一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记及其应用的制作方法

本发明涉及水产育种，尤其是涉及一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记及其应用。

背景技术：

1、松江鲈(trachidermus fasciatus)，俗称四鳃鲈鱼，隶属于鲉形目、杜父鱼科、松江鲈鱼属，是一种降海溯河洄游性鱼类。因其肉质鲜美，自古被誉为“中国四大名鱼”之一，具有较高的经济价值。近年来，由于人类活动的加剧，致使松江鲈所需的栖息场所，生活条件等综合环境遭到破坏。历史上曾广泛分布于我国厦门以北沿海地区的松江鲈，目前仅少量残存于黄渤海和东海的沿岸以及相邻淡水水域，并已于1988年被列为国家二级保护动物。因此，人工繁殖就成为目前拯救这一濒危物种的重要方法之一。

2、在人工养殖过程中发现，雌性与雄性松江鲈在繁殖习性上具有明显差别，松江鲈雌鱼的繁殖投入主要体现在交配行为和卵粒的提供上，雄鱼的繁殖投入主要体现在优质产卵场的占据以及护卵行为上。交配结束后，雌鱼立即离开，而雄鱼则需要负责保护卵而停留在产卵场周边。但在非繁殖季节，很难通过外部形态以及行为特征来分辨雌雄松江鲈。

3、而在松江鲈选育过程中，为了获得性状更好的子代，就需要在前期养殖过程中最大程度的优化具有优良性状雌雄的比例。考虑到松江鲈很难通过外部特征来区分雌雄性别。在生产实践过程中，可通过解剖的方式对松江鲈的性别进行鉴定，但该方法必然会造成极大概率的死亡，不利于珍贵鱼类资源的保护。

4、因此，开发识别与鉴定松江鲈遗传性别的分子标记，建立快速鉴定松江鲈遗传性别的方法成为松江鲈繁育过程中的一项亟待解决的难题。

5、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记，以至少解决现有技术中缺少快速鉴定松江鲈遗传性别的方法的技术问题。

2、本发明的目的之二在于提供一种鉴定松江鲈遗传性别的方法。

3、本发明的目的之三在于提供检测上述的分子标记的物质在鉴定松江鲈遗传性别中的应用。

4、本发明的目的之四在于提供用于扩增上述的分子标记的引物对。

5、本发明的目的之五在于提供上述的分子标记或上述的引物对在鉴定松江鲈遗传性别或制备鉴定松江鲈遗传性别的产品中的应用。

6、本发明的目的之六在于提供一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂。

7、本发明的目的之七在于提供一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂盒。

8、为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

9、第一方面，本发明提供了一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记，所述分子标记为雌雄松江鲈基因组之间的差异dna序列，所述差异dna序列的核苷酸序列为agggacg。

10、第二方面，本发明提供了一种鉴定松江鲈遗传性别的方法，其特征在于，包括检测待鉴定松江鲈的基因组dna样本中是否存在不包含上述分子标记的特异性片段，若是，则待检测松江鲈为雄性，否则为雌性。

11、进一步的，所述检测方法包括pcr扩增，若扩增产物中存两个目标条带，则对应待检测松江鲈为雄性；若扩增产物中仅存在一个目标条带，则对应待检测松江鲈为雌性。

12、进一步的，用于所述pcr扩增的引物对包括核苷酸序列如seq id no.3和seq idno.4所示的dna分子。

13、进一步的，所述两个目标条带分别为长度为123bp和长度为130bp的目标条带；所述一个目标带为长度为130bp的目标条带；

14、所述长度为123bp的目标条带对应的扩增产物的核苷酸序列如seq id no.1所，所述长度为130bp的目标条带对应的扩增产物的核苷酸序列如seq id no.2所示。

15、第三方面，本发明提供了检测上述的分子标记的物质在鉴定松江鲈遗传性别中的应用。

16、第四方面，本发明提供了用于扩增上述的分子标记的引物对，所述引物对包括核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示的dna分子。

17、第五方面，本发明提供了上述的分子标记或上述的引物对在制备鉴定松江鲈遗传性别的产品中的应用。

18、第六方面，本发明提供了一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂，包括上述的引物对。

19、第七方面，本发明提供了一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂盒，其特征在于，包括上述的引物对或上述的试剂；

20、优选地，还包括dna聚合酶、mg2+、dntp、pcr buffer以及无菌水中的一种或多种。

21、本发明提供的一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记，构建雌雄松江鲈基因组重测序数据，利用重测序数据进行雌雄比较分析，最终在筛选出一段序列在雄性松江鲈中特异缺失，为雌雄松江鲈基因组之间的差异dna序列；提供的分子标记均与松江鲈遗传性别相关，能够作为鉴定松江鲈遗传性别的分子标记。解决了现有技术中缺少快速鉴定松江鲈遗传性别的方法的技术问题。

22、本发明另一方面提供的一种鉴定松江鲈遗传性别的方法，利用本发明引物对解剖检查确定雌雄的松江鲈基因组dna进行pcr扩增，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱比较，得到鉴定结果。解决了通过解剖的方式对松江鲈的性别进行鉴定导致极大概率的死亡，而不利于珍贵鱼类资源保护的技术问题。

技术特征：

1.一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记，其特征在于，所述分子标记为雌雄松江鲈基因组之间的差异dna序列，所述差异dna序列的核苷酸序列为agggacg。

2.一种鉴定松江鲈遗传性别的方法，其特征在于，包括检测待鉴定松江鲈的基因组dna样本中是否存在不包含权利要求1所述分子标记的特异性片段，若是，则待检测松江鲈为雄性，否则为雌性。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述检测的方法包括pcr扩增，若扩增产物中存两个目标条带，则对应待检测松江鲈为雄性；若扩增产物中仅存在一个目标条带，则对应待检测松江鲈为雌性。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用于所述pcr扩增的引物对包括核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示的dna分子。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述两个目标条带分别为长度为123bp和长度为130bp的目标条带；所述一个目标带为长度为130bp的目标条带；

6.检测权利要求1所述的分子标记的物质在鉴定松江鲈遗传性别中的应用。

7.用于扩增权利要求1所述的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对包括核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示的dna分子。

8.权利要求1所述的分子标记或权利要求7所述的引物对在制备鉴定松江鲈遗传性别的产品中的应用。

9.一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂，其特征在于，包括权利要求7所述的引物对。

10.一种用于鉴定松江鲈遗传性别的试剂盒，其特征在于，包括权利要求7所述的引物对或权利要求9所述的试剂；

技术总结
本发明提供了一种鉴定松江鲈遗传性别的分子标记及其应用，涉及水产育种技术领域，所述分子标记为雌雄松江鲈基因组之间的差异DNA序列，构建雌雄松江鲈基因组重测序数据，利用重测序数据进行雌雄比较分析，最终在筛选出一段序列在雄性松江鲈中特异缺失；提供的分子标记均与松江鲈遗传性别相关，能够作为鉴定松江鲈遗传性别的分子标记。解决了现有技术中缺少快速鉴定松江鲈遗传性别的方法的技术问题。

技术研发人员：张祎桐,侯吉伦,何忠伟,刘玉峰,王桂兴,任玉芹,张晓彦,伞利择,任建功,曹巍
受保护的技术使用者：中国水产科学研究院北戴河中心实验站
技术研发日：
技术公布日：2024/9/9