一株高产漆酶的棘孢木霉TasJk26及其应用

本发明涉及微生物，特别是涉及一株高产漆酶的棘孢木霉tasjk26及其应用。

背景技术：

1、漆酶(ec1.10.3.2)是一种多酚氧化酶，可与多酚类和芳香二胺类等多种底物作用，同时还可以将单电子氧还原成水。自从1883年日本学者yoshida首次在日本紫胶漆树中发现之后，国内外学者在植物、真菌、昆虫和细菌中均发现漆酶。由于漆酶在生物合成、食品加工、生物检测、造纸工业及环境有毒化合物降解等领域有着重要的应用价值与潜力，因此，其成为近年来的研究热点。目前，真菌是漆酶的主要产生菌，真菌漆酶是一种糖蛋白，由肽链、糖配基和cu2+3个部分组成，分子量在60-390kd之间，主要功能有降解木质素、参与自身黑色素合成以及降解环境污染物等。

2、目前常见的产漆酶真菌主要为担子菌类，其中以白腐真菌为主。白腐真菌多为好氧微生物，培养温度一般在28～30℃左右，但白腐真菌在培养过程中，培养条件对其产漆酶的能力有很大影响，经常出现虽然菌体生长快速，但是漆酶产量却十分低下，不足以用于纯化利用的问题。因此，探索其它具有高产漆酶能力的真菌，以提高利用微生物生产漆酶的产量，进而更好地将其应用于降解环境有机污染物中，是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一株高产漆酶的棘孢木霉tasjk26及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本发明提供的棘孢木霉tasjk26所产漆酶酶活较高，为生物降解修复环境有机污染物提供了理论与实践基础，在有机污染物治理方面具有重要价值。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一株高产漆酶的棘孢木霉(trichoderma asperellum)tasjk26，所述棘孢木霉tasjk26的保藏编号为cctcc no:m 20232402。

4、本发明还提供一种生产漆酶的方法，包括以所述的棘孢木霉tasjk26进行发酵培养，获得漆酶的步骤。

5、进一步地，所述发酵培养的培养基含有1wt％的麦芽糖和0.5wt％的胰蛋白胨，所述麦芽糖为碳源，所述胰蛋白胨为氮源。

6、进一步地，所述培养基的ph值为6。

7、进一步地，所述发酵培养的培养时间为5d。

8、进一步地，所述发酵培养结束后还包括纯化步骤。

9、本发明还提供所述的方法获得的漆酶。

10、本发明还提供所述的棘孢木霉tasjk26或所述的漆酶在降解有机染料中的应用。

11、进一步地，所述有机染料包括孔雀绿、结晶紫、刚果红、中性红和甲基橙。

12、本发明还提供所述的棘孢木霉tasjk26或所述的漆酶在修复环境有机污染中的应用。

13、本发明公开了以下技术效果：

14、本发明从江西省南昌市土壤中筛选获得一株高产漆酶的棘孢木霉tasjk26，并对其培养条件进行优化，该菌株在碳源为麦芽糖，氮源为胰蛋白胨，且ph值为6的培养基中，28℃培养5d获得的粗酶液酶活较高，高达2.56u/ml。所述粗酶液经硫酸铵沉淀透析，deae-纤维素阴离子层析纯化后，漆酶的回收率为23.9％。纯化后的漆酶以abts为底物时酶促反应米氏常数km为0.175mol/l。纯化后的漆酶对有机染料孔雀绿、结晶紫、刚果红、中性红和甲基橙均有降解能力，降解率分别为69.1％、60.9％、54.6％、40.1％和22.2％。本发明提供的棘孢木霉tasjk26为生物降解修复环境有机污染物提供了理论与实践基础，在有机污染物治理方面具有重要价值。

15、生物保藏信息

16、生物材料名称：棘孢木霉tasjk26；

17、保藏机构：中国典型培养物保藏中心；

18、保藏编号：cctcc no：m 20232402；

19、保藏日期：2023年11月30日；

20、保藏地址：中国.武汉.武汉大学；

21、分类学命名：trichoderma asperellum。

技术特征：

1.一株高产漆酶的棘孢木霉(trichoderma asperellum)tasjk26，其特征在于，所述棘孢木霉tasjk26的保藏编号为cctcc no:m 20232402。

2.一种生产漆酶的方法，其特征在于，包括以权利要求1所述的棘孢木霉tasjk26进行发酵培养，获得漆酶的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的培养基含有1wt％的麦芽糖和0.5wt％的胰蛋白胨。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养基的ph值为6。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的培养时间为5d。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养结束后还包括纯化步骤。

7.如权利要求2～6任一项所述的方法获得的漆酶。

8.权利要求1所述的棘孢木霉tasjk26或权利要求7所述的漆酶在降解有机染料中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述有机染料包括孔雀绿、结晶紫、刚果红、中性红和甲基橙。

10.权利要求1所述的棘孢木霉tasjk26或权利要求7所述的漆酶在修复环境有机污染中的应用。

技术总结
本发明公开了一株高产漆酶的棘孢木霉TasJk26及其应用，属于微生物技术领域。所述棘孢木霉TasJk26的保藏编号为CCTCC NO:M 20232402。本发明通过单因素优化实验发现，该菌株在碳源为麦芽糖，氮源为胰蛋白胨，且pH值为6的培养基中，28℃培养5d获得的粗酶液酶活较高，高达2.56U/mL。该粗酶液纯化后获得的漆酶对有机染料孔雀绿、结晶紫、刚果红、中性红和甲基橙均有降解能力。本发明提供的棘孢木霉TasJk26为生物降解修复环境有机污染物提供了理论与实践基础，在有机污染物治理方面具有重要价值。

技术研发人员：范莉莉,傅科鹤,涂序堂,朱齐奇,潘佳颖,姬佳铭,荀月凤,黄桢英
受保护的技术使用者：南昌师范学院
技术研发日：
技术公布日：2024/8/26