一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取和检测方法与流程

本发明涉及产品检测分析，具体涉及一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取和检测方法。

背景技术：

1、我国的水产养殖业持续快速发展，养殖饲料的用量日益增加。立足国内丰富的饲料原料资源，寻找优质廉价、来源广泛的替代植物蛋白源成为国内外水产动物营养专家的一种研究难题。

2、红花籽，中药称“白平子”，是红花safflower(carthamustinctorius l)的种子。红花籽粕是红花籽提取红花油后的副产品。去油红花籽粕中含较优质的蛋白质，无毒、无异味，并含18种氨基酸，是一种较优质的蛋白质，经加工处理可作为一种良好的新兴蛋白资源应用于食品、医药和饲料等方面。但国内外对其综合利用的研究非常少，造成了蛋白质资源的浪费。红花籽饼粕作为蛋白质饲料在我国水产养殖业上应用量极少，在红花籽饼粕开发应用中还存在许多问题，诸如对于红花籽饼粕作为饲料资源认识不足、对其营养特点还缺乏研究、鱼产品日粮中适宜的添加量尚未确定等。因此，为了提高红花籽饼粕的利用效率，需要进一步开展相关试验研究。研究发现，红花籽粕中含有2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷，2-羟基牛蒡子苷具有拮抗、抗高血压、血小板聚集抑制的作用，罗汉松树脂苷具有较强的抗氧化、抗病毒等活性。红花籽粕虽然干物质消化率要低于大豆粕、棉籽粕、菜籽粕和大豆、膨化大豆，但是其蛋白质消化率却高于这些蛋白质饲料。表明大豆等饲料中其他营养物质(如糖类和脂肪)的消化率可能不及红花籽粕和葵粕等饲料。另2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷为木脂素，罗汉松树脂苷是导致红花籽粕带有浓烈苦味的因素，而2-羟基牛蒡苷则可导致动物腹泻或鱼产品的利用性及适口性均较差的主要因素。

3、目前，研究红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷较少，现有文献(专利号为cn1863542a中)公开了植物种子提取物及其制备方法，其中提取了红花籽粕中的2-羟基牛蒡子苷，该发明用水洗涤脱脂后的植物种子，从得到的洗涤处理物中用有机溶剂提取出植物种子提取组合物，该方法操作较复杂，过程中易损失，易降低提取效率，同时建立的检测方法中洗脱溶剂使用了三氟乙酸，三氟乙酸是一种强羧酸，酸性比乙酸强十万倍，具有轻微毒性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取和检测方法，解决了现有方法操作较复杂，过程中易损失，易降低提取效率，以及检测2-羟基牛蒡子苷洗脱溶剂酸性较强，且具有轻微毒性的问题，弥补了现有罗汉松树脂苷的检测方法空白，同时提取方法的回收率高达99％以上。

2、为了达到上述目的，本发明提供了一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取方法，该方法包含：

3、(1)向粒径≤75μm的红花籽粕或含有红花籽粕的产品加入乙醇溶液，在35℃的超声下进行提取，对提取液进行合并得到提取物；

4、(2)对提取物进行第一次离心，于50℃蒸发且不蒸干，依次加入乙腈溶解、正乙烷除脂，混匀，第二次离心，过滤，得到含有2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的溶液。

5、优选地，在步骤(1)中，所述乙醇溶液的质量浓度为80％；所述超声的时间为20min。

6、优选地，在步骤(2)中，所述第一次离心和第二次离心的速度均为8000r/min；所述过滤是用0.45μm有机相滤膜进行的。

7、本发明提供了一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的检测方法，该方法包含：

8、将含有2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的溶液作为待测溶液，用高效液相色谱检测，经c18色谱柱分离，通过紫外检测器进行测定2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷含量；

9、所述含有2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的溶液中2-羟基牛蒡子苷的浓度≥0.03μg/ml、罗汉松树脂苷的浓度≥0.12μg/ml；

10、当检测2-羟基牛蒡子苷时，测试条件如下：

11、流动相：体积比为90∶10的超纯水和乙腈，流速：1.000ml/min；梯度洗脱：梯度洗脱；其中，梯度洗脱的条件设置为：0min时，流动相中乙腈的体积含量为10％；20min时，流动相中乙腈的体积含量为50％；40min时，流动相中乙腈的体积含量为10％；

12、当检测罗汉松树脂苷时，测试条件如下：

13、流动相：体积比为82∶18的超纯水和乙腈，流速：1.000ml/min；梯度洗脱：梯度洗脱；其中，梯度洗脱的条件设置为：0min时，流动相中乙腈的体积含量为18％；20min时，流动相中乙腈的体积含量为28％；25min时，流动相中乙腈的体积含量为90％；35min时，流动相中乙腈的体积含量为90％；36min时，流动相中乙腈的体积含量为18％；48min时，流动相中乙腈的体积含量为18％。

14、优选地，当检测2-羟基牛蒡子苷时，色谱柱：ods-250mm c18，尺寸为4.6×250mm，紫外检测器波长278nm。

15、优选地，当检测罗汉松树脂苷时，色谱柱：sb-c18(罗汉松树脂苷)，尺寸为4.6×150mm，紫外检测器波长280nm。

16、优选地，所述c18色谱柱的柱温均为35℃。

17、优选地，所述高效液相色谱的进样量均为20μl。

18、本发明提供了一种如所述的检测方法在检测鱼产品饲料中2-羟基牛蒡子苷或/和罗汉松树脂苷含量中的应用。

19、本发明的一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取和检测方法，解决了现有方法操作较复杂，过程中易损失，易降低提取效率，以及检测2-羟基牛蒡子苷洗脱溶剂酸性较强，且具有轻微毒性的问题，具有以下优点：

20、本发明确定了从红花籽粕提取2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的条件，通过80％乙醇进行低温超声提取，提取方法简单，回收率较高(均高达99％及以上)，建立了2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷高效液相色谱的分析方法，利用紫外检测器分别在278nm和280nm下测定2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的含量，可用来衡量从红花籽粕中提取2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的优化程度。本发明对红花籽粕在制备鱼产品饲料中具有重要的实际意义，为探索鱼产品饲料中适宜的红花籽粕添加量提供数据支持。

技术特征：

1.一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取方法，其特征在于，该方法包含：

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述乙醇溶液的质量浓度为80％；所述超声的时间为20min。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述第一次离心和第二次离心的速度均为8000r/min。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述过滤是用0.45μm有机相滤膜进行的。

5.一种红花籽粕中2-羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的检测方法，其特征在于，该方法包含：

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，当检测2-羟基牛蒡子苷时，色谱柱：ods-250mm c18，紫外检测器波长278nm。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，当检测罗汉松树脂苷时，色谱柱：sb-c18，紫外检测器波长280nm。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述c18色谱柱的柱温均为35℃。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的进样量均为20μl。

10.一种如权利要求5～9中任一项所述的检测方法在检测鱼产品饲料中2-羟基牛蒡子苷或/和罗汉松树脂苷含量中的应用。

技术总结
本发明公开了一种红花籽粕中2‑羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的提取和检测方法，该方法包含：向粒径≤75μm的红花籽粕或含有红花籽粕的产品加入乙醇溶液，在35℃超声下提取若干次；对提取物第一次离心，于50℃蒸发且不蒸干，依次加入乙腈、正乙烷混匀，过滤。本发明解决了现有方法操作较复杂，过程中易损失，易降低提取效率，以及检测2‑羟基牛蒡子苷洗脱溶剂酸性较强，且具有轻微毒性的问题。本发明建立了2‑羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷高效液相色谱的分析方法，利用紫外检测器分别在278nm和280nm下测定2‑羟基牛蒡子苷和罗汉松树脂苷的含量，为探索鱼产品饲料中红花籽粕的适宜添加量提供数据支持。

技术研发人员：王雪,王甜,高攀,张钰,胡建勇,李晓东,李林,孙世萍
受保护的技术使用者：新疆维吾尔自治区水产科学研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29