一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽及其制备方法与应用

本发明属于食品生物，具体涉及一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽及其制备方法与应用。

背景技术：

1、长期饮酒或酗酒会引发各种酒精性肝损伤疾病，如酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化甚至肝癌等。大量研究表明，应激是造成酒精性肝损伤的主要原因。乙醇代谢产生的大量活性氧，一方面通过诱导肝脏细胞线粒体损伤、内质网应激、脂肪堆积、抗氧化酶活性降低和脂质过氧产物增加，导致肝脏氧化-抗氧化系统失衡；另一方面通过抑制肝脏中乙醇脱氢酶（adh）和乙醛脱氢酶（aldh）等酒精代谢相关酶活性，影响酒精代谢速度，最终导致肝细胞损伤。因此，提高机体的抗氧化能力，降低酒精引起的氧化应激损伤，对于防治酒精性肝损伤具有重要意义。

2、生物信息学工具辅助筛选活性肽，是基于活性肽中已知的氨基酸序列，利用数据库搜索和软件分析，对肽段可能的生物活性、安全性及生物可及性等进行预测，选取目标肽段化学合成并对其相关性质进行验证。通过生物信息学工具能节省大量时间成本和实验成本，但目前尚没有研究利用生物信息学工具筛选扇贝肽。

3、adh酶和aldh酶是存在于动物中与解酒护肝密切相关的蛋白酶，在机体氧化与抗氧化平衡中起至关重要作用。adh酶和aldh酶能有效影响酒精代谢速度，将乙醇转化为乙醛并进一步转化为乙酸。近年来，同源性建模和分子对接被广泛用于揭示保护酒精性肝损伤肽与其受体adh和aldh之间的结合位点，为保护酒精性肝损伤肽的筛选和发现提供了有效途径。因此，探究扇贝肽与adh和aldh受体间的相互作用，能够为扇贝肽在天然食品来源制取功能性食品中的应用提供基础。

技术实现思路

1、本发明提供一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽及其制备方法与应用。本发明的扇贝肽可与adh和aldh受体有效结合，可以加速乙醇代谢、保护肝细胞免受乙醇诱导的损伤。

2、具体技术方案如下：

3、本发明的目的之一是提供一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽，其氨基酸序列如seq.id.no.1~3所示的肽中的至少一种。

4、其中，seq.id.no.1为dkyhpgy，该扇贝肽与adh受体对接能量为-8.5 kcal/mol，与aldh受体对接能量为-8.8 kcal/mol。

5、其中，seq.id.no.2为agpypdk，该扇贝肽与adh受体对接能量为-8.9 kcal/mol，与aldh受体对接能量为-8.6 kcal/mol。

6、其中，seq.id.no.3为sdqyryp，该扇贝肽与adh受体对接能量为-8.7 kcal/mol，与aldh受体对接能量为-8.4 kcal/mol。

7、具体地，所述扇贝为海湾扇贝，上述保护酒精性肝损伤的扇贝肽分离提取自海湾扇贝的贝肉。

8、本发明的目的之二是提供上述保护酒精性肝损伤的扇贝肽的制备方法，包括如下步骤：

9、s1. 获取扇贝肽；

10、s2. 对扇贝肽进行序列鉴定；

11、s3. 将扇贝肽与受体adh和aldh分子对接，进行筛选，筛选可与受体adh和aldh有效结合的肽。

12、进一步，步骤s1中，通过对扇贝尤其是扇贝贝肉进行酶解获得扇贝肽。

13、具体地，步骤s1中：依次使用两种内切酶对贝肉进行酶解。

14、其中，所述的内切酶优选为碱性蛋白酶。

15、其中，所述的内切酶优选为风味蛋白酶。

16、更具体地，步骤s1中，酶解的工作条件包括：

17、向待处理原料中加入碱性蛋白酶，调节ph 8.5~9.5，30~40 ℃酶解5~7 h，灭酶；再加入风味蛋白酶，调节ph 6~7，50 ℃~60 ℃酶解5~8 h，灭酶。

18、其中，碱性蛋白酶的添加量优选为以待处理原料（贝肉）计1500~2000 u/g。

19、其中，风味蛋白酶的添加量优选为以待处理原料（贝肉）计500~1000 u/g。

20、具体地，步骤s1中：在对扇贝进行酶解前，对其进行预处理。所述的预处理包括：向待处理原料中加水，然后匀浆，热处理10~15 min后，再次匀浆待用。

21、其中，待处理原料与水的用量比优选为1 g:（3~8） ml。

22、其中，优选使用沸水浴进行热处理。

23、其中，待处理原料中加的水优选为超纯水。

24、进一步，步骤s1中：酶解后，对酶解液进行分离纯化。

25、其中，所述的分离纯化包括使用纳滤对酶解液进行分级，获得一定分子量范围的肽，以及对分级后的组分进行凝胶分离。使用纳滤可脱除盐和游离氨基酸，使用超滤脱除大分子物质。

26、进一步，步骤s2中：使用lc-ms/ms进行多肽序列分析，通过与海湾扇贝蛋白数据库进行比对分析，得出全部肽的序列。

27、具体地，步骤s2中：优选对步骤s1获得的产物先脱盐，再进行多肽序列分析。

28、其中，优选使用c18 stagetip色谱柱进行脱盐。

29、进一步，将扇贝肽与受体adh和aldh分子对接，进行筛选。优选使用pyrx软件内部的vina筛选可与adh和aldh受体有效结合的扇贝肽。

30、具体地，使用生物信息学工具辅助筛选活性肽：通过peptide ranker工具进行肽的生物活性预测，得分超过0.5的序列认为存在潜在活性，通过biopep数据库对肽的新颖性进行查询，通过peptide cutter工具和cpp pred工具对肽的耐消化特性和细胞膜穿透性进行预测，得分超过0.5的序列，认为具有完整跨膜吸收的潜力，通过aller topv.2.0工具对肽的潜在过敏性进行预测，通过toxin pred工具对肽的潜在毒性和理化性质进行预测，不存在潜在过敏性和毒性的序列进行后续合成和验证。

31、本发明的目的之三是提供上述扇贝肽在食品或药品中的应用，尤其是应用于功能性食品。

32、本发明的有益效果如下：

33、本发明通过两步酶解从海湾扇贝肉中获得了一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽，各个扇贝肽与adh受体对接能量分别为-8.5 kcal/mol，-8.9 kcal/mol和-8.7 kcal/mol，与aldh受体对接能量分别为-8.8 kcal/mol，-8.6 kcal/mol和-8.4 kcal/mol。本发明的保护酒精性肝损伤的扇贝肽可用于功能性食品研发，具有广阔市场前景。

技术特征：

1.一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽，其特征在于，包括氨基酸序列如seq.id.no.1~3所示的肽中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的扇贝肽，其特征在于，所述的扇贝为海湾扇贝。

3.根据权利要求1或2所述的扇贝肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，通过对扇贝进行酶解获得扇贝肽。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中，酶解的工作条件包括：

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中：酶解后，对酶解液进行分离纯化。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中：所述的分离纯化为使用纳滤对酶解液进行分级。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s2中：使用lc-ms/ms进行多肽序列分析，通过与海湾扇贝蛋白数据库进行比对分析，得出全部肽的序列。

9.一种如权利要求1或2所述的扇贝肽在食品或药品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，应用于功能性食品。

技术总结
本发明属于食品生物技术领域，公开了一种保护酒精性肝损伤的扇贝肽及其制备方法与应用。所述扇贝肽包括氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1~3所示的肽中的至少一种，各个扇贝肽与ADH受体对接能量分别为‑8.5 kcal/mol，‑8.9 kcal/mol和‑8.7 kcal/mol，与ALDH受体对接能量分别为‑8.8 kcal/mol，‑8.6 kcal/mol和‑8.4 kcal/mol。上述扇贝肽通过两步酶解从海湾扇贝肉中获得。本发明的保护酒精性肝损伤的扇贝肽可用于功能性食品研发，具有广阔市场前景。

技术研发人员：赵芹,常立炀,曹燕峰,刘海梅,蔡芳瑗,张志芹,王竞萱,宋萱耕,张莉莉
受保护的技术使用者：鲁东大学
技术研发日：
技术公布日：2024/7/9