一种降解黄曲霉毒素B1及臭气物质的干酪乳酪杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物发酵，具体为一种降解黄曲霉毒素b1及臭气物质的干酪乳酪杆菌及其应用。

背景技术：

1、黄曲霉毒素b1是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一大类结构相似的次级代谢产物，是目前已知的最稳定、毒性最强的毒素，世界范围内大部分的粮食和动物饲料受到霉菌毒素的污染，对动物健康与畜禽养殖业可持续发展构成严重威胁。据国内外研究报道，过量摄入黄曲霉毒素b1具有致癌、致畸、免疫抑制等毒性效应，对畜禽的生长、肠道功能、免疫功能、器官发育等方面造成严重影响，威胁畜禽养殖的健康发展。目前物理、化学法已经广泛用于降解黄曲霉毒素b1，但这些方法普遍存在脱毒效率低、降低营养成分，存在化学残留或影响环境等问题。微生物或其代谢物将毒素转化为低毒或无毒产物，具有低毒性、低污染、低残留，高效、特异性强、安全等优点，是降解黄曲霉毒素b1的热点研究方向。研究表明，许多微生物，如芽孢杆菌、乳杆菌属和酵母菌属等细菌和真菌以及混合菌群均对黄曲霉毒素b1具有降解能力。

2、在标准化和现代化畜牧生产中，除了重点关注动物的营养健康，对绿色生态养殖要求也越来越高。随着畜禽生产管理集约化、规模化、现代化水平不断提高，生产效率大幅提升，有效保障了畜产品供给。但是，养殖场过程中也会排放大量氨气、硫化氢等有害气体均未得到科学有效处理，出现污染空气，危害动物和人类的健康。生物除臭技术是一种利用微生物代谢活动来减少或去除恶臭物质的技术。它通过引入特定的微生物菌种，利用其代谢能力分解有机废物中产生恶臭的化合物，从而降低或消除臭味。生物除臭能够降低恶臭物质浓度，且持久性除臭，具有操作简单、处理费用低、处理后不产生二次污染等优点，成为了目前除臭技术研究的热点。另外，生物除臭技术市场容量极大，其发展潜力和应用前景相当广泛。

3、本发明分离筛选了一株益生菌干酪乳酪杆菌，该菌株可有效降解饲料原料中的黄曲霉毒素b1，降解率为50.48％，同时该菌株对养殖中的氨气和硫化氢也存在一定的降解效果，其中，氨气的降解率为48.66％，硫化氢的降解率为40.82％，臭气的降解率为24.42％。因此，本发明公开了一种有效降解黄曲霉毒素b1和养殖臭气的干酪乳酪杆菌的制备及其应用，属于微生物发酵技术领域，为该菌株在食品和农业领域的进一步生物脱毒、生态养殖等研究与应用奠定基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种降解黄曲霉毒素b1及臭气物质的干酪乳酪杆菌及其应用，解决背景技术中现有技术针对黄曲霉毒素b1的降解、脱毒效率低，以及农业除臭气效率低的技术问题。

2、为实现上述目的，本发明从发酵的饲料中提取一种能高效降解黄曲霉毒素b1的益生菌株，该益生菌株在mrs固体平板上在34℃～38℃静置培养48h±2h后，菌落呈乳白色，圆形，表面湿润光滑，革兰氏染色后，在显微镜下观察到该菌株为革兰氏阳性菌，形状为杆状。

3、根据所述益生菌株的形态特征、和16s rdna序列进行blast同源比对及mega7软件构建系统进化树，鉴定该益生菌株为干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus casei)t-369，将其与2023年8月31日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(地址：为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼)，保藏编号为gdmcc no：63763。

4、本发明还提供一种可降解黄曲霉毒素b1及臭气物质的微生物菌剂，所述微生物菌剂包括权利要求1所述的干酪乳酪杆菌t-369。

5、本发明还提供了所述干酪乳酪杆菌t-369或所述微生物菌剂在降解解黄曲霉毒素b1的应用。

6、进一步的，一种所述干酪乳酪杆菌t-369用于降解包含黄曲霉毒素b1的材料，该材料包括农副产品、食品及饲料。

7、进一步的，所述干酪乳酪杆菌t-369降解黄曲霉毒素b1的具体步骤如下，取适量菊花粕、无菌水、甘蔗糖蜜及干酪乳酪杆菌t-369菌剂在无菌条件下混合搅拌，于20～30℃培养温度下培养30天。.

8、进一步的，所述干酪乳酪杆菌t-369降解臭气具体步骤如下：将养殖过程产生的粪污与所述干酪乳酪杆菌t-369菌剂混和搅拌，测定其中的氨气、硫化氢、臭气。

9、本发明还提供了一种干酪乳酪杆菌t-369菌剂的培养和分离鉴定方式。

10、进一步的，所述干酪乳酪杆菌t-369菌剂的培养步骤如下：称取适量饲料并加入无菌水振荡混匀，取上清液再加入适量无菌水制作成初始菌悬液，将初始菌悬液按照十倍系数递增稀释至适合的梯度，选择适宜的稀释度，吸取适量的样品液体均匀涂抹在mrs固体平板上，在34℃～38℃静置培养48h±2h，挑取乳白色、表面湿润光滑的圆形单菌落进行划线培养。

11、进一步的，所述mrs固体平板的成分为0.5～2wt％蛋白胨、0.3～0.8wt％牛肉膏、0.05～0.15wt％吐温80、0.1～0.3wt％磷酸二氢钾、0.1～0.5wt％酵母粉、0.1～0.4wt％硫酸镁、0.1～0.4wt％柠檬酸三铵、1～3wt％葡萄糖、0.003～0.005wt％硫酸锰、0.3～0.6wt％乙酸钠、1.5～3wt％琼脂，水1000ml；ph值6.2±0.2。

12、进一步的，将分离得到的干酪乳酪杆菌t-369经过活化后添加在mrs液体培养基中，经33℃～38℃培养24h后获得。

13、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

14、1、本发明提供的一种干酪乳酪杆菌t-369，具有极强耐胆盐性、耐酸碱性，还具有极强的产酸能力，胆盐添加量达到5％时干酪乳酪杆菌t-369仍保存有1.5×102cfu/ml的活菌数，存活率高，当ph＝13时，干酪乳酪杆菌t-369仍保持2.0×104cfu/ml的活菌数，具有极高存活率。

15、对黄曲霉毒素b1具有极大得降解作用，其对黄曲霉毒素b1的降解率可达到50.48％，能够有效的降低黄曲霉毒素b1的危害。

16、2、对于臭气处理，干酪乳酪杆菌t-369能够有效降解养殖过程中产生的氨气和硫化氢，氨气的降解率为48.66％，硫化氢的降解率为40.82％，臭气的降解率为24.42％。

技术特征：

1.一种可降解黄曲霉毒素b1及臭气物质的干酪乳酪杆菌t-369，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369具有极强耐胆盐性、耐酸碱性，还具有极强的产酸能力，所述干酪奶酪杆菌t-369保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no.63763。

2.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包括权利要求1所述的干酪乳酪杆菌t-369。

3.根据权利要求1所述的一种干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369用于降解黄曲霉毒素b1。

4.根据权利要求1所述的一种干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369用于降解臭气。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369降解黄曲霉毒素b1的具体步骤如下，取适量菊花粕、无菌水、甘蔗糖蜜及干酪乳酪杆菌t-369菌剂在无菌条件下混合搅拌，于20～30℃培养温度下培养30天。

6.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369降解臭气具体步骤如下：将养殖过程产生的粪污与所述干酪乳酪杆菌t-369菌剂混和搅拌，测定其中的氨气、硫化氢、臭气。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于：所述干酪乳酪杆菌t-369菌剂的培养步骤如下：称取适量饲料并加入无菌水振荡混匀，取上清液再加入适量无菌水制作成初始菌悬液，将初始菌悬液按照十倍系数递增稀释至适合的梯度，选择适宜的稀释度，吸取适量的样品液体均匀涂抹在mrs固体平板上，在34℃～38℃静置培养48h±2h，挑取乳白色、表面湿润光滑的圆形单菌落进行划线培养。

8.根据权利要求7所述的分离鉴定方法，其特征在于：所述mrs固体平板的成分为0.5～2wt％蛋白胨、0.3～0.8wt％牛肉膏、0.05～0.15wt％吐温80、0.1～0.3wt％磷酸二氢钾、0.1～0.5wt％酵母粉、0.1～0.4wt％硫酸镁、0.1～0.4wt％柠檬酸三铵、1～3wt％葡萄糖、0.003～0.005wt％硫酸锰、0.3～0.6wt％乙酸钠、1.5～3wt％琼脂，水1000ml；ph值6.2±0.2。

9.根据权利要求8所述的分离鉴定方法，其特征在于：将分离得到的干酪乳酪杆菌t-369经过活化后添加在mrs液体培养基中，经33℃～38℃培养24h后获得。

技术总结
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体为一种降解黄曲霉毒素B1及臭气物质的干酪乳酪杆菌及其应用，所述干酪乳酪杆菌T‑369对黄曲霉毒素B1具有极强的降解、脱毒作用，黄曲霉毒素B1的降解率可达到50.48％，能够有效的降低黄曲霉毒素B1的危害，氨气的降解率为48.66％，硫化氢的降解率为40.82％，对臭气的降解率达24.42％，此外极强耐胆盐性、耐酸碱性，还具有极强的产酸能力，胆盐添加量达到5％时干酪乳酪杆菌T‑369仍保存有1.5×10<supgt;2</supgt;CFU/mL的活菌数，存活率高，当PH＝13时，干酪乳酪杆菌T‑369仍保持2.0×10<supgt;4</supgt;CFU/mL的活菌数，具有极高存活率。

技术研发人员：蔡杏华,罗莎莎,易萍,陈学文,黄金榕,吴建平,黄凤蝶
受保护的技术使用者：广西优比特生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/9