靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体及其制备方法和应用

本发明属于生物，具体涉及一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟(african swine fever,asf)是由非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus,asfv)感染家猪和野猪引起的一种急性传染病。该病危害严重，感染猪只的病死率可高达100％，给养猪业造成了巨大的威胁和经济损失。世界动物卫生组织(oie)将非洲猪瘟列为法定必须通报的动物疫病之一，我国将其归类为一类动物传染病。目前，对该病的防控是我国乃至全球共同面临和急需解决的重要问题。非洲猪瘟的临床症状与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等猪的其他高热、出血性疾病有很大的相似性，临床上难以实现辨别诊断，因此实验室诊断对于该病的防控至关重要。目前，非洲猪瘟在我国呈现出高致死率的基因ii型毒株、中/低致死率基因ii型缺失毒株、低致死率基因i型毒株、高致死率基因i型和基因ii型重组毒株混合流行的复杂态势。弱毒力毒株的出现使非洲猪瘟存在隐蔽传播的可能，仅靠病毒核酸或其他病原学检测无法满足该病监测与防控的要求，急需同时开展非洲猪瘟病毒抗体的监测，从而达到早发现、早防控的效果。由于非洲猪瘟没有安全有效的疫苗和治疗措施，开展其他抗病毒策略的研究将为该病的防控提供技术手段。

2、抗体是由效应b细胞受到抗原刺激机体分泌的一种结构呈“y”字型的球状蛋白质，传统抗体是由两条轻链和两条重链组成。与传统的抗体不同，骆驼科的动物血清中存在了一种天然缺失轻链和重链ch1区的重链抗体，重链抗体的可变区是目前自然界中存在的已知结合抗原的最小片段，也被称作纳米抗体(nanobody)。与常规抗体相比，纳米抗体缺少轻链以及第一个重链恒定区(constant region of heavy chain,ch)结构域，它是具有完整抗原结合片段的最小抗体。由于缺乏轻链以及第一个ch。相较于传统抗体，纳米抗体具有相对分子质量小、溶解性高、亲和力高、低免疫原性、热稳定性和高产率等优势，在诊断检测、生物和医学成像、免疫研究、药物靶向递送、治疗性抗体等领域具有广阔的应用前景。

技术实现思路

1、针对上述技术问题，本发明提供一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体及其制备方法和应用，所述纳米抗体与非洲猪瘟病毒具有较高的亲和力，能够特异性识别和结合非洲猪瘟病毒，可用于非洲猪瘟的诊断、预防或治疗。具体包括以下内容：

2、第一方面，本发明提供了一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-26，所述纳米抗体kr-26的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3、第二方面，本发明提供了一种编码上述第一方面所述纳米抗体kr-26的核酸。

4、优选地，所述核酸序列如sqe id no.2所示。

5、第三方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体含有上述第二方面所述的核酸序列。

6、第四方面，本发明提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：

7、(i)上述第一方面所述的纳米抗体kr-26；

8、(ii)和选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或vlp、或其组合。

9、第五方面，本发明提供了上述第一方面所述的纳米抗体kr-26或上述第四方面所述的免疫偶联物在制备非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒中的应用。

10、第六方面，本发明提供了一种非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述第一方面所述的纳米抗体kr-26。

11、第七方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括上述第一方面所述的纳米抗体kr-26。

12、第八方面，本发明提供了上述第一方面所述的纳米抗体kr-26的制备方法，所述方法包括：

13、(1)合成编码上述第一方面所述纳米抗体kr-26的核苷酸序列；

14、(2)将步骤(1)所述核苷酸序列与载体/质粒连接，构建纳米抗体kr-26的表达载体；

15、(3)将纳米抗体kr-26的表达载体转化细菌，构建重组细胞，进行诱导表达并纯化获得纳米抗体kr-26。

16、优选地，所述纳米抗体kr-26的核苷酸序列如sqe id no.2所示。

17、第九方面，本发明提供了一种扩增编码上述第一方面所述纳米抗体kr-26的核苷酸序列的引物，其特征在于，所述引物为：

18、上游引物f:ccggaattccggatgcatgtgcagctggtggag(seq id no.3所示)；

19、下游引物r:cccaagcttgggtgaggagacggtgaccagggt(seq id no.4所示)。

20、本发明的有益效果是：本发明提供了一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-26，所述纳米抗体kr-26是通过噬菌体展示纳米抗体文库的构建和筛选获得，为重链抗体可变区片段，具有seq id no.1所示的氨基酸序列；本发明所述纳米抗体与非洲猪瘟病毒具有较高的亲和力，能够特异性识别和结合非洲猪瘟病毒，可用于非洲猪瘟的诊断、预防或治疗；并且本发明所述的纳米抗体通过大肠杆菌表达系统表达，制备方法简单。

技术特征：

1.一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-26，所述纳米抗体kr-26的氨基酸序列如seqid no.1所示。

2.一种编码权利要求1所述纳米抗体kr-26的核酸。

3.如权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸序列如sqe id no.2所示。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸序列。

5.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：

6.如权利要求1所述的纳米抗体kr-26或权利要求5所述的免疫偶联物在制备非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒中的应用。

7.一种非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述的纳米抗体kr-26。

8.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的纳米抗体kr-26。

9.如权利要求1所述的纳米抗体kr-26的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

10.一种扩增编码权利要求1所述纳米抗体kr-26的核苷酸序列的引物，其特征在于，所述引物为：

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体及其制备方法和应用。本发明提供了一种靶向非洲猪瘟病毒的纳米抗体KR‑26，所述纳米抗体KR‑26是通过噬菌体展示纳米抗体文库的构建和筛选获得，为重链抗体可变区片段，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明所述纳米抗体与非洲猪瘟病毒具有较高的亲和力，能够特异性识别和结合非洲猪瘟病毒，可用于非洲猪瘟的诊断、预防或治疗。

技术研发人员：杨吉飞,牛庆丽,王锦明,陈雯婷,张忠辉,关贵全,殷宏
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/9/12