一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽及其发酵制备方法

本发明属于抗氧化肽，具体涉及一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽及其发酵制备方法。

背景技术：

1、中国是牦牛的发源地，富产牦牛，牦牛血产量较多。不过，由于牦牛血的饮食受众较少，常进行丢弃处理，使得牦牛血未得到充分利用。

2、目前，对于牦牛血的深加工技术研究还相对较少，主要研究方向之一为牦牛血抗氧化肽的发酵制备。例如肖岚等人在《牦牛血抗氧化低聚肽肽段的鉴定及抗氧化活性研究》(肖岚,李诚,安潘宇,等.牦牛血抗氧化低聚肽肽段的鉴定及抗氧化活性研究[j].保鲜与加工,2020(006):020.)分离出了7条抗氧化性较好的抗氧化肽。在此报道的基础上，周雨等人在《牦牛血抗氧化肽发酵制备工艺优化及结构分析研究》中进一步研究了以枯草芽孢杆菌作为发酵菌制备抗氧化肽的优化技术。不过，《牦牛血抗氧化肽发酵制备工艺优化及结构分析研究》(周雨,施丽芬,朱捷,等.牦牛血抗氧化肽发酵制备工艺优化及结构分析研究[j].食品安全质量检测学报,2023,14(6):270-278.)存在发酵底物浓度较大(70g/l)、所得发酵产物的抗氧化性较低(·oh清除率仅为79％)以及所得多肽含量较低(2.79mg/ml)的缺点，产业化应用的价值有限。

3、因此，如何更好地以牦牛血为发酵基底制备具有更高抗氧化性的抗氧化肽，是本领域所亟需的。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽及其发酵制备方法。所制备的牦牛血抗氧化肽具有高效的抗氧化效果，对于·oh自由基的清除率需达到98.5％以上，所得发酵产品中多肽含量需达到5mg/ml以上。

2、为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

3、一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

4、以牦牛血作为发酵底物，接种发酵菌进行发酵4～6天；然后对发酵所得物依次进行离心、抽滤和超滤，即得所述牦牛血抗氧化肽；

5、所述发酵菌按照菌浓比3:1:2的比例，由葡糖醋杆菌sc-01种子培养液、长双歧杆菌sqs7-31种子培养液和凝结芽孢杆菌种子培养液组成，菌浓的单位为1×10-9cfu/ml；

6、其中，所述葡糖醋杆菌sc-01的保藏号为cctcc no:m 209112，保藏于中国典型培养物保藏中心；所述长双歧杆菌sqs7-31的保藏号为cgmcc no.4993，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述凝结芽孢杆菌的保藏号为cgmccno.6729，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

7、优选地，所述牦牛血的浓度为8～10g/l。

8、优选地，所述牦牛血的浓度为9g/l；接种发酵菌时，接种量为4～6％。更优选地，接种发酵菌时，接种量为5％。

9、优选地，接种发酵菌时，接种量为5％

10、优选地，进行离心时，用高速冷冻离心机进行离心，离心参数为：温度为4℃、转速为8000r/min、时间20min。

11、优选地，进行抽滤时，利用0.45μm滤膜过滤。

12、优选地，进行超滤时，利用5kd滤膜于离心机进行，离心参数为：温度4℃，转速4000r/min，时间10min。

13、优选地，制备所述葡糖醋杆菌sc-01种子培养液所用的培养基为：20g葡萄糖、5g酵母粉、5g蛋白胨、1.15g柠檬酸、2.7gna2hpo4、10ml95v/v％乙醇、0.5gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝6；制备所述长双歧杆菌sqs7-31种子培养液所用的培养基为：10g蛋白胨，10g牛肉膏，10g酵母膏，20g葡萄糖，5g乙酸钠，1g吐温80，2g磷酸氢二钾，2g柠檬酸铵，0.5g硫酸镁，0.25gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝6.2；制备所述凝结芽孢杆菌种子培养液所用的培养基为：6g葡萄糖、10g牛肉膏、10g蛋白胨、2g磷酸一氢钾、1gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝7.0。

14、一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽，所述牦牛血抗氧化肽是由上述发酵制备方法制备而得。

15、如本发明的实施例和对比例所示，发酵菌的选择对于多肽的获得以及发酵产物的抗氧化活性影响较大。当只用单一菌株作为发酵菌或者其它混合菌时，无论是抗氧化活性还是多肽含量均较低。周雨等人《牦牛血抗氧化肽发酵制备工艺优化及结构分析研究》在发明人前期研究工作的基础上进一步考察了发酵工艺的优化，不过，其未能以牦牛血作为发酵底物进一步提高发酵产物的抗氧化性。

16、值得一提的是，发明人此前研究过以兔血制备抗氧化肽，所用的发酵菌为枯草芽孢杆菌为sicc1.197、凝结芽孢杆菌cgmccno.6729和植物乳杆菌cgmccno.5105。如一个实施例所示，当采用该混合发酵菌时，对于以牦牛血为发酵基底的方案，所得发酵物的抗氧化性也较差。

17、本发明的有益效果：

18、本发明仅需较低浓度的发酵底物便可以获得具有高效抗氧化性的抗氧化肽产品。所得发酵产品中多肽含量达到5mg/ml以上，所得的抗氧化肽对于·oh自由基的清除率达到98.5％以上。

技术特征：

1.一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，所述牦牛血的浓度为8～10g/l。

3.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，所述牦牛血的浓度为9g/l；接种发酵菌时，接种量为4～6％。

4.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，接种发酵菌时，接种量为5％。

5.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，发酵时，在30～40℃、120-150r/min转速下进行。

6.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，进行离心时，用高速冷冻离心机进行离心，离心参数为：温度为4℃、转速为8000r/min、时间20min。

7.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，进行抽滤时，利用0.45μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，进行超滤时，利用5kd滤膜于离心机进行，离心参数为：温度4℃，转速4000r/min，时间10min。

9.根据权利要求1所述的一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，其特征在于，制备所述葡糖醋杆菌sc-01种子培养液所用的培养基为：20g葡萄糖、5g酵母粉、5g蛋白胨、1.15g柠檬酸、2.7gna2hpo4、10ml95v/v％乙醇、0.5gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝6；制备所述长双歧杆菌sqs7-31种子培养液所用的培养基为：10g蛋白胨，10g牛肉膏，10g酵母膏，20g葡萄糖，5g乙酸钠，1g吐温80，2g磷酸氢二钾，2g柠檬酸铵，0.5g硫酸镁，0.25gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝6.2；制备所述凝结芽孢杆菌种子培养液所用的培养基为：6g葡萄糖、10g牛肉膏、10g蛋白胨、2g磷酸一氢钾、1gmgso4˙7h2o，1000ml蒸馏水，ph＝7.0。

10.一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽，其特征在于，所述牦牛血抗氧化肽是由权利要求1～9任一项所述发酵制备方法制备而得。

技术总结
本发明提供了一种氧化性增强的牦牛血抗氧化肽的发酵制备方法，所述制备方法包括如下步骤：以牦牛血作为发酵底物，接种发酵菌进行发酵4～6天；然后对发酵所得物依次进行离心、抽滤和超滤，即得所述牦牛血抗氧化肽；所述发酵菌按照菌浓比3:1:2的比例，由葡糖醋杆菌SC‑01种子培养液、长双歧杆菌SQS7‑31种子培养液和凝结芽孢杆菌种子培养液组成，菌浓的单位为1×10‑9cfu/mL。本发明仅需较低浓度的发酵底物便可以获得具有高效抗氧化性的抗氧化肽产品。所得发酵产品中多肽含量达到5mg/ml以上，所得的抗氧化肽对于·OH自由基的清除率达到98.5％以上。

技术研发人员：肖岚,吴怡畅,余洋洋,余颂彬
受保护的技术使用者：四川旅游学院
技术研发日：
技术公布日：2024/7/23