LpPHM的基因片段、重组毕赤酵母及其应用

本发明涉及微生物与生物化学，特别涉及一种多肽羟化酶lpphm、一株重组毕赤酵母及其应用。

背景技术：

1、许多生物活性肽(如降钙素、催产素、艾塞那肽等)的c末端需要经过酰胺化修饰后才能发挥其完整的生物功能。这种酰胺化反应需要肽酰甘氨酸α-羟化单加氧酶(peptidylglycineα-hydroxylating monooxygenase，phm)的催化。现有的phm生产方法依赖于动物细胞表达系统或大肠杆菌表达系统。其中动物细胞表达系统包括中国仓鼠卵巢细胞(cho细胞)、人胚胎肾细胞(hek293细胞)以及昆虫sf9细胞，需要使用动物细胞培养装置，复杂程度显著高于微生物生产工艺。大肠杆菌表达系统由于其原核生物的属性，无法完成phm的表面糖基化修饰，而缺乏糖基化修饰会降低phm的催化活性。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明公开一种lpphm的基因片段，其氨基酸序列如序列表seq idno.1所示。

2、本发明还提供了一种重组毕赤酵母，含有所述的lpphm的基因片段。

3、在本发明的具体实施方式中，本发明还提供了一种所述的lpphm的基因片段和重组毕赤酵母在制备c端酰胺化泛素中的应用。

4、在本发明的具体实施方式中，本发明进一步地提供了，将所述lpphm的基因片段插入表达载体ppiczαa的ecori与xbai位点之间获得重组载体，之后将重组载体转入毕赤酵母x-33细胞，获得重组毕赤酵母。

5、本发明的有益效果在于：

6、本发明提供了通过工程酵母细胞发酵可以高效、简便的生产phm，相比其他需要动物细胞表达的phm具有明显的生产成本优势。

技术特征：

1.lpphm的基因片段，其氨基酸序列如序列表seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的lpphm的基因片段，其来源于美洲鲎(limulus polyphemus)。

3.重组毕赤酵母，含有权利要求1或2所述的lpphm的基因片段。

4.权利要求1或2所述的lpphm的基因片段在制备c端酰胺化泛素中的应用。

5.权利要求3所述的重组毕赤酵母在制备c端酰胺化泛素中的应用。

6.权利要求3所述重组毕赤酵母的制备方法，其特征是，将权利要求1或2所述lpphm的基因片段插入表达载体ppiczαa的ecori与xbai位点之间获得重组载体，之后将重组载体转入毕赤酵母x-33细胞，获得重组毕赤酵母。

技术总结
本发明涉及微生物与生物化学技术领域，本发明公开一种LpPHM的基因片段，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。通过本发明提供的重组毕赤酵母可以高效、简便地发酵生产来源于美洲鲎的肽酰甘氨酸α‑羟化单加氧酶。

技术研发人员：吴边,朱彤,张烜槊,李瑞峰
受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10