本申请属于生物,具体地,涉及靶向pdl1和cd3的双特异性抗体及其应用。
背景技术:
1、双特异性抗体是可同时特异性结合两个抗原位点的抗体。
2、pdl1在多种肿瘤中pdl1表达显著上调,其通过结合t细胞表面的pd-1受体,传递免疫抑制性信号,促进t细胞功能耗竭,降低患者的抗癌免疫功能。利用抗体阻断pd-1与pdl1相互作用,能够逆转t细胞的免疫耗竭,恢复抗癌功能。截止到目前,包括opdivo、keytruda等pd-1抗体、以及tecentirq(atezolizumab)等pdl1抗体已经使得非常多的患者受益,但是应当指出,并非所有患者都响应pd-1/l1单抗疗法,其总体有效率在30%左右,仍有更多的患者无法从中受益。
3、目前针对cd3的双特异性抗体可能导致严重的细胞因子风暴等副作用,限制了其临床应用。许多cd3抗体具有物种特异性,在非人灵长类中进行安全性测试的可行性低。而且,现有的cd3双特异性抗体存在细胞因子毒性过高及序列稳定性不佳等问题。
4、因此,需要开发新的靶向pdl1和cd3的双特异性抗体。
技术实现思路
1、本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本申请提出了一种靶向pdl1和cd3的高安全性双特异性抗体。
2、具体而言,本申请提供了如下技术方案:
3、第一方面,本申请提出了一种双特异性抗体。根据本申请的实施例,所述双特异性抗体包括:第一抗原结合区,所述第一抗原结合区具有cd3结合活性;和第二抗原结合区,所述第二抗原结合区具有pdl1结合活性;其中,所述第一抗原结合区包括抗cd3抗体,所述抗cd3抗体包括重链框架区hfr,所述hfr包括选自seq id no:11~14、19~22所示氨基酸序列或与seq id no:11~14、19~22具有至少80%同源性的氨基酸序列。在本申请的一些示例中,具有前述抗cd3抗体框架区序列的双特异性抗体稳定性高,能高特异性、高亲和力结合pdl1,高特异性、低亲和力结合cd3,促进pbmc杀伤肿瘤细胞,具有良好的抗癌活性以及更高的安全性;有效减少cd3双特异性抗体引起的细胞因子风暴发生风险。
4、第二方面,本申请提出了一种核酸分子。根据本申请的实施例,所述核酸分子编码本申请第一方面所述的双特异性抗体。在本申请的一些示例中,前述核酸分子可编码能同时靶向pdl1和cd3的双特异性抗体。
5、第三方面,本申请提出了一种表达载体。根据本申请的实施例,所述表达载体携带本申请第二方面所述的核酸分子。在本申请的一些示例中,前述表达载体可在适合的宿主细胞中大量表达高特异性、高亲和力结合pdl1,高特异性、低亲和力结合cd3的双特异性抗体。
6、第四方面,本申请提出了一种制备第一方面所述双特异性抗体的方法。根据本申请的实施例,所述方法包括:将本申请第三方面所述的表达载体引入到细胞中;将所述细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养,以便获得所述双特异性抗体。在本申请的一些示例中,基于本方法制备获得的双特异性抗体能够高特异性、高亲和力结合pdl1,高特异性、低亲和力结合cd3,促进pbmc杀伤肿瘤细胞,具有良好的抗癌活性以及更高的安全性;有效减少cd3双特异性抗体引起的细胞因子风暴发生风险。
7、第五方面,本申请提出了一种重组细胞。根据本申请的实施例,所述重组细胞携带本申请第一方面所述的双特异性抗体、第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的表达载体。其中,前述重组细胞是通过转染或者转化表达载体获得的。在本申请的一些示例中,前述重组细胞在合适条件下可高效表达前述双特异性抗体。
8、第六方面,本申请提出了一种药物组合物。根据本申请的实施例,所述药物组合物包括:本申请第一方面所述的双特异性抗体、第二方面所述的核酸分子、第三方面所述的表达载体或第五方面所述的重组细胞。在本申请的一些示例中,前述双特异性抗体能够有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞,具有良好的抗癌活性以及更高的安全性;有效减少cd3双特异性抗体引起的细胞因子风暴发生风险。由此,基于该抗体制备的药物组合物可进一步用于预防或治疗pdl1和/或cd3介导的相关疾病。
9、第七方面,本申请提出了第一方面所述的双特异性抗体、第二方面所述的核酸分子、第三方面所述的表达载体、第五方面所述的重组细胞或第六方面所述的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗或者预防肿瘤。在本申请的一些示例中,前述双特异性抗体能够有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞,具有良好的抗癌活性以及更高的安全性;有效减少cd3双特异性抗体引起的细胞因子风暴发生风险。包含前述双特异性抗体等一系列物质的药物同样具有显著的治疗或预防肿瘤的作用。
10、第八方面,本申请提出了第一方面所述的双特异性抗体、第二方面所述的核酸分子、第三方面所述的表达载体、第五方面所述的重组细胞或第六方面所述的药物组合物在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测pdl1和/或cd3。本领域技术人员能够理解的是,前面针对双特异性抗体的特征和优点,同样适用于该用途,在此不再赘述。
11、第九方面,本申请提出了一种试剂盒。根据本申请的实施例,所述试剂盒包含第一方面所述的双特异性抗体。在本申请的一些示例中,前述双特异性抗体能够高特异性、高亲和力结合pdl1,高特异性、低亲和力结合cd3。因此,包含所述双特异性抗体的试剂盒可用于检测pdl1和/或cd3蛋白。前述试剂盒可用于科学研究,如定性或定量检测生物样本中的pdl1和cd3蛋白,也可以用于对个体状态进行判断,如获得所述个体的pdl1和cd3蛋白水平后,判断其pdl1和cd3蛋白水平是否高于或低于正常水平。
12、本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本申请的实践了解到。
1.一种双特异性抗体,其特征在于,包括:
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其特征在于,所述抗cd3抗体重链框架区hfr包括:分别如seq id no:11~14、19~22所示氨基酸序列的hfr1、hfr2、hfr3和hfr4;其中,
3.根据权利要求2所述的双特异性抗体,其特征在于,所述抗cd3抗体包括重链互补决定区hcdr,所述hcdr包含选自seq id no:4~6中的至少之一或与seq id no:4~6具有至少80%同源性的氨基酸序列;
4.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其特征在于,所述第二抗原结合区包括抗pdl1抗体,所述抗pdl1抗体包括重链互补决定区hcdr,所述抗pdl1抗体的hcdr包含选自seq idno:26~28中的至少之一或与seq id no:26~28具有至少80%同源性的氨基酸序列;
5.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其特征在于,所述第一抗原结合区包括第一抗cd3抗体scfv片段,所述第一抗cd3抗体scfv片段包括抗cd3抗体重链可变区、cd3抗体轻链可变区和连接肽1;
6.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其特征在于,所述第一抗原结合区包括第一抗pdl1抗体fab片段和第一抗cd3抗体scfv片段,所述第一抗pdl1抗体fab片段和第一抗cd3抗体scfv片段通过连接肽2相连,
7.根据权利要求5或6所述的双特异性抗体,其特征在于,所述第一ch1和第二ch1分别独立选自人源抗体igg1;
8.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其特征在于,所述双特异性抗体第一抗原结合区具有如seq id no:47所示的氨基酸序列,所述双特异性抗体第二抗原结合区具有如seqid no:48所示的氨基酸序列;
9.一种核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体;
10.一种表达载体,其特征在于,携带权利要求9所述的核酸分子。
11.一种制备权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体的方法,其特征在于,包括:
12.一种重组细胞,其特征在于,所述重组细胞携带权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体、权利要求9所述的核酸分子或权利要求10所述的表达载体。
13.一种药物组合物,其特征在于,包括:
14.权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体、权利要求12所述的重组细胞或权利要求13所述的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗或者预防肿瘤。
15.根据权利要求14所述的用途,其特征在于,所述肿瘤包括下列中的至少之一:肺癌、胰腺癌和胃癌。
16.权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体、权利要求12所述的重组细胞或权利要求13所述的药物组合物在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测pdl1和/或cd3。
17.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含权利要求1~8任一项所述的双特异性抗体。
18.根据权利要求17所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒用于检测pdl1和cd3中的至少之一。