三种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的乳清蛋白多肽及其制备方法和应用

本发明属于生物，具体涉及三种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的乳清蛋白多肽及其制备方法和应用。

背景技术：

1、高尿酸血症是一种慢性疾病，饮食结构的变化导致高尿酸血症患者数量激增。根据大型流行病学研究，高尿酸血症已成为一个严重的公共卫生问题，2018-2019年中国hua的患病率更是达到14.00％，且男性的患病率高于女性。高尿酸血症主要由于嘌呤代谢受损或尿酸排泄减少导致，该疾病在中老年人群中的发病率较高，并与痛风、心脑血管疾病、糖尿病以及癌症等疾病相关。在人体内，血尿酸水平的升高与核酸代谢异常和肾脏排泄减少相关。尿酸在肝脏中生成，生成过程中存在调控嘌呤代谢的关键酶，可以通过靶向抑制黄嘌呤氧化酶(xod)等，从而使体内尿酸的生成减少。黄嘌呤氧化酶是非特异性羟化酶，能够催化次黄嘌呤为黄嘌呤，黄嘌呤再进一步被催化为尿酸，xod的底物一般为嘌呤、嘧啶、蝶呤、芳杂环和某些醛类等，底物与xod的活性中心位点相结合，而黄嘌呤氧化酶抑制剂同样能够和xod的活性中心结合，阻碍底物发挥羟化反应，从而抑制xod的活性，尿酸的生成被阻碍，最终血清中尿酸的水平也相应降低，维持人体血清中的尿酸水平对人体健康极为重要，故黄嘌呤氧化酶可作为治疗高尿酸血症的关键靶点。

2、目前市面上的降尿酸药物存在较大的副作用，如过敏反应和肾功能损伤，并且主要适用于痛风患者。然而，对于无症状期高尿酸血症患者，缺乏有效且安全的药物进行预防和治疗。″美国第3次国民健康与营养调查″发现，每天喝1次及以上牛奶者比不喝者的血尿酸水平低，且低脂和脱脂奶的降尿酸作用最显著。目前市场上的降尿酸产品大多未添加乳原料，且功能相对单一。乳粉除具有一定的降尿酸功能外，乳粉因其富含蛋白质、脂肪、乳糖、氨基酸等多种营养素，能参与到人类机体多种重要生理活动中，对维持人体健康具有极大益处。多项研究表明，乳清蛋白酶解产生的多肽具有良好的生物利用度和安全性，且在体内表现出显著的尿酸降解效果。但是针对乳清蛋白酶解的具体制备方式和特定的乳清蛋白肽序列这一方面的相关报道还有待补充完善。因此，基于乳清蛋白酶解得到的黄嘌呤氧化酶抑制活性多肽的研究与开发具有重要的科研和临床应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的 为了克服现有技术的不足，提供三种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的乳清蛋白多肽及其制备方法和应用。

2、为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的乳清蛋白多肽，所述肽的氨基酸序列如seq id no：1或seq id no：2或seq id no：18任一项所示，或与其具有至少85％同一性的氨基酸序列。

3、上述肽来源于乳清蛋白。

4、第二方面，本发明提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码上述的肽，或与其具有至少85％同一性的核苷酸序列。

5、上述核酸分子为dna或rna。

6、第三方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体的核苷酸序列包含上述核酸分子。

7、第四方面，本发明提供了一种重组细胞，所述重组细胞是通过将上述表达载体引入至宿主细胞中而获得的。

8、第五方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含第一方面所述的肽，或第二方面所述的核酸分子，或第三方面所述的表达载体，或第四方面所述的重组细胞。

9、第六方面，本发明提供了一种乳清蛋白黄嘌呤氧化酶抑制活性酶解物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

10、s1.将乳清蛋白溶液用碱性蛋白酶进行酶解处理，得到乳清蛋白酶解液；

11、s2.将s1获得的乳清蛋白酶解液进行纯化处理，经鉴定得到黄嘌呤氧化酶抑制肽。

12、上述方法酶解处理的时间为1～5h。

13、第七方面，本发明提供了第一方面所述的肽，或第二方面所述的核酸分子，或第三方面所述的表达载体，或第四方面所述的重组细胞，或第五方面所述的药物组合物，或第六方面所述的方法在抑制黄嘌呤氧化酶活性中的用途。

14、第八方面，本发明提供了第一方面所述的肽，或第二方面所述的核酸分子，或第三方面所述的表达载体，或第四方面所述的重组细胞，或第五方面所述的药物组合物，或第六方面所述的方法在制备预防和/或治疗高尿酸血症药物中的用途。

技术特征：

1.一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的乳清蛋白多肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列如seq id no：1或seq id no：2或seq id no：18任一项所示。

2.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，所述肽来源于乳清蛋白。

3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的肽，所述核酸分子为dna或rna。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体的核苷酸序列包含权利要求3所述的核酸分子。

5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过将权利要求4所述的表达载体引入至宿主细胞中而获得的。

6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1或2所述的肽，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的表达载体，或权利要求5所述的重组细胞。

7.一种乳清蛋白黄嘌呤氧化酶抑制活性酶解物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酶解处理的时间为1～5小时。

9.权利要求1或2所述的肽，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的表达载体，或权利要求5所述的重组细胞，或权利要求6所述的药物组合物，或权利要求7或8所述的方法在抑制黄嘌呤氧化酶活性中的用途。

10.权利要求1或2所述的肽，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的表达载体，或权利要求5所述的重组细胞，或权利要求6所述的药物组合物，或权利要求7或8所述的方法在制备预防和/或治疗高尿酸血症药物中的用途。

技术总结
本发明提出了三种乳清蛋白黄嘌呤氧化酶抑制肽，分别为KIDAL、KFDKAL、KGYGGV，其半抑制浓度分别为4.34±0.91、6.74±0.64、7.75±0.25mM，且协同发挥作用。进一步地，本发明在体内水平证实了乳清蛋白肽KIDAL、KFDKAL、KGYGGV对高尿酸血症大鼠具有一定改善作用，主要表现为降低高尿酸血症大鼠血清尿酸、肌酐、尿酸氮含量，抑制大鼠血清和肝脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)的活性，抑制尿酸的合成，改善大鼠肾脏损伤。因此，本发明得到的乳清蛋白肽可缓解高尿酸血症疾病，为功能食品、特医食品、药品开发和工业化生产提供科学依据。

技术研发人员：毛学英,许雅茹,刘笑含
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/7/11