Beclin1用作冠状动脉粥样硬化诊断生物标志物的应用

本发明属于分子标志物，特别涉及beclin1及其表达量检测试剂在制备冠状动脉粥样硬化诊断试剂中的应用。

背景技术：

1、冠状动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)是导致心血管不良事件发生的“元凶”之一，其是多因素参与、多种细胞功能紊乱进展的慢性复杂性疾病。内皮细胞功能障碍通过刺激趋化因子与促炎因子释放和促进单核细胞迁移至动脉中膜是动脉粥样硬化重要的始动因素之一，伴随功能细胞如血管平滑肌细胞、巨噬细胞的级联炎症反应，加速斑块进展与不稳定发展。现有的临床手段仍不能满足冠状动脉粥样硬化早期患者的精准识别与早期干预，需要寻找可靠的非侵入性诊断生物标志物来帮助冠状动脉粥样硬化患者的临床诊断。

2、beclin1是关键的自噬蛋白之一，一些蛋白通过与beclin1不同结构域结合而调控自噬水平。其中，beclin1的bh3结构域与凋亡抑制因子bcl-2结合，而在刺激因素下与bcl-2解离，促进beclin1依赖的囊泡成核及自噬发生。

3、目前关于beclin1的研究多围绕其作为明星自噬蛋白的生物功能展开，而少有研究涉及beclin1的临床价值，本发明探索beclin1作为as诊断生物标志物将有助于为冠心病的临床早期诊治、改善预后提供有效靶点与新思路。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种冠状动脉粥样硬化的诊断生物标志物beclin1蛋白，并提供其应用，该基因及其检测试剂可用作冠状动脉粥样硬化诊断生物标志物，可制备冠状动脉粥样硬化诊断试剂，同时以beclin1为基础建立的冠状动脉粥样硬化发病风险列线图预测模型可应用于临床发病风险评估指导。

2、为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：一种诊断冠状动脉粥样硬化或预测发病风险的标志物beclin1，所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3、检测beclin1表达量的制剂在制备诊断冠状动脉粥样硬化发病风险的诊断试剂中的应用，所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、进一步的，检测制剂通过检测被试者pbmc中beclin1的表达量，其较健康对照组有显著上调，以此来判断被试者有冠状动脉粥样硬化。

5、一种诊断冠状动脉粥样硬化的诊断试剂，包括检测beclin1表达量的制剂，所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

6、一种诊断冠状动脉粥样硬化的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒中包括上述的诊断试剂。

7、进一步的，诊断试剂包括扩增引物，其中正向引物核苷酸序列如seq id no.2所示，反向引物核苷酸序列如seq id no.3所示。

8、一种基于beclin1基因表达的冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型，所述冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型采用以下步骤构建：

9、步骤一：获取健康对照组与冠心病组患者的临床预测因子组数据，所述预测因子包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、高血压史、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、beclin1蛋白；

10、步骤二：利用r中glm函数构建logistic模型，分析预测因子的风险分数，使用rms包构建nomogram相关模型并进行可视化；

11、步骤三：分析模型方差膨胀因子，模型评价通过似然比检验、c指数、拟合优度检验完成。

12、一种上述基于beclin1基因表达的冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型在预测冠状动脉粥样硬化发病风险上的应用。

13、本发明在人冠状动脉粥样硬化组织中证实了beclin1蛋白在as不同分期间的变化趋势，发现beclin1蛋白整体表达随as进展而降低，提示二者间存在关联；在冠心病组与健康对照组外周血来源pbmc中使用qpcr对beclin1转录水平进行检测，验证其表达水平在冠心病组中显著升高，roc曲线分析提示其具有较高as诊断生物标志物效能；联合beclin1、临床资料及血清指标构建冠状动脉as风险预测列线图用于临床发病风险评估，紧密结合基础实验与临床分析，强调临床应用价值。

14、本发明提供了一种适用于冠状动脉粥样硬化分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，该基因能有效的区分正常人和冠状动脉粥样硬化患者，应用该基因表达水平进行诊断，可以早期发现冠心病患者，降低冠心病死亡率，改善患者预后。目前冠状动脉粥样硬化性心脏病的主要诊断方法存在手术危险系数高、辐射大等风险，通过收集患者外周血进行检测，具有创伤小、可重复性好等优点，更易于被接受。

技术特征：

1.一种诊断冠状动脉粥样硬化或预测发病风险的标志物beclin1，其特征在于：所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.检测beclin1表达量的制剂在制备诊断冠状动脉粥样硬化发病风险的诊断试剂中的应用，其特征在于，所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述检测制剂通过检测被试者pbmc中beclin1的表达量，其较健康对照组有显著上调，以此来判断被试者有冠状动脉粥样硬化。

4.一种诊断冠状动脉粥样硬化的诊断试剂，其特征在于：包括检测beclin1表达量的制剂，所述beclin1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

5.一种诊断冠状动脉粥样硬化的诊断试剂盒，其特征在于：所述诊断试剂盒中包括权利要求4所述的诊断试剂。

6.根据权利要求5所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述诊断试剂包括扩增引物，其中正向引物核苷酸序列如seq id no.2所示，反向引物核苷酸序列如seq id no.3所示。

7.一种基于beclin1基因表达的冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型，其特征在于：所述冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型采用以下步骤构建：

8.一种根据权利要求7所述基于beclin1基因表达的冠状动脉粥样硬化发病风险预测模型在预测冠状动脉粥样硬化发病风险上的应用。

技术总结
本发明公开了一种用于诊断冠状动脉粥样硬化的生物标志物Beclin1，以及其转录本表达量检测制剂在制备冠状动脉粥样硬化诊断试剂中的应用。本发明通过检测人冠状动脉粥样硬化组织中Beclin1蛋白表达改变趋势与临床标本PBMC中Beclin1转录表达差异改变，确定Beclin1作为诊断冠状动脉粥样硬化的生物标志物，构建基于Beclin1的冠状动脉粥样硬化风险预测列线图用于临床发病风险评估指导。本发明提出了一种冠状动脉粥样硬化的早期诊断生物标志物Beclin1，用于冠状动脉粥样硬化性心脏病生物学鉴定及临床应用，并为诊疗动脉粥样硬化提供了新的分子标记和干预靶点。

技术研发人员：贾恩志,张鑫,李城城,贾侨伟,任梦梦,别恒杰,王彦君,迟博予,符亚红,何书,周晗笑
受保护的技术使用者：江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/5/8