一种重组XVII型胶原蛋白融合蛋白及其制备方法、应用与流程

本发明涉及生物医药，更具体地，涉及了一种重组xvii型胶原蛋白融合蛋白及其制备方法、应用。

背景技术：

1、胶原蛋白xvii即17型胶原蛋白，是一种跨膜蛋白，它在维持皮肤紧致和弹性方面起着关键作用。不同于其他类型的胶原蛋白，17型胶原蛋白主要分布于表皮和真皮交界的区域，即基地膜带，对于维持皮肤的韧性和抗拉能力至关重要。研究表明，衰老的本质是表皮至真皮的桥梁--基地膜带功能的衰退，导致衰老细胞的清除与更新效率下降甚至缺失。而基地膜带衰退的核心原因是17型胶原蛋白的流失。

2、因此，补充17型胶原蛋白至关重要。天然的17型胶原蛋白分子量约为150kd,通过面膜等方式补充，易在表皮形成水膜，难以被直接被表皮吸收。现有技术常常减小xvii型胶原蛋白分子量以促进皮肤的吸收，或直接采用口服的方式通过胃肠道吸收完整的xvii型胶原蛋白，或通过微针等方法将其直接注入表皮层及真皮层之间直接填充。

3、但采用上述技术方法，如减小17型胶原蛋白：小分子胶原蛋白分子量一般为1～3kd才容易被吸收，但17型胶原蛋白，必需含有跨膜结构才具有相应的作用，最小也需要有30kd左右，因此难以通过减小17型胶原蛋白分子量而使表皮吸收；口服的方式：口服后的蛋白制品通过肠胃吸收的量已非常少，通过肠胃吸收后再到达脸部的更少，因此常常需要口服大剂量的蛋白制品，对身体具有不小的负担；通过微针注射：通过微针注射可以到达表皮和真皮层之间，起到很好的填充作用，但注射后17型胶原蛋白易被代谢，持续时间短，导致使用者需要短期内再次忍受注射疼痛，接受度低，且注射后表皮皮肤易感染，也使得这种方法推广度低。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提出了一种重组xvii型胶原蛋白融合蛋白及其制备方法、应用，重组xvii型胶原蛋白融合蛋白能有效解决胶原蛋白xvii作用时间短、皮肤修复时间长的技术问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用了如下所述的技术方案：

3、第一方面，一种重组xvii型胶原蛋白融合蛋白，其包括按序连接的人表皮生长因子、胶原蛋白xvii跨膜结构域和类弹性蛋白；所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、进一步的，所述人表皮生长因子的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述胶原蛋白xvii跨膜结构域的氨基酸序列如seq id no.3所示；所述类弹性蛋白的氨基酸序列如seqid no.4所示。

5、第二方面，一种编码如第一方面所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的核苷酸序列，所述核苷酸序列如seq id no.5所示。

6、第三方面，一种重组表达载体，其包括第二方面所述核苷酸序列。

7、第四方面，一种大肠杆菌工程菌，其含有第三方面所述的重组表达载体。

8、第五方面，一种重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的制备方法，其包括以下步骤：

9、(1)在如seq id no.5所示核苷酸序列5’和3’两端加入限制性内切酶核苷酸序列；

10、(2)将步骤(1)序列插入到表达载体上，转入大肠杆菌感受态细胞中，筛选高表达重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的单克隆菌株；

11、(3)将步骤(2)筛选的菌株进行高密度发酵表达纯化，获得重组xvii型胶原蛋白融合蛋白。

12、进一步的，所述表达载体选自pet32a或pet28a。

13、第六方面，如第一方面所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白在促细胞增殖制剂、护肤品或化妆品中的应用。

14、第七方面，如第五方面所述的方法制备得到的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白在促细胞增殖制剂、护肤品或化妆品中的应用。

15、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

16、本发明提供的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白可快速的靶向表皮至真皮之间上皮细胞的表皮生长因子受体(egfr)，使得重组xvii型胶原蛋白融合蛋白能更好的发挥跨膜作用：较单一的xvii型胶原蛋白，其激活其他型胶原蛋白的能力更强。可有效促进微针给药后皮肤屏障的自我修复，缩短皮肤自我修复的周期。本发明根据重组xvii型胶原蛋白结构特性融合的类弹性蛋白具有温度敏感型，在表皮给药后可形成纳米颗粒，能在表皮至真皮之间缓慢释放，显著延长了胶原蛋白的作用时间，提高了使用者的依从性。

17、细胞实验证明本发明提供的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白能有效促进细胞的粘附、迁移及增殖。

18、本发明构建的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白应用广泛，能够应用于化妆品添加剂，皮肤美容护理等方面。

技术特征：

1.一种重组xvii型胶原蛋白融合蛋白，其特征在于，其包括按序连接的人表皮生长因子、胶原蛋白xvii跨膜结构域和类弹性蛋白；所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白，其特征在于，所述人表皮生长因子的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述胶原蛋白xvii跨膜结构域的氨基酸序列如seqid no.3所示；所述类弹性蛋白的氨基酸序列如seq id no.4所示。

3.一种编码如权利要求1或2所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.5所示。

4.一种重组表达载体，其特征在于，其包括权利要求3所述核苷酸序列。

5.一种大肠杆菌工程菌，其特征在于，含有权利要求4所述的重组表达载体。

6.如权利要求1所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述表达载体选自pet32a或pet28a。

8.如权利要求1或2所述的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白在促细胞增殖制剂、护肤品或化妆品中的应用。

9.如权利要求6或7所述的方法制备得到的重组xvii型胶原蛋白融合蛋白在促细胞增殖制剂、护肤品或化妆品中的应用。

技术总结
本发明属于生物医疗技术领域，具体涉及一种重组XVII型胶原蛋白融合蛋白及其制备方法、应用。重组XVII型胶原蛋白融合蛋白包括人表皮生长因子、胶原蛋白XVII的跨膜结构域、类弹性蛋白重组得到的融合蛋白。本发明提供的重组XVII型胶原蛋白融合蛋白可快速的靶向表皮至真皮之间上皮细胞的表皮生长因子受体(EGFR)，使得重组XVII型胶原蛋白融合蛋白能更好的发挥跨膜作用：较单一的XVII型胶原蛋白，其激活其他型胶原蛋白的能力更强。可有效促进微针给药后皮肤屏障的自我修复，缩短皮肤自我修复的周期。

技术研发人员：邱雪
受保护的技术使用者：广东中御生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/29