯甲烷，结晶所用溶剂为分析纯乙腈，室温下结晶。

9.根据权利要求1所述的从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，其特征在于，步骤7中，脱保护处理所用试剂为对甲苯磺酸，甲醇为反应溶剂，反应温度为-10℃至室温，反应时间为2～6小时。

技术总结
本发明公开了一种从菌丝体中提取并获得高纯度尼莫克汀的方法，通过有机溶剂萃取、活性炭脱色、非水溶性有机溶剂萃取、硅胶柱色谱快速分离，获得纯度为82％～85％的尼莫克汀；然后利用叔丁基二苯基氯硅烷进行尼莫克汀5‑位上保护，得到纯度为93％～96％的上保护产物，再去保护，得到纯度为93％～96％的尼莫克汀，可用于尼莫克汀标准品的制备。本发明方法操作简单，成本较低，可以应用于工业化生产。

技术研发人员：王伟,李玥,李宝林,吕泰明,李霞,王晓敏,王洛菊
受保护的技术使用者：陕西师范大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29