一种基于纳米材料的外周血游离DNA保护剂及其制备方法与流程

本发明涉及生物，具体涉及一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂及其制备方法。

背景技术：

1、循环游离dna(circulating cell-free dna，cfdna)，是游离于人体外周血细胞之外的核酸类物质，这些分子主要源于正常细胞生命活动过程、细胞坏死、细胞焦亡、细胞凋亡以及其他因素(如外伤、移植等)，携带着有关个体健康和疾病状态的重要信息，被认为是许多疾病的潜在生物标志物。其大小主要在几十到二百bp左右，半衰期在数小时左右。近年来，随着精准医疗的不断发展，cfdna在疾病的早期诊断、预后、监测等方面显示出重要潜在价值，通过捕获血液中游离dna进行无创产前基因检测(nipt)、免疫性疾病等非肿瘤类疾病的病情分析与疗效观察和肿瘤诊断等，已逐步应用于临床。

2、然而，血液中cfdna本身易降解，且易受污染，若要将其应用于分子检测还应保证其浓度和纯度。与此同时，在采血后的血液保存和运输过程中，由于受到条件、时间、温度和颠晃等因素的限制，在获取血样后无法及时分离，血液中cfdna长时间未被保护，从而被破坏和分解，影响后续的检测，干扰对病情的判断，从而限制了其实际应用。

3、目前，市面上存在着各式采血管，通过添加各种保护试剂，可以在一定程度上改善血浆中游离dna的保存问题。但这些采血管大多是运用化学和物理手段用于防止血液凝结，并不能有效保护游离的核酸。在治疗期间，因条件或时间所限，不能在获得血液后立即将血浆分离出来，长时间如此，血液中的细胞破裂，血液中游离dna发生降解和污染，可能造成实验结果的假阴性，干扰实验的准确性，不能为临床提供有价值的资料。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，由稳定剂、营养剂、抗氧化剂、抑菌剂、螯合剂、细胞冷冻保护剂、缓冲剂、zif-8@bsa组成。

3、进一步的，所述zif-8@bsa由以下步骤制得：

4、s1，2-甲基咪唑溶于甲醇中得到2-甲基咪唑溶液；

5、s2，六水合硝酸锌以及bsa溶于双蒸水中备用；

6、s3，将步骤s2制得的备用溶液缓慢加入2-甲基咪唑溶液中，于室温下搅拌，离心去上清液，用pbs重悬洗涤、离心去上清，用甲醇重悬洗涤、离心去上清，冷冻干燥至溶液呈干燥粉末状。

7、进一步的，所述稳定剂包括海藻糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和海藻酸钠。

8、进一步的，所述营养剂为甘氨酸和聚赖氨酸。

9、进一步的，所述抑菌剂为咪唑烷基脲；所述螯合剂为edta-3k；所述细胞冷冻保护剂为dmso。

10、进一步的，所述缓冲剂为tris-hcl和ddh2o。

11、本发明还包括一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂的制备方法，由上述任一项dna保护剂制备得到，包括以下步骤：称取稳定剂、营养剂、抗氧化剂、抑菌剂、细胞冷冻保护剂以及缓冲剂，全部放入离心管中，加入无菌水进行溶解，称取螯合剂加入溶解的混合溶液中，最后称取zif-8@bsa加入，即得。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果：与现有的其它游离dna保护剂配方相比，本发明保护剂中成分并不昂贵，并且具有良好的血液保护作用，可在常温下保存血液两周及以上，防止血细胞大量断裂而导致溶血，降低游离dna降解和受污染程度，从而提高检测的准确度。

技术特征：

1.一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：由稳定剂、营养剂、抗氧化剂、抑菌剂、螯合剂、细胞冷冻保护剂、缓冲剂、zif-8@bsa组成。

2.根据权利要求1所述的一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：所述zif-8@bsa由以下步骤制得：

3.根据权利要求1所述的一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：所述稳定剂包括海藻糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和海藻酸钠。

4.根据权利要求1所述的一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：所述营养剂为甘氨酸和聚赖氨酸。

5.根据权利要求1所述的一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：所述抑菌剂为咪唑烷基脲；所述螯合剂为edta-3k；所述细胞冷冻保护剂为dmso。

6.根据权利要求1所述的一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂，其特征在于：所述缓冲剂为tris-hcl和ddh2o。

7.一种基于纳米材料的外周血游离dna保护剂的制备方法，其特征在于：由权利要求1-6任一项所述的dna保护剂制备得到，包括以下步骤：称取稳定剂、营养剂、抗氧化剂、抑菌剂、细胞冷冻保护剂以及缓冲剂，全部放入离心管中，加入无菌水进行溶解，称取螯合剂加入溶解的混合溶液中，最后称取zif-8@bsa加入，即得。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于纳米材料的外周血游离DNA保护剂及其制备方法，由稳定剂、营养剂、抗氧化剂、抑菌剂、螯合剂、细胞冷冻保护剂、缓冲剂、ZIF‑8@BSA组成。与现有的其它游离DNA保护剂配方相比，本发明保护剂中成分并不昂贵，并且具有良好的血液保护作用，可在常温下保存血液两周及以上，防止血细胞大量断裂而导致溶血，降低游离DNA降解和受污染程度，从而提高检测的准确度。

技术研发人员：林向民,陈鑫,张丽珊,朱正阳,黄俊昌,谢建鹏,龚岚清
受保护的技术使用者：福建宏润医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/19