一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法与流程

本发明涉及饲料添加剂领域，具体涉及一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法。

背景技术：

1、本节中的陈述仅提供与本申请公开相关的背景信息，并且可能不构成现有技术。

2、乳仔猪阶段存在内源性蛋白酶源分泌不足，同时胃酸分泌不足又导致蛋白酶激活不足，使乳仔猪对饲料蛋白质的消化能力降低，在生产上出现腹泻率高、生长速度慢、料肉比高等问题。因此，在饲料中添加有效的外源性蛋白酶，可以提升乳仔猪对饲料蛋白质的消化能力，从而改善腹泻、生长和料比。目前，酶制剂厂家通常向饲料企业或养殖企业推荐多种蛋白酶复合的酶制剂，而饲料企业或养殖企业通常只能通过动物实验来评价该类酶制剂是否有效。部分企业没有动物实验基地，或即使开展动物实验，由于影响动物实验效果的因素较多，往往难以作出客观的评价。给饲料企业或者养殖企业在饲用蛋白酶使用上带来了评价成本高、饲喂效果不佳、成本浪费等问题。

3、现有技术公开了一种猪饲料非淀粉多糖酶谱的快速筛选方法，采用体外模拟消化法，模拟胃消化缓冲液的ph设置为2.0，模拟胃部消化时间2-6h；模拟肠道消化缓冲液的ph设置为6.2-6.5，消化20-24h。该现有技术的消化参数均为大猪的消化参数，而对于刚断奶的乳猪而言，其胃肠道的结构和功能发育尚不全面，对饲料等的消化率与大猪不同；因此现有针对大猪的胃肠道特征筛选出的蛋白酶并不适用与乳猪的消化状况，筛选出的蛋白酶实用性较低，饲料企业或养殖企业仍然需要借助动物实验来准确评价蛋白酶的有效性，面临评价周期长，影响因素多，成本浪费等问题。

4、因此，开发出简单、快速、较准确且成本较低的饲用蛋白酶评价方法显得非常必要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于：针对目前乳仔猪饲用蛋白酶的评价成本高、结果不准确的问题，提供了一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，针对乳仔猪饲用蛋白酶需要经过饲料加工过程、乳仔猪胃环境的影响、最终到达肠道，在肠道环境中发挥作用的特点进行设计，评价方法简单、快速、稳定，广泛适用于酸性、中性、碱性蛋白酶的筛选和评价。通过这种方法可以筛选出耐饲料加工性能好，同时又适应乳仔猪胃肠道生理环境的单一蛋白酶或者组合蛋白酶。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，包括步骤s1：体外模拟酶解实验；所述体外模拟酶解实验具体包括如下子步骤：

4、步骤s1.1：称取乳仔猪料于烧杯中，加入2.3-3倍乳仔猪保育料重量的水，用1mol/l的盐酸溶液调节ph至3.5，得到第一阶段酶解料糜；优选加入2.5倍乳仔猪保育料重量的水；

5、步骤s1.2：将上述第一阶段酶解料糜于搅拌水浴锅中39℃预热30min，加入酶液，搅拌均匀，39℃保温3h，保温期间间隔20min搅拌一次，每次搅拌时间1min；

6、步骤s1.3：计时结束后，迅速加入2mol/l的氢氧化钠溶液调节ph至6.5，得到第二阶段酶解料糜，继续于39℃搅拌，保温12h，保温期间间隔20min搅拌一次，每次搅拌时间1min；

7、步骤s1.4：提前开启恒温干燥箱，设置105℃，待步骤s1.3计时结束后，将酶解料糜置于干燥箱中进行烘干，待料糜干燥后进行粉碎；

8、步骤s1.5：检测料糜的酶解程度。

9、根据一种优选的实施方式，步骤s5中，“检测料糜的酶解程度”具体为：检测样品酸溶蛋白指标，并根据样品酸溶蛋白指标判断料糜的酶解程度，检测方法按照gb/t22492附录b规定执行。

10、通常体外模拟酶解效果以消化率结果作为主要评估指标，但消化率检测过程较为复杂，影响因素较多，往往差异不明显，因此本方法选择代表小肽含量高低的酸溶蛋白含量作为评价指标，检测更简便，重复性好，差异显著。

11、根据一种优选的实施方式，步骤s1.2中所述酶液添加量为25000u/kg。

12、根据一种优选的实施方式，在步骤s1之前还设置有步骤s0：耐热性测试实验；在步骤s1之后还设置有步骤s2：饲喂实验。

13、对通过步骤s0：耐热性测试实验的酶进行步骤s1：体外模拟酶解实验，对步骤s1：体外模拟酶解实验合格的酶进行步骤s2：饲喂实验，筛选出耐热性、酶解效果较好和实际饲喂效果好的蛋白酶。企业能够根据实际情况和需要选择是否进行饲喂实验。

14、根据一种优选的实施方式，所述耐热性测试实验具体包括以下子步骤：

15、s0.1：稀释酶制剂样品；

16、s0.2：高温水浴加热；

17、s0.3：检测水浴前后的酶活力。

18、根据一种优选的实施方式，步骤s0.1中，稀释后的蛋白酶浓度为5000u/ml。

19、根据一种优选的实施方式，步骤s0.2具体为：分别在60℃、70℃、80℃条件下水浴加热3分钟。

20、根据一种优选的实施方式，步骤s2：饲喂实验步骤具体包括以下子步骤：

21、步骤s2.1：向乳仔猪饲料中加入蛋白酶；

22、步骤s2.2：用含有不同蛋白酶的乳仔猪饲料分别对多组乳仔猪进行饲喂；

23、步骤s2.3：每天记录乳仔猪的采食量和重量，计算料肉比。

24、根据一种优选的实施方式，步骤s2.1中，加入蛋白酶的量为20000u/kg。

25、根据一种优选的实施方式，步骤s2.2中，所述乳仔猪为45日龄，记录时长为25天。

26、与现有的技术相比本发明的有益效果是：

27、1、一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，基于对乳仔猪的肠道环境和蠕动规律的研究，与其它以中大猪生理条件为实验参数的方法相比，设计了更符合乳仔猪生理特点的体外模拟酶解实验条件，使得体外模拟酶解实验的实验结果更加接近乳仔猪饲料的真实消化情况，进而提升体外模拟酶解实验的实验结果准确性，提升蛋白酶的筛选效率，更具有实用意义；使用体外酶解实验与其它评估方法相比，具有周期短、操作简单、重复性好、成本低等优点；

28、2、一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，综合耐热性测试实验、体外模拟酶解实验和饲喂实验多个实验结果，对蛋白酶的饲用效果进行综合评价，弥补单一评价方法仅能够针对蛋白酶的单一尺度进行评价的缺陷，筛选出的蛋白酶能够适应生产过程中的不利因素，并且高度适应乳猪的实际肠道消化环境，使最终实验筛选出的蛋白酶能够在实际生产、饲喂过程中发挥较好的效果；

29、3、一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，为酶在乳仔猪饲料中的合理使用提供科学依据，为饲用酶制剂饲用效果的快速评价提供新的方法。

技术特征：

1.一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，包括步骤s1：体外模拟酶解实验，步骤s1具体包括如下子步骤：

2.根据权利要求1所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s1.5中，检测料糜的酶解程度具体为：检测样品酸溶蛋白指标，并根据样品酸溶蛋白指标判断料糜的酶解程度。

3.根据权利要求1所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s1.2中所述酶液添加量为25000u/kg。

4.根据权利要求1所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，在步骤s1之前还设置有步骤s0：耐热性测试实验；在步骤s1之后还设置有步骤s2：饲喂实验，

5.根据权利要求4所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，所述步骤s0具体包括以下子步骤：

6.根据权利要求5所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s0.1中，稀释后的蛋白酶浓度为5000u/ml。

7.根据权利要求5所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s0.2具体为：分别在60℃、70℃、80℃条件下水浴加热3分钟。

8.根据权利要求4所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s2具体包括以下子步骤：

9.根据权利要求8所述的一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，其特征在于，步骤s2.1中，加入蛋白酶的量为20000u/kg。

技术总结
本发明涉及饲料添加剂领域，公开了一种乳仔猪饲料用蛋白酶的评价方法，包括步骤S1：体外模拟酶解实验，所述体外模拟酶解实验具体包括以下子步骤：步骤S1.1：称取乳仔猪保育料，加水，调节pH至3.5，得到第一阶段酶解料糜；步骤S1.2：将第一阶段酶解料糜加入酶液，39℃保温3h，保温期间间隔20min搅拌一次，每次搅拌1min；步骤S1.3：调节pH至6.5，得到第二阶段酶解料糜，继续于39℃搅拌保温12h，保温期间间隔20min搅拌一次；步骤S1.4：将酶解料糜置于干燥箱中进行烘干，待料糜干燥后进行粉碎；步骤S1.5：检测料糜的酶解程度。本发明以乳仔猪的胃肠道生理特点设计体外酶解实验参数，筛选的结果更具实用性。

技术研发人员：蒋卓君,肖伟伟
受保护的技术使用者：成都美溢德生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17