靶向海马神经元细胞的核酸适配体

本发明涉及靶向海马神经元细胞的核酸适配体。属于生物医学。

背景技术：

1、海马体(hippocampus)又名海马回、海马区，是学习和记忆的关键大脑区域。越来越多的证据表明，海马体神经元在各类中枢神经系统疾病中有着重要的作用，海马体功能紊乱是神经退行性疾病患者精神合并症和认知障碍的基础。

2、例如，在阿尔兹海默症(alzheimer's disease，ad)患者中，海马体是受影响的主要区域，在ad的早期阶段，海马体显示出其组织的快速丧失；而在帕金森病(parkinson’sdisease，pd)中有证据表明海马体的体积减少是pd患者产生抑郁和焦虑的原因之一；在亨廷顿病(huntington's disease，hd)发病机制研究中，已知有一系列不同的大脑区域，包括大脑皮层和纹状体，已知在hd中受到影响，关于海马体的功能障碍的证据也越来越多。通过上述研究申请人可以认识到海马体在各类神经退行性疾病中的作用，而在创伤性神经疾病中海马体也有着类似的地位。

3、在创伤性脑损伤(traumatic brain injury，tbi)中，有证据表明。啮齿动物的实验性创伤性脑损伤(tbi)会改变海马神经发生，包括引发新生儿神经元的急性丢失以及祖细胞过度增殖，有研究认为增强tbi后神经元的发生对治疗tbi存在潜在的益处；同时在中风(stroke)患者中，脑卒中后抑郁是脑卒中后常见的并发症，严重影响脑卒中患者的康复和生活质量，研究发现，神经营养因子、蛋白激酶和神经递质通过调节海马突触可塑性来影响抑郁行为，是潜在的提高卒中患者生活质量的方式。

4、核酸适配体是短的(15-100nt)人工单链脱氧核苷酸(ssdna或ssrna)，属于一类新的分子探针。它们具有独特而稳定的三维结构，使它们能够通过三维结合力(如氢键、范德华力和其他静电相互作用)与广泛的靶标(如离子、蛋白质、病毒，甚至整个细胞和组织)特异性结合，并通过形状互补与靶标形成稳定而独特的配合物。核酸适配体是通过体外分子方法，即指数富集的配体系统进化技术(selex)筛选和生成的。核酸适配体又称“化学抗体”，与抗体相比具有一些独特的优势，如易合成、低毒性、易修饰、纳米级大小、低免疫原性、靶标广泛等。此外，核酸适配体在各种ph和有机溶剂环境中的具有高稳定性。最重要的是，核酸适配体在纳米颗粒表面的偶联过程比抗体更容易操作，且配体的偶联密度也更高。由于这些特点，核酸适配体被认为是有前途的主动靶向的配体。

技术实现思路

1、本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供靶向海马神经元细胞的核酸适配体。

2、为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

3、1、靶向海马神经元细胞的核酸适配体，即xsj-1，其核苷酸序列为：5’-accgaccgtgctggactcaccttgtgcgcttaatccaccggatttttcttaacgttgcgtgactatgagcgagcctgg cg-3’，如seq id no.1所示。

4、2、靶向海马神经元细胞的核酸适配体，是在seq id no.1所示的核苷酸序列基础上截短获得，选自以下任一种：

5、xsj-1a：

6、5’-cgtgctggactcaccttgtgcgcttaatccaccggatttttcttaacgttgcgtgactatgagcgagcctg-3’，如seq id no.10所示；

7、xsj-1b：

8、5’-gactcaccttgtgcgcttaatccaccggatttttcttaacgttgcgtgactatga gc-3’，如seq id no.11所示；

9、xsj-1c：

10、5’-accttgtgcgcttaatccaccggatttttcttaacgttgcgtgactat-3’，如seq id no.12所示。

11、作为优选的技术方案之一，所述核酸适配体为xsj-1c，其核苷酸序列如seq idno.12所示，长度为48bp。

12、3、前述核酸适配体在制备海马神经元相关疾病诊断和治疗试剂盒中的应用。

13、作为优选的技术方案之一，所述的海马神经元相关疾病选自：阿尔兹海默病，单纯疱疹病毒性脑炎，自身免疫性脑炎。

14、本发明的有益效果：

15、本发明基于cell-selex技术，筛选获得可结合海马神经元活细胞的核酸适配体xsj-1，并在此基础上截短，获得xsj-1a、xsj-1b、xsj-1c，其中，长度为48bp的核酸适配体xsj-1c可与海马神经元活细胞高特异性、高亲和力结合，能够靶向神经系统的海马神经元细胞或区域。本发明为海马神经元相关疾病的早期诊断和治疗奠定一定的技术基础。

16、通过实验证实，核酸适配体xsj-1c能特异性与海马神经元细胞ht22结合，能够在生理温度下与ht22细胞特异性结合，同时不与其他细胞结合。适配体xsj-1c通过膜表面蛋白与ht22结合，与ht22细胞的结合常数在纳摩尔级有着优秀的结合能力。该核酸适配体同时能在小鼠体内实现对海马神经元区域的靶向，具有极大的发展前景和潜在价值。

技术特征：

1.靶向海马神经元细胞的核酸适配体，其特征在于，其核苷酸序列为：5’-accgaccgtgctggactcaccttgtgcgcttaatccaccggatttttcttaacgttgcgtgactatgagcgagcctgg cg-3’，如seq id no.1所示。

2.靶向海马神经元细胞的核酸适配体，其特征在于，是在权利要求1所述核苷酸序列基础上截短获得，选自以下任一种：

3.根据权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体为xsj-1c，其核苷酸序列如seq id no.12所示，长度为48bp。

4.权利要求1～3中任一项所述核酸适配体在制备海马神经元相关疾病诊断和治疗试剂盒中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的海马神经元相关疾病选自：阿尔兹海默病，单纯疱疹病毒性脑炎，自身免疫性脑炎。

技术总结
本发明公开了靶向海马神经元细胞的核酸适配体。本发明基于Cell‑SELEX技术，筛选获得可结合海马神经元活细胞的核酸适配体xsj‑1，并在此基础上截短，获得xsj‑1a、xsj‑1b、xsj‑1c，其中，长度为48bp的核酸适配体xsj‑1c可与海马神经元活细胞高特异性、高亲和力结合，能够靶向神经系统的海马神经元细胞或区域。本发明为海马神经元相关疾病的早期诊断和治疗奠定一定的技术基础。

技术研发人员：孙曙明,熊诗俊
受保护的技术使用者：中南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/7/23