一株牛瘤胃源狄氏副拟杆菌及其应用

本发明涉及微生物，尤其涉及一株牛瘤胃源狄氏副拟杆菌及其应用。

背景技术：

1、反刍动物瘤胃中存在大量的微生物，包括细菌、古菌、厌氧真菌、原虫和噬菌体，微生物的存在使得反刍动物能够更好地利用植物性饲料来满足自身的能量需求，从而发挥出良好的生产性能。瘤胃微生物区系的建立与宿主息息相关，通过调控瘤胃微生物区系可以改善瘤胃发酵，提高瘤胃健康水平并改善其生产性能，进而提高能量利用率。与此同时，在全面替抗的大背景下，微生态制剂的添加逐渐受到重视。

2、挥发性脂肪酸(vfas)是反刍动物的主要能量来源，其中丙酸作为葡萄糖合成前体物质，其含量较多时意味着反刍动物可得到更多能量用于生长，丁酸在瘤胃吸收过程中，大部分转变为β-羟丁酸，为动物肌肉提供能量来源，同时具有修复肠道屏障等功能。

3、狄氏副拟杆菌是革兰氏阴性菌，专性厌氧，主要存在于人和动物的消化道，能够产生乙酸、丙酸等挥发性脂肪酸，以及大量的琥珀酸。在之前的报道中，狄氏副拟杆菌被视为人体益生菌，同时也是人肠道菌群中的18个核心菌种之一，对人体具有重要的生理作用；其在小鼠和水产动物中的应用也具有一定的益生效果。

4、现有技术中已发现的狄氏副拟杆菌对反刍动物的益生效果研究尚且空缺，尤其是来源于瘤胃的狄氏副拟杆菌对其瘤胃发酵参数及内环境的影响，如何作为添加剂对反刍动物瘤胃发酵等产生影响，成为本领域需要解决的技术问题。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，特提出本发明。

2、第一方面，本发明提供了一株狄氏副拟杆菌(parabacteroides distasonis)，其为狄氏副拟杆菌f4，其保藏号为cgmcc no.40798。

3、本发明的狄氏副拟杆菌f4从荷斯坦犊牛瘤胃内容物中筛选获得，该菌株于2023年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；邮政编码：100101，分类命名：狄氏副拟杆菌parabacteroides distasonis，保藏编号为cgmcc no.40798。

4、该菌株的微生物学特征为：革兰氏阴性菌，短杆状，不产芽孢，严格厌氧菌；其菌落表面光滑，边缘形成白色或透明状菌圈，稍突。该菌具有广泛的胆酸转化功能，能够水解多种结合型胆酸，转化为多种次级胆酸(石胆酸，熊去氧胆酸等)，同时可产生大量琥珀酸。

5、该菌株的分离纯化方法如下：采集新鲜瘤胃液样品后用无菌pbs分别稀释104、105、106和107倍进行平板涂布，培养基采用苛氧厌氧培养基(faa)，厌氧环境下37℃培养3～5天后通过平板划线法纯化菌株三次后进行微生物质谱鉴定或16srrna鉴定。

6、第二方面，本发明提供了一种微生物菌剂，其包含所述的狄氏副拟杆菌f4或其发酵液。

7、优选地，所述发酵液通过狄氏副拟杆菌f4在fab发酵培养基中发酵后获得。

8、优选地，所述发酵液的制备方法包括：将活化至对数期的狄氏副拟杆菌f4接种至发酵培养基(fab)中，接种量为1％～5％，生长温度37℃～39℃，生长ph为6～7，培养时间为12～48小时。

9、优选地，所述发酵培养基(fab)的组分如下：

10、混合蛋白胨15g/l，酵母提取物10g/l，硫基乙酸钠0.5g/l，氯化钠2.5g/l，琼脂0.75g/l，半胱氨酸盐酸盐0.5g/l，氯化血红素0.005g/l，碳酸氢钠0.4g/l，刃天青0.001g/l，维生素k 0.0005g/l，加蒸馏水至1000ml，ph7.0±0.1。

11、在具体实施过程中，将所述发酵培养基(fab)在121℃高压灭菌15min后使用。

12、优选地，所述微生物菌剂为狄氏副拟杆菌f4的发酵液冻干粉。

13、优选地，所述微生物菌剂中，狄氏副拟杆菌f4活菌含量不低于(1.0×108～1.0×109)cfu/ml或(1.0×108～1.0×109)cfu/g。

14、优选地，所述发酵液冻干粉中还包括冻干保护剂；所述冻干保护剂包括脱脂奶粉、糊精、乳糖、蔗糖中的至少一种。

15、第三方面，本发明提供了一种产品，所述产品包含所述的狄氏副拟杆菌f4或所述的微生物菌剂；所述产品为选自药物、保健品、食品或食品添加剂、饲料或饲料添加剂中的任意一种。

16、第四方面，本发明提供了所述的狄氏副拟杆菌f4或所述的微生物菌剂在制备产品中的应用，所述产品为选自药物、保健品、食品或食品添加剂、饲料或饲料添加剂中的任意一种。

17、优选地，所述产品被用于以下至少一方面：

18、(1)提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸的比例；

19、(2)改善反刍动物瘤胃发酵模式；

20、(3)维持反刍动物瘤胃微生态平衡；

21、(4)促进反刍动物营养物质消化；

22、(5)增强反刍动物机体免疫力。

23、第五方面，本发明提供了所述的狄氏副拟杆菌f4、所述的微生物菌剂或所述的产品在提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸比例中的应用。

24、本领域知晓，反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸的比例并不能够直接指向特定的疾病，因此所述应用并不涉及疾病的诊断或治疗方法。

25、第六方面，本发明提供了一种提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸的方法，包括：将所述的狄氏副拟杆菌f4或其发酵液或其发酵液冻干粉添加到饲料中饲喂反刍动物。

26、优选地，每kg饲料中所述狄氏副拟杆菌f4的添加量为1×108cfu以上。

27、优选地，所述反刍动物为荷斯坦奶牛。

28、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

29、本发明提供了一株同时提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸比例的狄氏副拟杆菌，具有很好的传代稳定性、安全性和耐受性，有利于改善瘤胃内环境，维持瘤胃微生态平衡；也有利于促进瘤胃发酵，促进动物营养物质消化和增强动物机体免疫力。本发明中的狄氏副拟杆菌来源于荷斯坦奶牛瘤胃，可用作益生菌添加剂饲喂动物，在反刍动物微生态制剂的扩充和饲料工业方面具有巨大的前景。

技术特征：

1.一株狄氏副拟杆菌(parabacteroides distasonis)，其特征在于，其为狄氏副拟杆菌f4，其保藏号为cgmcc no.40798。

2.一种微生物菌剂，其特征在于，其包含权利要求1所述的狄氏副拟杆菌f4或其发酵液。

3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为狄氏副拟杆菌f4的发酵液冻干粉。

4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述发酵液冻干粉中还包括冻干保护剂；所述冻干保护剂包括脱脂奶粉、糊精、乳糖、蔗糖中的至少一种。

5.一种产品，其特征在于，所述产品包含权利要求1所述的狄氏副拟杆菌f4或权利要求2～4中任一项所述的微生物菌剂；所述产品为选自药物、保健品、食品或食品添加剂、饲料或饲料添加剂中的任意一种。

6.权利要求1所述的狄氏副拟杆菌f4或权利要求2～4中任一项所述的微生物菌剂在制备产品中的应用，所述产品为选自药物、保健品、食品或食品添加剂、饲料或饲料添加剂中的任意一种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产品被用于以下至少一方面：

8.权利要求1所述的狄氏副拟杆菌f4、权利要求2～4中任一项所述的微生物菌剂或权利要求5所述的产品在提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸比例中的应用。

9.一种提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸的方法，其特征在于，包括：将权利要求1所述的狄氏副拟杆菌f4或其发酵液或其发酵液冻干粉添加到饲料中饲喂反刍动物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，每kg饲料中所述狄氏副拟杆菌f4的添加量为1×108cfu以上；

技术总结
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株牛瘤胃源狄氏副拟杆菌及其应用。本发明提供了一株同时提高反刍动物瘤胃内丙酸和丁酸比例的狄氏副拟杆菌，具有很好的传代稳定性、安全性和耐受性，有利于改善瘤胃内环境，维持瘤胃微生态平衡；也有利于促进瘤胃发酵，促进动物营养物质消化和增强动物机体免疫力。本发明中的狄氏副拟杆菌来源于荷斯坦奶牛瘤胃，可用作益生菌添加剂饲喂动物，在反刍动物微生态制剂的扩充和饲料工业方面具有巨大的前景。

技术研发人员：屠焰,冯肖然,徐生阳,杨春涛,马俊南
受保护的技术使用者：中国农业科学院饲料研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/6/5