一株能够提高甘草活性成分含量的链孢霉、菌剂及其应用

本发明涉及微生物和中药有效成分提取领域，具体涉及一株能够促进甘草生长和提高活性成分含量的链孢霉、菌剂及其应用。

背景技术：

1、甘草属(glycyrrhiza)是多年生草本或半灌木，隶属于豆科蝶形花亚科(papiliantae taub.)，因其根部含有丰富的生物活性成分而闻名。2020年版《中华人民共和国药典》第一部收录的甘草为：乌拉尔甘草(glycyrrhiza uralensis fisch.)、胀果甘草(glycyrrhiza inflata bat.)和光果甘草(glycyrrhiaglabra l.)。甘草多生长在干燥草原和阳光充足的地方，偏好轻度碱性和沙质的土壤，中国的野生甘草主要分布于黄河流域以北各省区，如新疆、宁夏、西藏等地分布较多。

2、甘草具有抗菌、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗糖尿病等作用，有祛痰止咳、缓急止痛等功效。目前，已从甘草中分离得到400多种化合物，主要包括萜类、黄酮类、生物碱类和多糖等成分。甘草及其主要活性成分广泛应用于医药、食品和化妆品行业(张利，2014；尤梦瑶等，2022)。植物内生菌“endophytes”是由debary在1866年首次提出的(yadav et al.,2021)，植物内生菌指生活在植物组织的微生物，用以区分那些生活在植物表面的微生物。被感染的宿主植物不表现出外在病症，可通过组织学方法从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物dna的方法来证明其内生(邹文欣等，2001)。1993年，stierle.a等采用微生物发酵法首次从短叶红豆杉韧皮部的内生真菌(taxomycesandreanae)中分离到了紫杉醇，自此对植物内生菌的研究开始步入新阶段。

3、内生菌在与宿主长期共存的过程中，能够与宿主发生基因交换，因而能够产生与宿主相同或相似的代谢产物。此外，植物内生菌还能够产生抗菌活性物质从而抑制植物病原菌生长。近年来，从各种不同的植物内生菌中分离到不同的抗菌活性成分，包括生物碱、多肽、萜类、酮类等。植物内生菌能够快速进行繁殖和培养，因此当发现活性物质时，也就很容易对其进行扩大培养，从而快速积累目标产物。目前，虽然已有甘草内生菌的相关研究，但内生菌与次生代谢产物之间的联系尚未明确，有关分离菌株的详细鉴定以及与宿主植物的生态、生理学效应等方面关注甚少。

4、对药用植物甘草的内生菌筛选与鉴定，抑菌作用的机理与效果及内生菌活性代谢物等方面展开研究，进一步探讨内生微生物的发展前景，为利用药用植物的内生菌及其次生代谢产物作为现代工业发酵和生产的重要的药物原料奠定基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一株能够促进甘草生长和提高活性成分含量的链孢霉、菌剂及其应用。

2、本发明从光果甘草叶片中分离并筛选了一株能够用于促进甘草生长和提高活性成分含量的真菌菌株，鉴定为链孢霉(alternaria alternata)d9于2024年3月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号：gdmcc no.64455。

3、本发明还提供一种能够促进甘草生长和提高活性成分含量的菌剂，其包括所述链孢霉d9和/或其发酵液。

4、本发明还提供上述链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进甘草生长和提高活性成分含量中的应用。

5、所述的甘草是乌拉尔甘草、胀果甘草和/或光果甘草。

6、所述的活性成分是总黄酮、甘草酸、异甘草苷、刺甘草查尔酮甘草次酸、甘草查尔酮a、甘草查尔酮c和异甘草素。

7、优选，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进乌拉尔甘草、胀果甘草和/或光果甘草中甘草酸、异甘草苷和刺甘草查尔酮的合成中的应用。

8、优选，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进胀果甘草和光果甘草中甘草次酸的合成。

9、优选，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进胀果甘草和乌拉尔甘草中甘草查尔酮a的积累中的应用。

10、优选，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进光果甘草和乌拉尔甘草中甘草查尔酮c的合成。

11、优选，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或上述菌剂在促进胀果甘草根部生长，并且增加总黄酮含量。

12、本发明的优点：

13、本发明筛选到的链孢霉d9是从甘草中分离的内生菌，其发酵液和菌饼能够促进甘草生长，并提高甘草活性成分的含量；同时对甘草的生长发育没有影响，是一种安全且有效的微生物肥料。

14、alternaria alternata d9于2024年3月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号：gdmccno.64455。

技术特征：

1.链孢霉(alternaria alternata)d9，保藏编号：gdmcc no.64455。

2.一种能够促进甘草生长和提高活性成分含量的菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的链孢霉d9和/或其发酵液。

3.权利要求1所述的链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或权利要求2所述的菌剂在促进甘草生长和提高活性成分含量中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的甘草是乌拉尔甘草、胀果甘草和/或光果甘草。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的活性成分是总黄酮、甘草酸、异甘草苷、刺甘草查尔酮甘草次酸、甘草查尔酮a、甘草查尔酮c和/或异甘草素。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或菌剂在促进乌拉尔甘草、胀果甘草和/或光果甘草中甘草酸、异甘草苷和刺甘草查尔酮的合成中的应用。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或菌剂在促进胀果甘草和光果甘草中甘草次酸的合成中的应用。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或菌剂在促进胀果甘草和乌拉尔甘草中甘草查尔酮a的积累中的应用。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或菌剂在促进光果甘草和乌拉尔甘草中甘草查尔酮c的合成中的应用。

10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是链孢霉d9、链孢霉d9的发酵液或菌剂在促进胀果甘草根部生长，并且增加总黄酮含量中的应用。

技术总结
本发明公开了株能够提高甘草活性成分含量的链孢霉、菌剂及其应用。链孢霉D9于2024年3月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号：GDMCC No.64455。本发明筛选到的链孢霉D9是从甘草中分离的内生菌，其发酵液和菌饼能够促进甘草生长，并提高甘草活性成分的含量；同时对甘草的生长发育没有影响，是一种安全且有效的微生物肥料。

技术研发人员：李勇青,王瑛,黄琬莹,呂宛绵
受保护的技术使用者：中国科学院华南植物园
技术研发日：
技术公布日：2024/11/11