口腔癌诊断标志物SLC37A4-Exon7剪切异构体及应用的制作方法

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种用于检测口腔癌组织中slc37a4-exon7剪切异构体及其检测试剂的应用。

背景技术：

1、口腔癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，目前，口腔癌的治疗方式主要包括手术治疗、放射治疗、化学药物治疗等。尽管近些年来国内外科学家对口腔癌作了大量的研究，但口腔癌的病因尚未明确，总体生存率并没有显著提高。因此，深入研究口腔癌发生发展的分子机制，并寻找新的高效诊断标记物，对口腔癌的诊断和治疗，以及提高患者的生存率和生活质量具有重要的理论和实践意义。

2、前体mrna(pre-mrna)的可变剪切(alternative splicing,as)是重要的基因调控过程，极大地丰富了转录组的组成部分，有助于转录组和蛋白质组的多样性。随着癌症基因组和转录组高通量测序的增加揭示了多种癌症存在pre-mrna的剪切改变。由于可变剪切产生的异构体通常与癌症的发生发展相关联，因此可变剪切过程本身就是基因治疗的潜在目标，可变剪切产生的异构体很可能成为一种新的生物标志物用于肿瘤的早期诊断和预后评估。

技术实现思路

1、本发明发现野生型的slc37a4的编码区域(coding sequence,cds)包含9个外显子(slc37a4-wt)，第7号外显子可以发生跳跃形成slc37a4-exon7剪切异构体，且在口腔癌中也有可能发挥着重要作用。我们前期通过实验检测到slc37a4-wt在正常癌旁组织中表达丰度较高，且在口腔癌组织中几乎不表达，而slc37a4-exon7剪切异构体则正好相反，在癌组织中显著过表达，在正常癌旁组织中表达丰度很低。通过进一步研究我们证实slc37a4-exon7剪切异构体可以促进口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移，从而在口腔癌的恶性进程中发挥着重要的癌基因作用。

2、本发明的首要目的是提供从口腔癌组织中发现的大小1290bp的剪切异构体slc37a4-exon7，并发现了它与口腔癌之间存在的关系，有可能作为口腔癌诊断标记物和治疗的靶点。该剪切异构体的序列见seq id no.1。

3、本发明的第二个目的是提供检测所述的slc37a4-exon7剪切异构体的试剂在制备口腔癌诊断制剂中的应用。

4、进一步的，所述的检测slc37a4-exon7剪切异构体的试剂包括pcr检测试剂。

5、所述的pcr试剂中的引物为：

6、上游引物：5’-gactgtccaactacgggaaccct-3’

7、下游引物：5’-gaggggcactctcgttggctat-3’。

8、所述的pcr试剂中的gapdh内参引物为：

9、上游引物：5’-ggagcgagatccctccaaaat-3’

10、下游引物：5’-ggctgttgtcatacttctcatgg-3’。

11、本发明还提供了过表达slc37a4-exon7剪切异构体的试剂在制备体外促进口腔癌细胞增殖和迁移制剂中的应用。

12、本发明收集多例口腔癌患者肿瘤组织和正常癌旁组织，利用pcr技术检测了slc37a4-exon7剪切异构体的表达情况。结果显示，与癌旁正常组织相比，slc37a4-exon7剪切异构体在肿瘤组织中明显高表达，在肿瘤组中slc37a4-exon7剪切异构体的表达水平大约是正常癌旁组织的10.5倍，两组数据的差异具有统计学意义(p<0.0001)。因此，slc37a4-exon7剪切异构体在口腔癌组织中高表达，slc37a4-exon7剪切异构体对口腔癌的发生发展可能具有重要的生物学功能，可以作为口腔癌诊断分子标记物。

技术特征：

1.口腔癌诊断标志物slc37a4-exon7剪切异构体，序列如seq id no.1所示。

2.检测slc37a4-exon7剪切异构体的试剂在制备诊断口腔癌制剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测slc37a4-exon7剪切异构体的试剂包括pcr检测试剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的pcr检测试剂中的引物为：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的pcr试剂中的gapdh内参引物为：

6.过表达slc37a4-exon7剪切异构体的试剂在制备体外促进口腔癌细胞增殖和迁移制剂中的应用。

7.抑制slc37a4-exon7剪切异构体表达的试剂在制备治疗口腔癌制剂中的应用。

技术总结
本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种口腔癌诊断标志物SLC37A4‑Exon7剪切异构体及应用。本发明收集多例口腔癌组织和癌旁组织，利用半定量RT‑PCR技术检测了SLC37A4pre‑mRNA 7号外显子发生跳跃产生的剪切异构体的表达情况。结果显示，与癌旁组织相比，SLC37A4‑Exon7剪切异构体在口腔癌组织中表达显著升高，在肿瘤组织中其表达水平大约是癌旁正常组织的10.5倍，两组数据的差异具有统计学意义(P<0.0001)。因此SLC37A4‑Exon7剪切异构体在口腔癌组织中高表达，其对口腔癌的发生发展可能具有重要的生物学功能，可以作为口腔癌诊断分子标记物。

技术研发人员：彭球,周钰娟,廖前进,马健,欧阳琳达,韩亚骞,田嗥,王路娟,蒋贤杰,许雪萌,任宗耀
受保护的技术使用者：湖南省肿瘤医院
技术研发日：
技术公布日：2024/8/27