一种海参肽的制备方法与流程

本发明涉及水产品加工，具体为一种海参肽的制备方法。

背景技术：

1、海参是一种具有重要生物活性的海洋生物，其提供了重要的药物筛选资源，特别是在预防和治疗肿瘤、心脑血管疾病、免疫系统疾病和神经系统疾病等方面。

2、酶解法作为目前海参肽制备的主要方法，酶解和分离过程中，由于酶的活性受温度和ph值因素的影响较大，需要严格控制反应条件才能维持酶的活性，而现有的方法确保此类条件的稳定性极大程度提高了酶解成本，且反应效率低下，导致海参肽的产量有限，无法满足市场需求，酶解分离成本和效益无法对等，因此亟需一种海参肽的制备方法来解决此类问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种海参肽的制备方法，解决现有技术中存在的现有的酶解和分离过程中，由于酶的活性受温度和ph值因素的影响较大，需要严格控制反应条件才能维持酶的活性，而现有的方法确保此类条件的稳定性极大程度提高了酶解成本的问题。

2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

3、本发明提供了一种海参肽的制备方法，包括：

4、步骤1.准备新鲜的海参，将海参放入超声波清洗仪中，采用淡盐水作为清洗液；将清洗过的海参用再用清水冲洗干净，将清洗干的海参放入发酵罐中，再将干酪乳杆菌、双歧杆菌以菌种质量比1:1.3-1.35的比例分别添加到发酵容器中，发酵结束即得海参浆料；

5、步骤2.将经过预处理的新鲜海参浆料研磨成粒径1-2mm的颗粒，将海参浆料与酶解液混合，每100毫升海参浆料混合50-250毫升酶解液；

6、将混合物转移到高压均质设备中；

7、在酶解反应结束后，通过酶失活剂停止酶解反应制备海参肽酶解液；

8、步骤3.取经过酶解的海参肽酶解液，选用植物乳杆菌和酪酸乳杆菌进行微生物菌种培养，制备代谢活性菌体，即微生物菌液；

9、步骤4.取经过微生物发酵得到的海参肽溶液，采用纳米乳化剂进行包埋；

10、步骤5.取得经过纳米级胶体包埋的胶体微粒，将胶体溶液装入逆渗透膜分离设备中，启动分离过程；使用超滤膜进行初步分离，去除大分子蛋白质和其他杂质，保留海参肽溶液；然后将溶液经过逆渗透膜进行进一步分离、纯化，即得成品海参肽。

11、本发明进一步地设置为：步骤1中，超声波清洗仪功率设置为550-670w，清洗25-35min，清洗温度范围在25-30℃，微生物菌种含量均为10^8cfu/ml，发酵时间48-72小时，发酵温度设在36.5-37℃，制备海参肽酶解液步骤包括：使用超滤膜将大分子蛋白质和其他杂质从海参肽酶解液中分离出来，然后采用凝胶过滤法将海参肽从溶液中提取出来，即得海参肽酶解液，酶失活剂采用浓度0.1%至1%的乙醛溶液，加入量为混合物总质量0.25%；

12、本发明进一步地设置为：步骤1中的在发酵过程中，持续监测发酵液的ph值，将ph值保持在6-7；

13、本发明进一步地设置为：步骤2中，将混合物转移到高压均质设备后，均质过程压力为1000-1500bar，设备流速为5-10ml/min，酶解4-8小时，酶解温度设定在50℃；

14、本发明进一步地设置为：步骤2中，酶失活剂采用浓度0.1%至1%的乙醛溶液，加入量为混合物总质量0.25%；

15、本发明进一步地设置为：步骤3还包括：将培养好的微生物菌液与海参肽酶解液混合，得到发酵液；将发酵液装入发酵罐保持恒温，发酵结束后，即得发酵好的海参肽溶液，微生物菌液与海参肽酶解液混合的质量比为1:5到1:10；

16、本发明进一步地设置为：步骤3中，微生物菌液与海参肽酶解液混合的质量比为1:5到1:10；

17、本发明进一步地设置为：步骤3中，发酵条件为微生物菌种含量10^9cfu/ml，发酵时间72小时，发酵温度40℃；

18、本发明进一步地设置为：步骤4中，纳米乳化剂成分包括表面活性剂、辅剂以及水溶液，表面活性剂为tween 80、span 80、卵磷脂、十二烷基硫酸钠中的一种，辅助剂选用丙二醇和聚乙二醇；

19、将包埋剂按照包埋条件中的添加量为1%质量分数，添加到海参肽溶液中；

20、将混合后的海参肽溶液和包埋剂溶液放置在密封的容器中；

21、包埋结束后，通过离心分离取得包埋后的海参肽胶体，然后对得到的胶体微粒进行洗涤和去除未包埋的物质，获得胶体微粒，包埋时间12小时，包埋温度为25℃；

22、本发明进一步地设置为：步骤5中，调节超滤膜孔径为1000da，设置逆渗透膜截留率为90%，控制分离时间为6小时，分离温度为20℃。

23、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

24、本发明，基于超声波清洗获取的干净、干燥的海参进行干酪乳杆菌和双歧杆菌的组合发酵，有效地促进菌种的生长，提高海参浆料的发酵效率和产物质量。

25、本发明，通过在酶解过程中添加木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，能够特异性地降解海参蛋白质，更多地生成海参肽，有效提高酶解效率和产物纯度。

26、本发明，采用微生物发酵进一步进行海参肽的二度降解，提高海参肽的产量和品质，并利用纳米乳化剂进行包埋，将海参肽包裹在稳定的胶体微粒中，提高其稳定性和生物利用率。

技术特征：

1.一种海参肽的制备方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤1中，超声波清洗仪功率设置为550-670w，清洗25-35min，清洗温度范围在25-30℃，微生物菌种含量均为10^8cfu/ml，发酵时间48-72小时，发酵温度设在36.5-37℃，制备海参肽酶解液步骤包括：使用超滤膜将大分子蛋白质和其他杂质从海参肽酶解液中分离出来，然后采用凝胶过滤法将海参肽从溶液中提取出来，即得海参肽酶解液，酶失活剂采用浓度0.1%至1%的乙醛溶液，加入量为混合物总质量0.25%。

3.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤1中的在发酵过程中，持续监测发酵液的ph值，将ph值保持在6-7。

4.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤2中，将混合物转移到高压均质设备后，均质过程压力为1000-1500bar，设备流速为5-10ml/min，酶解4-8小时，酶解温度设定在50℃。

5.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤2中，酶失活剂采用浓度0.1%至1%的乙醛溶液，加入量为混合物总质量0.25%。

6.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，酶解液成分包括：13%-15%的木瓜蛋白酶和9%-10%的菠萝蛋白酶，缓冲剂采用tris缓冲液，占比5%，辅酶为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，占比1%。

7.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤3还包括：将培养好的微生物菌液与海参肽酶解液混合，得到发酵液；将发酵液装入发酵罐保持恒温，发酵结束后，即得发酵好的海参肽溶液，微生物菌液与海参肽酶解液混合的质量比为1:5到1:10。

8.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤3中，发酵条件为微生物菌种含量10^9cfu/ml，发酵时间72小时，发酵温度40℃。

9.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤4中，纳米乳化剂成分包括表面活性剂、辅剂以及水溶液，表面活性剂为tween 80、span 80、卵磷脂、十二烷基硫酸钠中的一种，辅助剂选用丙二醇和聚乙二醇；

10.根据权利要求1所述的一种海参肽的制备方法，其特征在于，步骤5中，调节超滤膜孔径为1000da，设置逆渗透膜截留率为90%，控制分离时间为6小时，分离温度为20℃。

技术总结
本发明公开了一种海参肽的制备方法，涉及水产品加工技术领域，本发明通过超声波清洗和微生物发酵预处理海参原料，提高后续蛋白质的裂解和提取效率，采用高压均质技术和定向酶解剂，对海参蛋白质进行均匀分解，并对特定蛋白质进行加速裂解，提高海参肽的产率和品质，利用高效代谢活性的微生物菌种，对海参肽进行再度降解提取，增强海参肽的生物活性和功能性，同时通过纳米级胶体包埋技术，将海参肽包裹在稳定的胶体微粒中，提高海参肽的稳定性和生物利用率，利用智能化分离技术，对胶体溶液进行精确分离和纯化，去除杂质和大分子蛋白质，最终提取纯度更高的海参肽。

技术研发人员：李新成,苏志卫,史秀清
受保护的技术使用者：青岛益和兴食品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29