IRAK4蛋白的制备方法及其所采用的融合蛋白与流程

本发明大体涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种irak4蛋白的制备方法及其所采用的融合蛋白。

背景技术：

1、白细胞介素-1受体相关激酶4 (interleukin-1 receptor-associated kinase4, irak-4) 是一种在淋巴细胞和先天免疫细胞中表达的丝氨酸-苏氨酸激酶，参与了tlr/il-1r介导的信号通路调节，通过与髓样分化因子88（myeloid differentiation primaryresponse 88, myd88） 结合形成 myddosome 复合体来开启下游各种与免疫反应相关的基因表达，对人体启动对抗外源病原体的先天性免疫反应具有非常关键的作用。

2、irak4已被确定为多种疾病的潜在治疗靶点，包括血液系统恶性肿瘤和炎症性皮肤病。通过抑制irak4活性已显示可改善酒精诱导的肝损伤和类风湿性关节炎症等疾病的治疗效果。因此，通过激酶抑制剂或蛋白质降解等方法靶向抑制irak4活性，有望治疗一系列以炎症反应失调和免疫异常激活为特征的疾病。重组irak4蛋白质作为高通量筛选的关键原材料，帮助识别和优化irak4的小分子抑制剂或其他类型的药物候选物，以期开发出新型治疗策略。

3、当前 irak4蛋白质生产的主要问题在于纯化后所得蛋白质纯度不高，且比活性较低，经某些纯化方法获取的蛋白质产率较低。

技术实现思路

1、根据本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，其从n端到c端依次包含gst标签，seq id no：1所示的irak4蛋白，以及strep ii标签。

2、依照本发明的另一方面，提供了一种分离的核酸，其编码如上所述的融合蛋白。

3、依照本发明的另一方面，提供了一种载体，其包含如上所述的核酸。

4、依照本发明的又一方面，提供了一种宿主细胞，其包含如上所述的核酸或如上所述的载体。

5、依照本发明的又一方面，提供了一种irak4蛋白的制备方法，其包括：

6、a) 培养如上所述的宿主细胞使所述融合蛋白表达；

7、b) 破碎宿主细胞以获得含有所述所述融合蛋白的液相组合物；

8、c) 利用结合gst标签和/或strep ii标签的固体支持物将所述融合蛋白从所述液相组合物中分离。

9、本发明的有益效果：

10、本发明意外发现在重组irak4蛋白质的n端和c端分别设置gst标签和strep ii标签，能有效降低表达过程中的蛋白降解，且能获得提高的irak4蛋白质活性。此外，双标签为纯化过程提供了两次亲和纯化的可能性，能够进一步去除蛋白质降解产生的杂质，提高蛋白纯度。

技术特征：

1. 融合蛋白，其特征在于，从n端到c端依次包含gst标签，seq id no：1所示的irak4蛋白，以及strep ii标签。

2.分离的核酸，其特征在于，编码权利要求1所述的融合蛋白。

3. 根据权利要求2所述的分离的核酸，其特征在于，其中编码irak4蛋白的核苷酸序列如seq id no：2所示。

4.载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述的核酸。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体还包含选自下组的一种或多种元件：

6.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体的基本骨架来自pfastbac1质粒。

7.宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求2或3所述的核酸或权利要求4~6任一项所述的载体。

8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，其是sf9细胞。

9. irak4蛋白的制备方法，其特征在于，包括：

10. 根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤c)是亲和层析；依次进行gst亲和层析和strep ii亲和层析；

技术总结
本发明大体涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种IRAK4蛋白的制备方法及其所采用的融合蛋白。该融合蛋白从N端到C端依次包含GST标签，SEQ ID NO：1所示的IRAK4蛋白，以及Strep II标签。本发明意外发现在重组IRAK4蛋白质的N端和C端分别设置GST标签和Strep II标签，能有效降低表达过程中的蛋白降解，且能获得提高的IRAK4蛋白质活性。此外，双标签为纯化过程提供了两次亲和纯化的可能性，能够进一步去除蛋白质降解产生的杂质，提高蛋白纯度。

技术研发人员：李英骥,邴铁军,夏强,苏传敏,陈玉红,严晓露,闫励
受保护的技术使用者：北京爱思益普生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/11