一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用与流程

本发明属于化合物的提取，具体而言，涉及一种从荷花玉兰叶中提取兰醇b的制备方法及其应用。

背景技术：

1、荷花玉兰(magno l ia grand if l ora.)为木兰科(magno l i aceace)木兰属植物，原产北美洲东南部现作为观赏植物在我国各地大量栽培。已有研究证明荷花玉兰叶的丙酮水提物中含有多种活性物质，例如12,13-二乙酰氧基-桉烷-4α,6α,11-三醇、11,13-去氢台湾含笑内酯、1β-羟基-11βh-桉烷-3-烯-12,6α-内酯、荷花玉兰醇a和b等。

2、活性研究结果显示荷花玉兰醇a和b具有多种活性，尤其是治疗膝骨关节炎。传统分离纯化荷花玉兰醇a和b的方法需要多次柱色谱层析，步骤繁琐。目前已公开的制备荷花玉兰醇a和b的方法包括对样品的回流提取，然后依次采用大孔树脂吸附和hsccc纯化。由于仅经乙醇提取后的浸提膏中含有的物质成分复杂，可能会影响后续的树脂吸附和纯化结果，同时也会在一定程度上造成树脂和纯化仪器中杂质的残留。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种从荷花玉兰叶中提取兰醇b的制备方法及其应用。本发明的方法下可获得高纯度的荷花玉兰醇b。

2、本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

3、本发明的一个方面提供了一种从荷花玉兰叶中提取兰醇b的方法，所述方法包括以下步骤：

4、s1：将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后用体积分数为70％丙酮水回流提取3次，合并提取液，减压浓缩除去丙酮后得水分含量在10～20wt％的浸提膏；

5、s2：将浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至30～50℃，然后以100～150rpm的转速边搅拌边加入体积分数10～20％二甲基甲酰胺的水溶液，加入完毕后保持转速不变继续搅拌20～30min，最后冷却至室温后在0.1～0.5mpa下过60～100nm滤膜，得到澄清料液；

6、s3：将上述得到的澄清料液调节ph为中性，然后上样于hdp300大孔吸附树脂柱，依次用1～3wt％的食盐水、去离子水洗脱大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70％的乙醇溶液洗脱，收集3.5～4.5bv洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉；

7、s4：最后采用hsccc纯化：hsccc溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇-水-正己烷-乙酸乙酯体系，上相作为固定相，下相作为流动相，进样，收集流份，浓缩干燥后得到兰醇b。

8、优选地，步骤s2中所述浸提膏与无水乙醇的加入量体积比为1:5～10。

9、优选地，步骤s2中所述二甲基甲酰胺的水溶液的按照与浸提膏的体积比为1～3:1的量加入。

10、优选地，步骤s3中所述上样速率为3～5bv/h，所述食盐水洗脱速率为1～3bv/h，用量为1～2bv；所述水洗速率为1～4bv/h；所述乙醇洗脱速率均为0.5～4.5bv/h，用量均为3～5bv。

11、优选地，步骤s4中所述hsccc溶剂体系制备过程为：将乙醇、水、正己醇和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80khz的频率下超声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡4～6h后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相。

12、优选地，步骤s4中所述进样操作为：

13、将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10～15mg/ml的进样溶液；

14、量取20ml进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇b色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇b。

15、优选地，所述上样前还包括平衡分离体系的步骤，具体操作为：将固定相以20～30ml/min的流速泵入主机中，待出口流出20～30ml液体后，启动主机正转，调整转速为800～900r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速3～5ml/min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡。

16、本发明的另一个方面还提供了一种根据前述的方法得到的荷花玉兰醇b在制备治疗高血压药物中的应用。

17、优选地，所述药物中所述荷花玉兰醇b以组合物形式存在，所述按照重量百分比计，所述组合物的组成及含量为：荷花玉兰醇b 40～60％，可溶性钙盐10～30％，碳酸氢钠10～15％，脂肪酸5～10％，以及淀粉10～30％。

18、优选地，所述可溶性钙盐包括氯化钙、葡萄糖酸钙、磷酸二氢钙中的一种或两种以上的混合物；所述脂肪酸包括辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、亚麻油酸中的一种或两种以上的混合物。

19、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点：

20、1、本发明以花玉兰叶为原料经过干燥、粉碎胡采用丙酮水回流提取，相比于无水乙醇提取，使用丙酮能够提高对活性物质的提取效率。

21、2、本发明在进行大孔树脂富集前还对浸提膏进行了预处理的过程，包括无水乙醇和二甲基甲酰胺的进一步溶解作用，可将待提取物进行进一步纯化，通过滤膜截留掉颗粒物及高分子物质，提高溶解物的纯度。

22、3、本发明通过大孔树脂富集和hsccc纯化，可得到高纯度的荷花玉兰醇b。

23、4、本发明在研究过程中还发现所提取的荷花玉兰醇b具有优异的抗菌作用，较普通醇类抗菌效果好。另外，根据本发明的研究还发现荷花玉兰醇b在一定程度上还具有降低血压的效果。因此，本发明为开发荷花玉兰醇b在消毒液或者降血压药物中的应用提供了一种新的研究方向。

24、上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。

技术特征：

1.一种从荷花玉兰叶中提取兰醇b的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中所述浸提膏与无水乙醇的加入量体积比为1:5～10。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中所述二甲基甲酰胺的水溶液的按照与浸提膏的体积比为1～3:1的量加入。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s3中所述上样速率为3～5bv/h，所述食盐水洗脱速率为1～3bv/h，用量为1～2bv；所述水洗速率为1～4bv/h；所述乙醇洗脱速率均为0.5～4.5bv/h，用量均为3～5bv。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s4中所述hsccc溶剂体系制备过程为：将乙醇、水、正己醇和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80khz的频率下超声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡4～6h后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s4中所述进样操作为：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述上样前还包括平衡分离体系的步骤，具体操作为：将固定相以20～30ml/min的流速泵入主机中，待出口流出20～30ml液体后，启动主机正转，调整转速为800～900r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速3～5ml/min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡。

8.一种根据权利要求1～7中任一项所述的方法得到的荷花玉兰醇b在制备治疗高血压药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物中所述荷花玉兰醇b以组合物形式存在，所述按照重量百分比计，所述组合物的组成及含量为：荷花玉兰醇b 40～60％，可溶性钙盐10～30％，碳酸氢钠10～15％，脂肪酸5～10％，以及淀粉10～30％。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述可溶性钙盐包括氯化钙、葡萄糖酸钙、磷酸二氢钙中的一种或两种以上的混合物；所述脂肪酸包括辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、亚麻油酸中的一种或两种以上的混合物。

技术总结
本发明属于化合物的提取技术领域，具体而言，涉及一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用。本发明的方法包括：将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过筛，之后用丙酮水回流提取，合并提取液，减压浓缩除去丙酮后得浸提膏；将浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系加热，然后边搅拌边加入二甲基甲酰胺的水溶液，加入完毕后保持转速不变继续搅拌，最后冷却至室温后过滤膜，得到澄清料液；然后以所得澄清料液为样品依次进行大孔树脂吸附和HSCCC纯化。所得荷花玉兰醇B纯度可高达99.9％。另外，在研究中发现，荷花玉兰醇具有优异的抑菌作用及降血压作用，为荷花玉兰醇B在消毒制品和降血压制品领域提供新的研究方向。

技术研发人员：车国娟,车磊
受保护的技术使用者：东莞市秘妍生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23