基于电化学DNA传感器的LAMP检测方法与流程

本发明涉及dna传感器检测领域，具体涉及一种基于dna传感器的lamp检测方法。

背景技术：

1、环介导等温扩增（lamp）是一种在等温条件下对少量目标dna快速特异扩增的技术。

2、相关技术中的lamp检测技术都是基于变色反应和荧光染料探针技术。变色反应主要依赖于lamp扩增反应过程中释放了副产物---氢离子，引起反应体系ph的变化，从而致使ph指示剂颜色的改变。这是一种间接的判断方法，判断结果仅依赖于肉眼颜色的变化，在反应过程中若因外界因素或样本溶液ph稳定性的破坏，会出现非扩增而产生的颜色变化，严重影响结果。荧光染料探针中的自发光荧光染料与ph指示剂原理大致相同，都依赖于反应过程中的副产物。另一种荧光染料探针是基于自身与lamp扩增产物产生的dna嵌入式结合，从而释放荧光信号，这是一种较为直接的对扩增dna的检测方法，但lamp反应会出现非特异性和非模板性的扩增产生dna，嵌入式荧光探针无法区分。

3、上述问题是目前亟待解决的。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种基于电化学dna传感器的lamp检测方法。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于电化学dna传感器的lamp检测方法，包括：

3、电化学dna传感器制备；

4、通过核酸外切酶ⅲ对lamp产物进行预处理；

5、通过电化学dna传感器制备对预处理后的lamp产物进行电信号检测。

6、进一步的，所述电化学dna传感器制备的步骤，即，通过捕获探针和封闭剂在金电极表面通过金硫键自组装形成多功能单分子层，完成制备。

7、进一步的，所述封闭剂为6-巯基己醇mch、巯基己烷ht、二乙基二硫代氨基甲酸钠dedtc中的任意一种。

8、进一步的，所述通过核酸外切酶ⅲ对lamp产物进行预处理的步骤包括：

9、制备lamp产物；

10、配置核酸外切酶ⅲ反应液；

11、将核酸外切酶ⅲ反应液与lamp产物1：1混合，对lamp产物的双链dna进行切割，完成预处理。

12、进一步的，所述配置核酸外切酶ⅲ反应液，即，将无酶水、核酸外切酶ⅲ缓冲液以及核酸外切酶ⅲ按照19：5：1的比例进行混合，完成核酸外切酶ⅲ反应液的制备。

13、进一步的，所述将核酸外切酶ⅲ反应液与lamp产物1：1混合，对lamp产物的双链dna进行切割，完成预处理的步骤中，将所述将核酸外切酶ⅲ反应液与lamp产物1：1混合，将混合液在35-40℃下反应30-60分钟。

14、进一步的，所述通过电化学dna传感器制备对预处理后的lamp产物进行电信号检测的步骤包括：

15、在预处理后的lamp产物加入信号探针，混匀溶液；

16、将溶液滴在电化学dna传感器的电极检测区域，杂交培育；

17、电极冷却至室温，通过适配器连接至电化学工作站，进行数据测量。

18、进一步的，所述在预处理后的lamp产物加入信号探针，混匀溶液的步骤中，溶液的浓度为15um。

19、进一步的，所述将溶液滴在电化学dna传感器的电极检测区域，杂交培育的步骤中，杂交培育的温度为30-50℃，时间为20-50分钟。

20、进一步的，所述电极冷却至室温，通过适配器连接至电化学工作站，进行数据测量的步骤中，数据测量的方法为循环伏安法、线性伏安法、方波伏安法中的任意一种。

21、本发明的有益效果是，本发明提供了一种基于电化学dna传感器的lamp检测方法，包括：电化学dna传感器制备；通过核酸外切酶ⅲ对lamp产物进行预处理；通过电化学dna传感器制备对预处理后的lamp产物进行电信号检测。应用核酸外切酶ⅲ对lamp扩增产物进行处理，使得lamp产物中靶标区域单链dna暴露出来，增强电化学dna传感器检测的灵敏度，整个检测过程无需洗涤，避免了复杂的操作，减少误差。

技术特征：

1.一种基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，

3.如权利要求2所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，

4.如权利要求1所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，

5.如权利要求1所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，

6.如权利要求1所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，所述通过电化学dna传感器制备对预处理后的lamp产物进行电信号检测的步骤包括：

7.如权利要求6所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，所述在预处理后的lamp产物加入信号探针，混匀溶液的步骤中，溶液的浓度为15um。

8.如权利要求6所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，所述将溶液滴在电化学dna传感器的电极检测区域，杂交培育的步骤中，杂交培育的温度为30-50℃，时间为20-50分钟。

9.如权利要求6所述的基于电化学dna传感器的lamp检测方法，其特征在于，

技术总结
本发明属于电化学DNA传感器检测领域，具体提供了一种基于电化学DNA传感器的LAMP检测方法，包括：电化学DNA传感器制备；通过核酸外切酶Ⅲ对LAMP产物进行预处理；通过电化学DNA传感器制备对预处理后的LAMP产物进行电信号检测。应用核酸外切酶Ⅲ对LAMP扩增产物进行处理，使得LAMP产物中靶标区域单链DNA暴露出来，增强电化学DNA传感器检测的灵敏度，整个检测过程无需洗涤，避免了复杂的操作，减少误差。

技术研发人员：关国良,王立新,贾瑶瑶
受保护的技术使用者：常州先趋医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/6/5