一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsRNA及其应用的制作方法

本发明属于分子生物，尤其涉及一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna及其应用。

背景技术：

1、松材线虫(bursaphelenchusxylophilus)对松林生态系统健康造成了严重的威胁(nickle，1970，juan等，2014)，其传播和危害离不开昆虫媒介(morimoto and iwasaki，1972年；张星耀等，2007年)。云杉花墨天牛(monochamus saltuarius)(鞘翅目：天牛科)是中国东北部一种新记录的媒介，对我国东北地区大面积松林造成严重威胁。云杉花墨天牛生活史的大部分时间隐藏在树体内，在树体外生活和传播的成虫阶段是防控的窗口期。化学感觉系统，特别是嗅觉系统在云杉花墨天牛成虫阶段的取食、交配和产卵过程中起着重要作用。因此，对于嗅觉识别相关基因的研究有助于从遗传学角度研究云杉花墨天牛成虫阶段的防治方法。

2、orco是一种共表达受体基因，与普通气味受体一起组成二聚体识别气味分子(dobritsa et al.,2003)。orco是将普通气味受体定位于嗅觉神经元树突膜所必须的(stengl et al.,2013)，因此，orco基因是决定昆虫嗅觉能力的关键基因，对昆虫电生理和行为具有重要的影响。

3、双链rna(dsrna)接到的rna干扰(rnai)是指生物体通过内源性或外源性小rna诱导目标rna降解的现象(neumeier and meister，2021)。rna干扰技术具有高度特异性，对非靶标物种无害，具有很大的应用潜力。该技术已成为开发新的森林害虫管理方法的重要选择。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna，可抑制云杉花墨天牛orco基因的表达量，导致云杉花墨天牛嗅觉识别能力下降，影响成虫交配，达到防治云杉花墨天牛的效果。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna，所述dsrna为seq id no:1所示核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链rna。

4、优选的，编码所述dsrna的dna分子核苷酸序列如seq id no:2所示。

5、本发明的另一目的在于提供所述dsrna在如下任意一种中的应用：制备抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的产品；抑制云杉花墨天牛嗅觉基因orco表达；制备抑制云杉花墨天牛嗅觉基因orco表达的产品；防治云杉花墨天牛；制备防治云杉花墨天牛的产品。

6、本发明的另一目的在于提供一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的方法，将上述抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna导入云杉花墨天牛。

7、优选的，所述导入的方式为注射、饲喂、纳米负载喷洒、细菌表达喷洒中的任意一种。

8、优选的，所述注射量为2-4μg/只云杉花墨天牛。

9、优选的，所述云杉花墨天牛为云杉花墨天牛成虫。

10、本发明的另一目的在于提供一种含有上述抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna的产品。

11、本发明的另一目的在于提供一种防治松材线虫的方法，包括控制松材线虫传播媒介云杉花墨天牛的入侵和扩散。

12、优选的，通过将上述抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna导入云杉花墨天牛，控制云杉花墨天牛的入侵和扩散。

13、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

14、本发明提供了一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna，可调控云杉花墨天牛的嗅觉基因表达量、影响对信息素和寄主挥发物的电生理反应和行为趋性。本发明提供的dsrna注入云杉花墨天牛成虫体腔内，高效的沉默了云杉花墨天牛的靶标基因orco基因的mrna表达，与注射gfp基因dsrna对照相比，当云杉花墨天牛注射嗅觉受体基因dsrna后有较强的沉默效果，致使云杉花墨天牛嗅觉受到抑制，减低了云杉花墨天牛对一种聚集信息素成分和11种寄主挥发物成分的电生理反应和行为趋性。为理解云杉花墨天牛的嗅觉识别机制、创制新的害虫分子调控制剂提供理论基础。

15、本发明能够导致云杉花墨天牛嗅觉识别能力下降，影响成虫交配，最终达到防治的效果，为防治云杉花墨天牛提供了新的有效途径。同时云杉花墨天牛为松材线虫重要媒介昆虫，本发明利用嗅觉基因的沉默技术，为绿色防治林业害虫提供了一个新的思路和技术。

技术特征：

1.一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna，其特征在于，所述dsrna为seq idno:1所示核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链rna。

2.根据权利要求1所述的dsrna，其特征在于，编码所述dsrna的dna分子核苷酸序列如seq id no:2所示。

3.权利要求1或2所述dsrna在如下任意一种中的应用：制备抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的产品；抑制云杉花墨天牛嗅觉基因orco表达；制备抑制云杉花墨天牛嗅觉基因orco表达的产品；防治云杉花墨天牛；制备防治云杉花墨天牛的产品。

4.一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna导入云杉花墨天牛。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述导入的方式为注射、饲喂、纳米递送喷洒、细菌表达喷洒中的任意一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述注射量为2-4μg/只云杉花墨天牛。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述云杉花墨天牛为云杉花墨天牛成虫。

8.一种含有权利要求1或2所述的抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna的产品。

9.一种防治松材线虫的方法，其特征在于，包括控制松材线虫传播媒介云杉花墨天牛的入侵和扩散。

10.根据权利要求9所述的防治松材线虫的方法，其特征在于，通过将权利要求1或2所述的抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsrna导入云杉花墨天牛，控制云杉花墨天牛的入侵和扩散。

技术总结
本发明提供了一种抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsRNA及其应用，属于分子生物技术领域。本发明提供的抑制云杉花墨天牛嗅觉识别能力的dsRNA，为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。本发明提供的dsRNA注射到云杉花墨天牛体内后，能够降低Orco基因表达量，并使雌、雄害虫对聚集信息素和多种寄主挥发物的响应和趋性明显减弱，嗅觉行为受到严重影响。本发明使云杉花墨天牛嗅觉识别能力下降，影响成虫交配，最终达到防治的效果，为防治云杉花墨天牛提供了新的有效途径。同时为绿色防治松材线虫提供了一个新的思路和技术。

技术研发人员：张苏芳,张荣,陈静,谢明慧,杨洁,孔祥波,张真,刘福,方加兴
受保护的技术使用者：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所（国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/9/9