一种拭子样本核酸释放剂的制作方法

本发明涉及核酸检测，具体是涉及一种拭子样本核酸释放剂。

背景技术：

1、常规病原微生物的核酸检测需经过核酸提取步骤，这使得核酸检测过程耗时较长，不能满足快速检测需要。核酸释放剂可用于快速裂解各类常见样本，无需核酸的提取纯化步骤，样本裂解物可直接作为模板进行扩增反应，目前已在病原微生物检测领域普遍使用。但现有核酸释放剂存在操作不够简便，以及核酸释放仍不够快速等问题。

2、假设某一核酸检测方法足够灵敏，即满足检测体系中大于等于一个靶标分子即可报告阳性结果。此时，对于低浓度样本(≤3copy/μl)而言，其检出结果的稳定性在很大程度上取决于能否取到大于等于一个靶标分子进入检测体系参与扩增。对于核酸检测，低浓度样本的取样是一个随机独立的事件，每次取样过程中取到的靶标分子的数量服从泊松分布。从取样概率的角度，使用泊松分布解释低浓度样本检测不稳定的原因，计算低浓度样本(1copy/μl)不同取样体积下取到k(非负整数)个靶标分子的概率。只有当取样体积达到10ul时，才能有99.72％的概率取到≥3copy的病毒。中国专利cn112980831b公开了一种拭子核酸释放剂、虽然简单方便，但其加样体积只能达到反应体积的20％，可能无法满足低浓度样本的检测需求，会造成很多的假阴性。

3、因此，当前背景下，持续开发和优化核酸释放剂对病原微生物的实际检测工作有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服上述背景技术所述核酸释放剂产品的不足，提供了一种拭子样本核酸释放剂，该核酸释放剂能快速释放拭子样本dna或rna的核酸，当样本采集后，立即将样本与核酸释放剂混合，室温静置230min，即可吸取样本进行核酸检测，且不影响后续pcr检测反应，操作简便，特别适合一些在急诊、发热门诊等情景的核酸检测。

2、为达到本发明的目的，本发明通过大量研究试验在所述核酸释放剂中复配了多种细胞裂解剂，最终所得拭子样本核酸释放剂的主要成分为强碱、sds、酶保护剂和曲拉通100(triton-100)，试验结果显示，本发明所述核酸释放剂能达到快速释放核酸但不影响后续pcr反应的要求。

3、进一步地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中强碱为naoh和/或koh。

4、进一步地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中强碱的浓度为10-30mm。

5、进一步地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中sds的质量浓度为0.005％～0.05％。

6、进一步地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中的曲拉通100的体积浓度为2％～6％，优选2％～4％。

7、进一步地，在本发明的一些实施方式中，所述酶保护剂选自明胶、tween20或甜菜碱中的一种或多种。

8、优选地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中酶保护剂的含量为2％～6％，优选4％。

9、进一步优选地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中强碱浓度为10-20mm、sds的质量浓度为0.008％～0.012％、曲拉通100的质量体积浓度为2％～4％、酶保护剂的含量为2％～6％。

10、更进一步优选地，在本发明的一些实施方式中，所述核酸释放剂中强碱为naoh，酶保护剂为tween20。

11、进一步优选地，在本发明的一些实施方式中，所述酶保护剂为tween20和明胶，且二者的质量比为4：0.2-0.6。

12、与现有技术相比，本发明的优点如下：

13、(1)常规核酸提取试剂中的主要成分为细胞裂解剂，常用的细胞裂解剂如尿素、ctab等的残留会对后续pcr反应产生明显的抑制，需要严格控制使用量，除上述试剂外，一些较为温和的表面活性剂也可满足细胞裂解的需要，而本发明所述核酸释放剂中复配了多种细胞裂解剂，不但能快速释放核酸，还无不良影响。

14、(2)本发明所述核酸释放剂可以对采集拭子样本进行核酸的快速释放。当样本采集后，立刻将样本与所述核酸释放剂混合，室温静置2～30min，即可吸取样本裂解物进行核酸检测，操作方便快捷，且不会对后续pcr反应造成影响，加样量可以达到最大的反应体积容量。

技术特征：

1.一种拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中包含强碱、sds、酶保护剂和曲拉通100。

2.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中强碱为naoh和/或koh。

3.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中强碱的浓度为10-30mm。

4.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中sds的质量浓度为0.005％～0.05％。

5.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中的曲拉通100的体积浓度为2％～6％，优选2％～4％。

6.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述酶保护剂选自明胶、tween20或甜菜碱中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中酶保护剂的含量为2％～6％，优选4％。

8.根据权利要求1所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中强碱浓度为10-20mm、sds的质量浓度为0.008％～0.012％、曲拉通100的质量体积浓度为2％～4％、酶保护剂的含量为2％～6％。

9.根据权利要求8所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中强碱为naoh，酶保护剂为tween20。

10.根据权利要求8所述的拭子样本核酸释放剂，其特征在于，所述酶保护剂为tween20和明胶，且二者的质量比为4：0.2-0.6。

技术总结
本发明属于核酸检测技术领域，公开了一种拭子样本核酸释放剂。本发明的拭子样本核酸释放剂中添加了强碱、SDS、酶保护剂和曲拉通100。本发明的核酸释放剂能够快速释放核酸，无需进行核酸的提取纯化步骤。拭子样本采集后置于本发明所述核酸释放剂中，室温静置5～10min即可直接用于PCR分子生物学实验，且对后续核酸检测不产生影响，加样体积可达到反应体积的同等量。试验结果显示，本发明的产品安全可靠，操作简单、快速，适用于急诊、发热门诊、现场大量快速筛查等核酸检测场景。

技术研发人员：杨华,陈夏敏,崔玉峰
受保护的技术使用者：上海北昂医药科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/10