一种水产检测用套式PCR扩增装置以及检测方法与流程

本发明涉及病毒检测装置，更具体地说，涉及一种水产检测用套式pcr扩增装置。

背景技术：

1、鱼虾病毒检测仪是一种专门用于检测水产品中病毒的设备。它的作用至关重要，因为它能够帮助确保水产品的安全性和质量。

2、鱼虾病毒检测仪的工作原理是通过对水产品进行采样，提取样品中的病毒，并进行扩增检测。该设备采用实时聚合酶链式反应（real-time pcr）技术，通过检测病毒核酸来诊断水产品中是否存在病毒。如果水产品中存在病毒，则需要考虑隔离治疗或者放弃该批次水产品养殖，给养殖主体尽可能减少损失，而水产品检测主要是通过裁剪鱼虾病毒易驻存位置获得提取物，和人体体液检测不同之处在于，首先提取物一般为固体，需要进行处理过程较为复杂，同时需要尽可能避免在扩增过程中与外界接触，而另一方面，鱼虾提取物一般温度较低，而现有的手段在提取物研磨过程和pcr扩增过程分别为两个过程，一来这样在研磨时需要将多个不同的主体上的提取物进行混合后研磨，因为需要保证一定的研磨量，二来，研磨过程中温度容易难以控制，导致后续的提取物在扩增时受到温度变化的影响，另外在扩增过程中需要两轮进行扩增，一般而言需要重新将装置打开，放置新的引物、缓冲液以及需要的酶，这样效率较低，且存在污染的风险，而本申请人申请了公告号为cn117165401b的一种生物芯片多态操作系统，通过一个设备，可以实现反应物的制备、离心以及恒温调节三个不同的步骤，原理较为简单，便于操作，其次，过程中样液可以不离开设备就完成三个步骤，减小污染的可能，第三是样液和引物的加入可以从外部接口进行加入，避免检测取样设备因为生物芯片的不同需要针对性重新设计，第四是可以适应多种不同温度的核酸扩增子步骤以达到检测目的。但是不适用于水产品病毒检测，因为水产品的病毒检测如果通过pcr扩增，那需要在第二阶段加入新的引物，这样需要清洗第一阶段的引物腔，造成不便，同时，其也不能提供研磨的功能。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明第一目的是提供一种水产检测用套式pcr扩增装置。

2、为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种水产检测用套式pcr扩增装置，包括装置本体以及试管套件，所述装置本体内设置有用于容纳所述试管套件的检测支架，所述试管套件包括研磨套件管段、rpa套件管段以及pcr套件管段，所述研磨套件管段和rpa套件管段之间设置有研磨阻隔部，所述rpa套件管段和pcr套件管段之间设置有隔热阻隔部；

3、所述检测支架上设置有转动驱动件，所述转动驱动件用于带动所述研磨套件管段转动，所述研磨阻隔部包括固定在研磨套件管段底部的第一研磨部以及固定在rpa套件管段顶部的第二研磨部，所述第一研磨部和第二研磨部之间形成有研磨间隙，所述第二研磨部上设置有研磨滤孔，所述研磨滤孔用于供研磨后的样液进入rpa套件管段，所述装置本体的上盖还设置有压紧件，所述压紧件用于伸入所述研磨套件管段并挤压样液；

4、所述检测支架上设置有rpa温控组件以及阻隔驱动件，所述rpa温控组件包括rpa温控加热单元，所述rpa温控加热单元用于加热所述rpa套件管段，所述隔热阻隔部上设置有连通所述rpa套件管段和pcr套件管段的过液孔以及用于密封所述过液孔的阻隔单元，所述阻隔驱动件工作时带动所述阻隔单元打开所述过液孔；

5、所述检测支架上设置有pcr温控组件，所述pcr温控组件包括pcr温控加热单元，所述pcr温控加热单元用于加热所述pcr套件管段。

6、进一步地：所述研磨滤孔下方设置有预热流道，所述预热流道上端连接所述研磨滤孔，所述rpa温控组件包括预热加热单元，所述预热加热单元设置于所述预热流道，所述预热加热单元工作时加热所述预热流道。

7、进一步地：所述pcr套件管段底部设置有第一密封件，所述第一密封件下方设置有用于控制第一密封件在pcr套件管段内部移动的移动驱动件。

8、进一步地：所述阻隔单元设置为磁性密封板，所述阻隔驱动件设置为磁性线圈，所述磁性线圈工作时带动磁性密封板移动以打开所述过液孔。

9、进一步地：所述rpa套件管段的外壁设置有探针安装槽，所述探针安装槽向所述套件管段内部延伸且其延伸方向具有向下的分量，所述探针安装槽面向rpa套件管段内部的一端套设有导热套膜，所述探针安装槽用于安装rpa温控探针，所述rpa温控探针耦接所述rpa温控组件，所述rpa温控组件配置有恒温控制策略，所述恒温控制策略根据rpa温控探针反馈的温度控制rpa组件的发热功率。

10、进一步地：所述隔热阻隔部通过隔热材料制成。

11、本发明第二目的是提供一种水产病毒检测方法，其特征在于：应用于上述任意一项所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置；

12、步骤a1、将样品研磨成样液；

13、步骤a2、配置套式缓冲液以及套式反应液；

14、步骤a3、将套式反应液和样液在第一恒温温度下进行反应以得到第一复合物；

15、步骤a4、将套式缓冲液和第一复合物在第二恒温温度下进行反应以得到第二复合物；

16、步骤a5、将第二复合物在第三恒温温度下进行反应。

17、进一步地：所述套式反应液包括，缓冲液30ul，rpa的重组酶2ul，单链结合蛋白2ul， qpcr酶2ul，rpa上下游引物各0.6ul，qpcr上下游引物0.4ul，探针0.2ul，加入depc水至50ul。

18、本发明技术效果主要体现在以下方面：通过这样设置，通过套式pcr反应不用取出样液，重新放入反应液，能够完成扩增反应，而同时通过分段温控实现在样液进入反应空间内时，对应的空间维持一个可靠的温度，避免温度变化对样液反应影响，提高检测精度，另一方面通过在扩增装置中直接研磨，一来每个样品可以相互独立，无需混合，避免样品干扰，可以增加分析维度，提高可靠性，二来研磨完成后无需取出装置，可以直接进行反应，进一步提高了精度。

技术特征：

1.一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：包括装置本体以及试管套件，所述装置本体内设置有用于容纳所述试管套件的检测支架，所述试管套件包括研磨套件管段、rpa套件管段以及pcr套件管段，所述研磨套件管段和rpa套件管段之间设置有研磨阻隔部，所述rpa套件管段和pcr套件管段之间设置有隔热阻隔部。

2.如权利要求1所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：

3.如权利要求2所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：所述研磨滤孔下方设置有预热流道，所述预热流道上端连接所述研磨滤孔，所述rpa温控组件包括预热加热单元，所述预热加热单元设置于所述预热流道，所述预热加热单元工作时加热所述预热流道。

4.如权利要求2所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：所述pcr套件管段底部设置有第一密封件，所述第一密封件下方设置有用于控制第一密封件在pcr套件管段内部移动的移动驱动件。

5.如权利要求2所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：所述阻隔单元设置为磁性密封板，所述阻隔驱动件设置为磁性线圈，所述磁性线圈工作时带动磁性密封板移动以打开所述过液孔。

6.如权利要求2所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：所述rpa套件管段的外壁设置有探针安装槽，所述探针安装槽向所述套件管段内部延伸且其延伸方向具有向下的分量，所述探针安装槽面向rpa套件管段内部的一端套设有导热套膜，所述探针安装槽用于安装rpa温控探针，所述rpa温控探针耦接所述rpa温控组件，所述rpa温控组件配置有恒温控制策略，所述恒温控制策略根据rpa温控探针反馈的温度控制rpa组件的发热功率。

7.如权利要求2所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置，其特征在于：所述隔热阻隔部通过隔热材料制成。

8.一种水产病毒检测方法，其特征在于：应用于上述权利要求1-7任意一项所述的一种水产检测用套式pcr扩增装置；

技术总结
本发明一种水产检测用套式PCR扩增装置以及检测方法，包括装置本体以及试管套件，所述装置本体内设置有用于容纳所述试管套件的检测支架，所述试管套件包括研磨套件管段、RPA套件管段以及PCR套件管段，所述研磨套件管段和RPA套件管段之间设置有研磨阻隔部，所述RPA套件管段和PCR套件管段之间设置有隔热阻隔部；通过套式PCR反应不用取出样液，重新放入反应液，能够完成扩增反应，而同时通过分段温控实现在样液进入反应空间内时，对应的空间维持一个可靠的温度，避免温度变化对样液反应影响，每个样品可以相互独立，无需混合，避免样品干扰，可以增加分析维度，提高可靠性，二来研磨完成后无需取出装置，可以直接进行反应，进一步提高了精度。

技术研发人员：徐胜威,葛明峰,彭少杰
受保护的技术使用者：浙江正合谷生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/7/4