一种用于非小细胞肺癌筛查的circRNA标志物

本发明涉及生物医学，尤其涉及一种用于非小细胞肺癌筛查的circrna标志物。

背景技术：

1、根据世界癌症报告2020年的数据统计，全球肺癌新发例数约220.7万，我国肺癌发病数和死亡数分别占全球的37.0％和39.8％，高居肿瘤发病率和死亡率榜首。2022年2月，国家癌症中心在《国家癌症中心杂志》(thejournal ofthe national cancer center,jncc)上发布中国最新癌症报告。肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌和食道癌是癌症死亡的5种原因，占死亡总数的69.3％。不论是发病还是死亡，肺癌均占首位。非小细胞肺癌(non-smallcell lungcarcinoma,nsclc)是原发性肺癌的主要类型，包括肺腺癌(lungadenocarcinoma,luad)和肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,lusc)。虽然随着肺癌多学科综合治疗的发展，但由于常规影像检查普及率不高、早期有效诊断手段缺乏等原因，大多数肺癌患者被发现处于晚期，总体生存率仍然很低，约为15％。因此，筛查与早诊早治是降低肺癌死亡率的有效措施。

2、环状rna(circular rna,circrna)是一类不具有5’末端帽子和3’末端多聚腺苷酸(polyadenylic acid,polya)尾巴、以共价键形成环形结构的非编码rna(non-codingrna,ncrna)分子，具有结构稳定、丰度高及组织特异性表达等特征。其主要功能除竞争性结合微小核糖核酸(microrna,mirna)发挥转录后调控作用；还与细胞核内核糖核蛋白或rna聚合酶ii相互作用调控转录；或直接与转录因子结合，调控经典的rna剪接、编码蛋白质等，通过多种作用方式参与基因表达调控。随着高通量测序技术的发展，越来越多的研究发现circrnas的失调与非小细胞肺癌的发生发展密切相关，寻找非小细胞肺癌中失调的circrnas并探究其具体的作用机制对于非小细胞肺癌的诊断与治疗具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了寻找非小细胞肺癌中失调的circrnas并探究其具体的作用机制对于非小细胞肺癌的诊断与治疗。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种用于非小细胞肺癌筛查的circrna标志物，所述标志物为hsa_circ_0016601，所述hsa_circ_0016601的序列号如seq id no:01所示。

4、本申请还提供了hsa_circ_0016601作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，所述hsa_circ_0016601的序列如seq id no:01所示。

5、优选的，所述诊断产品为诊断试剂或诊断试剂盒。

6、本申请还提供了hsa_circ_0016601与血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物联合作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述hsa_circ_0016601的序列如seq id no:01所示，所述血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物为cea，scc，cyfra21-1中至少一种。

7、优选的，所述血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物包括cea，scc，cyfra21-1。

8、本申请还提供了一种用于非小细胞肺癌的非治疗目的的诊断试剂，其特征在于：所示试剂包括针对hsa_circ_0016601生物标志物的特异性引物，

9、优选的，包括如seq id no:2所示的上游引物和seq id no:3所示的下游引物。

10、与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：

11、1.本申请中通过高通量测序构建非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织的circrna差异表达谱，rt-qpcr检测hsa_circ_0016601在非小细胞肺癌中的表达情况。

12、2.本申请中首次发现hsa_circ_0016601可作为非小细胞肺癌诊断的生物标志物。

13、3.本申请中发现与正常人相比，该circrna生物标志物在临床大样本非小细胞肺癌患者血清中的表达升高。

14、4.本申请中通过临床病理资料分析显示，非小细胞肺癌患者血清中高表达的上述circrna生物标志物与组织学类型，分化程度，肿瘤大小，tnm分期(tumor node metastasisclassification,tmn)，远端转移，细胞增殖相关抗原ki-67表达及胸膜浸润有关。

15、5.本发明提供的用于非小细胞肺癌诊断的hsa_circ_0016601生物标志物，其区分血清中非小细胞肺癌患者和健康正常人的auc可达0.810，灵敏度和特异度分别为72％和77％，截断值为2.4180。

16、6.本申请中将hsa_circ_0016601生物标志物与血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物cea，scc，cyfra21-1依次联合，其区分血清中非小细胞肺癌患者和健康正常人的auc可达0.879，灵敏度和特异度可达86％和66％，截断值为8.2744，结果显示hsa_circ_0016601-cea-scc-cyfra21-1联合指标相对于单独的hsa_circ_0016601检测有更高的诊断效能。

技术特征：

1.一种用于非小细胞肺癌筛查的circrna标志物，其特征在于：所述标志物为hsa_circ_0016601，所述hsa_circ_0016601的序列号如seq id no:01所示。

2.hsa_circ_0016601作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述hsa_circ_0016601的序列如seq id no:01所示。

3.根据权利要求2所述的hsa_circ_0016601作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述诊断产品为诊断试剂或诊断试剂盒。

4.hsa_circ_0016601与血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物联合作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述hsa_circ_0016601的序列如seq idno:01所示，所述血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物为cea，scc，cyfra21-1中至少一种。

5.根据权利要求4所述的hsa_circ_0016601与血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物联合作为标志物在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述血液中检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物包括cea，scc，cyfra21-1。

6.一种用于非小细胞肺癌的非治疗目的的诊断试剂，其特征在于：所示试剂包括针对hsa_circ_0016601生物标志物的特异性引物。

7.根据权利要求6所述的一种用于非小细胞肺癌的非治疗目的的诊断试剂，其特征在于：包括如seq id no:2所示的上游引物和seq id no:3所示的下游引物。

技术总结
本发明提供一种用于非小细胞肺癌筛查的circRNA标志物，涉及生物医学技术领域，所述标志物为hsa_circ_0016601，所述hsa_circ_0016601的序列号如SEQ ID NO:01所示。首先通过高通量测序构建非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织的circRNA差异表达谱，RT‑qPCR检测hsa_circ_0016601在非小细胞肺癌中的表达情况，从而首次发现hsa_circ_0016601可作为非小细胞肺癌诊断的生物标志物，并且，与正常人相比，该circRNA生物标志物在临床大样本非小细胞肺癌患者血清中的表达升高。非小细胞肺癌患者血清中高表达的上述circRNA生物标志物与组织学类型，分化程度，肿瘤大小，TNM分期，远端转移，细胞增殖相关抗原Ki‑67表达及胸膜浸润有关。本发明提供的生物标志物，其区分血清中非小细胞肺癌患者和健康正常人的AUC可达0.810，灵敏度和特异度分别为72％和77％，截断值为2.4180。

技术研发人员：鞠少卿,秦诗逸,申娴娟
受保护的技术使用者：南通大学附属医院
技术研发日：
技术公布日：2024/7/18