虫草素提取物、提取纯化方法及其应用与流程

本申请涉及一种虫草素提取物、提取纯化方法及其应用，属于虫草素分离。

背景技术：

1、虫草素学名为3'-脱氧腺苷，分子式为c10h13n5o3，可以溶于水、乙醇、甲醇，但不溶于苯、乙醚等溶剂，属于嘌呤类生物碱。虫草素具有抑菌、抗病毒、调节机体免疫力、抗恶性肿瘤与治疗白血病等多种功效，已成为生物医药及保健食品等领域中一个热点。

2、虫草素的广泛应用及在现代医药学上的卓著功效，使之价格越来越高。正因虫草素的贵而稀，其提取和分离纯化的研究成为当今的热点。目前比较高效高收率的方法有大孔树脂吸附、离子树脂吸附以及新兴的高速逆流色谱法，尽管在虫草素的提取、分离纯化等方面已经有了较多的成果，但每种方法各有利弊；例如：离子交换法的吸附能力较好，并且装置简单，但用于纯化虫草素时，该方法的解吸率较低；因此，应用单一的固定相分离纯化虫草素难度较高，且比较繁琐，导致虫草素的产量较低，高纯度的产品不易获得，价格较为昂贵。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，提供了一种虫草素提取物、提取纯化方法及其应用，采用kb-2微球树脂和sephadexg10葡聚糖凝胶过滤填料联合纯化的方式对蛹虫草子实体进行提纯，获得高纯度的虫草素提取物，工艺流程简单易操作，利于大规模推广生产。

2、本发明所采用的技术方案如下：

3、根据本申请的一个方面，提供了一种虫草素提取物的提取纯化方法，包括以下步骤：

4、(1)将kb-2微球树脂与虫草素粗提液按照1：(6-10)料液比混合，并于20-30℃下振荡22-30h，过滤，收集虫草素样品液，并测定其中虫草素的含量；

5、(2)按照1：(15-20)的料液比在sephadexg10葡聚糖凝胶过滤填料中加入去离子水溶胀3-5h，湿法装柱，并采用去离子水充分平衡至基线平稳；

6、(3)利用制备液相系统在波长252-256nm下对虫草素样品液进行纯化，收集虫草素峰面积占比90％以上的洗脱液，浓缩、冻干、洗涤、结晶，得到虫草素提取物，并计算其中虫草素的纯度。

7、可选地，步骤(3)中流速为0.5-2ml/min。

8、可选地，步骤(3)中上样量为1-4ml。

9、可选地，步骤(1)中高效液相色谱条件为：波长为252-256nm；上样量为0.5-1.5bv；上样速度为1-4ml/min。

10、可选地，步骤(1)中，所述虫草素粗提液的提取方法包括如下步骤：

11、将蛹虫草子实体与20-30％乙醇按照1：(35-45)料液比混合，并于80-100℃水浴回流提取1-3h，离心，收集上清液，浓缩，得到虫草素粗提液。

12、可选地，所述蛹虫草子实体中虫草素含量为2.1-2.5mg/g。

13、可选地，还包括对过滤后的kb-2微球树脂中的虫草素进行解吸的步骤：采用蒸馏水对过滤后的kb-2微球树脂进行洗涤，然后加入10-80％乙醇溶液，并于室温条件下振荡20-28h，过滤，收集过滤后的洗脱液，合并过滤后的吸附余液，得到所述虫草素样品液。

14、可选地，还包括对kb-2微球树脂进行预处理的步骤：将kb-2微球树脂加入无水乙醇中浸泡过夜，弃去悬浮物，然后采用去离子水洗涤至无醇味即可。

15、根据本申请的另一个方面，提供了一种如上述任一所述虫草素提取物的提取纯化方法得到的虫草素提取物，所述虫草素提取物中虫草素的平均纯度达到80％以上。

16、根据本申请的又一个方面，提供了一种如上述所述虫草素提取物在焙烤虫草食品中的应用。

17、本申请的有益效果包括但不限于：

18、本申请的虫草素提取物、提取纯化方法及其应用，采用kb-2微球树脂和sephadexg10葡聚糖凝胶过滤填料联合纯化的方式对蛹虫草子实体进行提纯，极大限度保留有效成分并去除杂质；其中kb-2微球树脂具有粒径小，比表面积大，分离效果好的特点，sephadexg10柱的样品承载量大，洗脱程序简单，洗脱溶液成本低，加强了分离纯化的质量、效率以及高回收率；另外，优化了工艺流程，提高生产效率，制备出质量稳定，纯度较高的虫草素提取物，为虫草素的工业化生产提供理论依据；进一步地，将虫草素提取物添加到焙烤食品中，从而发挥其功效，为虫草素在食品领域的广泛应用奠定基础。

技术特征：

1.一种虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，步骤(3)中流速为0.5-2ml/min。

3.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，步骤(3)中上样量为1-4ml。

4.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中测定波长为252-256nm；上样量为0.5-1.5bv；上样速度为1-4ml/min。

5.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述虫草素粗提液的提取方法包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，所述蛹虫草子实体中虫草素含量为2.1-2.5mg/g。

7.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，还包括对过滤后的kb-2微球树脂中的虫草素进行解吸的步骤：采用蒸馏水对过滤后的kb-2微球树脂进行洗涤，然后加入10-80％乙醇溶液，并于室温条件下振荡20-28h，过滤，收集过滤后的洗脱液，合并过滤后的吸附余液，得到所述虫草素样品液。

8.根据权利要求1所述的虫草素提取物的提取纯化方法，其特征在于，还包括对kb-2微球树脂进行预处理的步骤：将kb-2微球树脂加入无水乙醇中浸泡过夜，弃去悬浮物，然后采用去离子水洗涤至无醇味即可。

9.权利要求1-8任一所述虫草素提取物的提取纯化方法得到的虫草素提取物，所述虫草素提取物中虫草素的平均纯度达到80％以上。

10.权利要求9所述虫草素提取物在焙烤虫草食品中的应用。

技术总结
本申请公开了一种虫草素提取物、提取纯化方法及其应用，属于虫草素分离技术领域。该虫草素提取物的提取纯化方法，包括以下步骤：将KB‑2微球树脂与虫草素粗提液按照1：(6‑10)料液比混合，振荡，过滤，收集虫草素样品液，并测定其中虫草素的含量；按照1：(15‑20)的料液比在SephadexG10填料中加入去离子水溶胀，湿法装柱，并采用去离子水充分平衡至基线平稳；利用制备液相系统在波长252‑256nm下对虫草素样品液进行纯化，收集虫草素峰面积占比90％以上的洗脱液，浓缩得到虫草素提取物，并计算其中虫草素的纯度。采用KB‑2微球树脂和SephadexG10葡聚糖凝胶过滤填料联合纯化的方式对蛹虫草子实体进行提纯，获得高纯度的虫草素提取物，工艺流程简单易操作，利于大规模推广生产。

技术研发人员：郝捷,柴颖,叶亚军,郭春生,温源,赵赛月,陈晨,李力群
受保护的技术使用者：内蒙古昆明卷烟有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/14