一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法与流程

本发明涉及微生物防治，具体涉及一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法。

背景技术：

1、烟草是一种重要的经济作物，在世界范围内广泛种植，中国作为世界第一烟草大国，烟叶产量约占世界总量的35％。尽管我国具有广阔的烟草种植面积，但所产高品质烟叶所占的比重却并不高，主要是由于烟草在种植过程中易受多种病害危害。青枯病是常见的烟草三大土传病害之一，是一种由青枯雷尔氏杆菌引起且十分常见的细菌性植物病害，该病害于1880年在美国首次报道发现,尔后逐渐扩展蔓延，成为热带、亚热带地区烟草的重要病害之一。青枯病菌通过根部或茎部的伤口进入烟株，随后进入木质部,通过脂多糖识别寄主细胞，并产生大量的胞外多糖导致维管束堵塞，同时分泌胞外蛋白酶降解细胞壁，最终引起烟草维管束发生病变,导致植物萎蔫死亡。目前在我国长江流域及以南烟区普遍发生，其症状为枯萎，发病可表现至全株死亡，对烟草行业造成了巨大的经济损失。

2、烟草内生菌被发现对烟草青枯病菌具有明显的抑制效应，而如何进一步提升这些内生菌的抑制作用，已成为其能否作为生防菌剂进行实际应用的关键。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，将烟草悬浮细胞的胞外代谢产物加入烟草内生菌的培养体系中，以提升烟草内生菌对青枯菌的抑制作用；

4、所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物为烟草愈伤组织在ms培养基上培养后，获取称量、切碎、置于1/2ms培养基内培养、过滤，即得。

5、进一步的，所述ms培养基上培养为烟草愈伤组织在ms培养基上连续续代三次以上。

6、进一步的，所述置于1/2ms培养基内培养为将切碎后的愈伤组织置于1/2ms培养基内，放入设置为110r/min,25℃黑暗条件下的振荡培养箱中振荡培养15天。

7、进一步的，所述切碎后的愈伤组织与1/2ms培养基的配比为2g：100ml。

8、进一步的，所述过滤为用0.22μm微孔滤膜过滤，过滤后的无菌滤液即为所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物。

9、进一步的，所述烟草内生菌为bacilluspumilus wy，菌种保藏号为cgmccno.29039。

10、进一步的，所述烟草内生菌接种到nb固体培养基上，于30℃条件下倒置培养36h，挑取单菌落接种到nb液体培养基中，30℃、180rpm条件下培养24h，作为种子液与所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物共同培养。

11、进一步的，所述种子液与所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物配比1:1。

12、与现有技术相比，本发明提供的促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，能够显著提升烟草内生菌对烟草青枯病菌的抑制作用，促进其在生防菌剂进行实际应用。

技术特征：

1.一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：将烟草悬浮细胞的胞外代谢产物加入烟草内生菌的培养体系中，以提升烟草内生菌对青枯菌的抑制作用；

2.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述ms培养基上培养为烟草愈伤组织在ms培养基上连续续代三次以上。

3.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述置于1/2ms培养基内培养为将切碎后的愈伤组织置于1/2ms培养基内，放入设置为110r/min，25℃黑暗条件下的振荡培养箱中振荡培养15天。

4.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述切碎后的愈伤组织与1/2ms培养基的配比为2g：100ml。

5.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述过滤为用0.22μm微孔滤膜过滤，过滤后的无菌滤液即为所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物。

6.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述烟草内生菌为bacilluspumilus wy，菌种保藏号为cgmcc no.29039。

7.根据权利要求1所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述烟草内生菌接种到nb固体培养基上，于30℃条件下倒置培养36h，挑取单菌落接种到nb液体培养基中，30℃、180rpm条件下培养24h，作为种子液与所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物共同培养。

8.根据权利要求7所述的一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，其特征在于：所述种子液与所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物配比1:1。

技术总结
本发明涉及微生物防治技术领域，具体涉及一种促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，将烟草悬浮细胞的胞外代谢产物加入烟草内生菌的培养体系中，以提升烟草内生菌对青枯菌的抑制作用；所述烟草悬浮细胞的胞外代谢产物为烟草愈伤组织在MS培养基上培养后，获取称量、切碎、置于1/2MS培养基内培养、过滤，即得。本发明提供的促进烟草内生菌对青枯菌抑制作用的方法，能够显著提升烟草内生菌对烟草青枯病菌的抑制作用，促进其在生防菌剂进行实际应用。

技术研发人员：黄一兰,林智慧,阴长林,王雪仁,林建麒,陈涛,林文贵,张志平
受保护的技术使用者：福建省烟草公司三明市公司
技术研发日：
技术公布日：2024/6/5