筛查糖尿病肾病患者的装置在筛查糖尿病肾病患者中的应用的制作方法

本发明涉及生物医学领域中，筛查糖尿病肾病患者的装置在筛查糖尿病肾病患者中的应用。

背景技术：

1、糖尿病肾病(diabetic kidney disease，dkd)是糖尿病最常见的微血管并发症之一。糖尿病肾病在镜下可见肾小球肥大、肾小球基底膜增厚和肾小管间质纤维化等病理性改变，临床早期典型表现为蛋白尿，伴随着进行性肾功能下降。dkd不仅是导致终末期肾病(esrd)的主要原因之一，而且会显着增加患心血管疾病的风险。dkd是一项全球性挑战，也是一项重大的社会和经济负担。dkd的治疗以控制血糖、血压，减少尿蛋白为主。尽管对dkd的研究越来越多，但应用于临床的治疗仍较少，仍需寻找新的治疗策略。

2、目前，肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate，egfr)和蛋白尿是筛查和诊断dkd的常用标志物。egfr通常根据血清肌酐测量值、年龄和性别综合计算，常用的计算公式为慢性肾病流行病学协作肌酐方程(ckd-epi)(2021年)和肾脏疾病饮食调整研究方程(mdrd)。然而，egfr并不能准确反映肾脏损害的严重程度。研究表明，肾小球改变、肾小管间质纤维化、系膜扩张和血管损伤等肾损伤发生在蛋白尿发生之前。因此，当临床检测到蛋白尿时，提示可能已经发生了肾小球损伤。在2型糖尿病中，大部分肾病进展患者的白蛋白尿正常，这也表明蛋白尿对ersd和egfr进行性下降缺乏特异性和敏感性。总之，egfr和蛋白尿在早期发现dkd以及在随后管理和干预计划期间监测肾功能方面不敏感。

3、microrna(mirna)是一种内源性短非编码单链rna，长度约为22-24个核苷酸，具有通过抑制信使rna(mrna)翻译或促进mrna降解来调节转录后基因表达水平的能力。mirna还参与调节多种细胞过程，如细胞死亡、分化、增殖、代谢等。许多研究已证实mirna和许多代谢疾病、心血管疾病、癌症的发生发展密切相关。mirna作为反映病理生理条件和疾病状态的非侵入性生物标记物的优点表现为具有丰富的表达、较低的复杂性、组织特异性、稳定性和进化保守性。更重要的是，许多研究报告了mirna在dkd病理学中的作用，因此这些小分子为治疗干预提供了新的可能性。目前，利用dkd动物体内模型已经实现了许多下调或上调mirna的尝试。未来，mirna表达的控制可能会开发出来供患者使用。

4、5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，m5c)修饰，是常见的甲基化修饰之一，存在于各种生物的mrna、rrna和trna中。作为一种动态、可逆且分布较为广泛的表观遗传修饰，m5c修饰影响着许多rna分子的命运，构成了应对内外部环境不断变化的有效多功能机制。m5c甲基化修饰通过甲基转移酶(writers)、去甲基化酶(erasers)和识别蛋白(readers)3种蛋白介导调节rna代谢。rnam5c甲基转移酶(rcmts)主要由nol1/nop2/sun结构域(nsun)家族和dna甲基转移酶2(dnmt2)代表，它们将甲基从供体s-腺苷甲硫氨酸转移到胞嘧啶，形成m5c。在mirna中，mirna上的m5c抑制mirna/mrna双链体的形成，从而削弱mirna与靶mrna结合的能力。已证实m5c修饰涉及调控细胞稳态、细胞应激、细胞毒性应激、肿瘤发生、肿瘤细胞迁移、胚胎发生，以及病毒复制等各个方面。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是如何筛查糖尿病肾病患者。

2、为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种筛查糖尿病肾病患者的装置，所述装置包括检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质。

3、上述装置中，所述检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质可包括检测hsa-mir-654-5p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质、检测hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质。

4、上述装置中，所述检测hsa-mir-654-5p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质可包括seq idno.3和seq id no.4所示的两条单链dna；

5、所述检测hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质可包括seq id no.1和seqid no.2所示的两条单链dna。

6、上述装置中，所述检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质还可包括m5c甲基化抗体。

7、上述装置还可包括数据处理模块，所述数据处理模块用于将来自待筛查糖尿病肾病患者的外周血单个核细胞中5-甲基胞嘧啶修饰的hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p含量转换为所述筛查糖尿病肾病患者的预测分值，根据所述待筛查糖尿病肾病患者的预测分值预测待筛查糖尿病肾病患者是否为糖尿病肾病患者。

8、所述装置在制备筛查或辅助筛查糖尿病肾病患者产品中的应用，也属于本发明的保护范围。

9、为解决上述技术问题，本发明首先提供了另一种筛查糖尿病肾病患者的装置，所述装置包括检测tgfbr2和/或igf1基因表达量的物质。

10、上述装置中，所述检测tgfbr2和/或igf1基因表达量的物质可包括检测tgfbr2基因表达量的物质、检测igf1基因表达量的物质。

11、上述装置还可包括数据处理模块，所述数据处理模块用于将来自待筛查糖尿病肾病患者的外周血单个核细胞中tgfbr2和/或igf1基因表达量转换为所述筛查糖尿病肾病患者的预测分值，根据所述待筛查糖尿病肾病患者的预测分值预测待筛查糖尿病肾病患者是否为糖尿病肾病患者。

12、所述装置在制备筛查或辅助筛查糖尿病肾病患者产品中的应用，也属于本发明的保护范围。

13、本发明收集糖尿病肾病患者及健康对照组的外周血单核细胞(pbmc)，采用mirna修饰芯片检测技术,分析筛选序列患者血清mirnam5c修饰谱,根据修饰水平差异倍数(foldchange＞1.5)和p值(＜0.05)筛选出m5c修饰水平差异较大的mirna并在确认序列中利用merip-qpcr进行进一步修饰验证,鉴定出具有统计学意义的差异m5c修饰mirna(hsa-mir-654-5p和hsa-mir-942-3p)。进一步的，对差异修饰的mirna进行靶基因预测，利用rt-pcr进行进一步定量分析,筛选出具有统计学差异的mrna(tgfbr2、igf1)，并对其进行功能分析。

14、下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

技术特征：

1.筛查糖尿病肾病患者的装置，包括检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于：所述检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质包括检测hsa-mir-654-5p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质、检测hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质。

3.根据权利要求2所述的装置，其特征在于：所述检测hsa-mir-654-5p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质包括seq id no.3和seq id no.4所示的两条单链dna；

4.根据权利要求1-3中任一所述的装置，其特征在于：所述检测hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p的5-甲基胞嘧啶修饰的物质还包括m5c甲基化抗体。

5.根据权利要求1-4中任一所述的装置，其特征在于：所述装置还包括数据处理模块，所述数据处理模块用于将来自待筛查糖尿病肾病患者的外周血单个核细胞中5-甲基胞嘧啶修饰的hsa-mir-654-5p和/或hsa-mir-942-3p含量转换为所述筛查糖尿病肾病患者的预测分值，根据所述待筛查糖尿病肾病患者的预测分值预测待筛查糖尿病肾病患者是否为糖尿病肾病患者。

6.权利要求1-5中任一所述装置在制备筛查或辅助筛查糖尿病肾病患者产品中的应用。

7.筛查糖尿病肾病患者的装置，包括检测tgfbr2和/或igf1基因表达量的物质。

8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于：所述检测tgfbr2和/或igf1基因表达量的物质包括检测tgfbr2基因表达量的物质、检测igf1基因表达量的物质。

9.根据权利要求7或8所述的装置，其特征在于：所述装置还包括数据处理模块，所述数据处理模块用于将来自待筛查糖尿病肾病患者的外周血单个核细胞中tgfbr2和/或igf1基因表达量转换为所述筛查糖尿病肾病患者的预测分值，根据所述待筛查糖尿病肾病患者的预测分值预测待筛查糖尿病肾病患者是否为糖尿病肾病患者。

10.权利要求7-9中任一所述装置在制备筛查或辅助筛查糖尿病肾病患者产品中的应用。

技术总结
本发明公开了筛查糖尿病肾病患者的装置在筛查糖尿病肾病患者中的应用。本发明公开的筛查糖尿病肾病患者的装置包括检测hsa‑miR‑654‑5p和/或hsa‑miR‑942‑3p的5‑甲基胞嘧啶修饰的物质，其包括m5C甲基化抗体，SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的两条单链DNA，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA。实验证明，hsa‑miR‑654‑5p和hsa‑miR‑942‑3p的5‑甲基胞嘧啶修饰在糖尿病肾病患者与健康人中具有显著差异，可用于筛查糖尿病肾病患者。

技术研发人员：汤冬娥,戴勇,杨芷倩,杨妍,刘璠娜,虞海燕,邱晶
受保护的技术使用者：深圳市人民医院
技术研发日：
技术公布日：2024/6/30