用于藏绵羊氧化能力鉴定的分子标记及其特异性引物对和应用

本发明属于分子生物学检测，尤其涉及用于藏绵羊氧化能力鉴定的分子标记及其特异性引物对和应用。

背景技术：

1、藏绵羊是青藏高原高寒牧区草原畜牧业的重要组成部分。青藏高原地区的特点为：海拔高、气压低、紫外线强、缺氧等。由于青藏高原地区环境恶劣，会引起藏绵羊的一系列非特异性反应，主要为免疫应激、冷应激与氧化应激，其中最主要为氧化应激。藏绵羊受到应激原刺激后，破坏了体内氧化系统和抗氧化系统的动态平衡，活性氧(ros)和丙二醛(mda)含量增高，抗氧化物含量减少，机体将受到氧化损伤，从而影响藏绵羊的生长性能和繁殖性能。

2、活性氧(ros)和丙二醛(mda)是检测氧化应激反应中的重要指标，通过检测活性氧(ros)和丙二醛(mda)的含量，来评估藏绵羊的氧化应激能力和健康状况。通过检测抗氧化应激的指标，能及时发现藏绵羊的氧化应激反应能力，并采取一定的措施来提高其氧化应激能力，使其更好的适应青藏高原恶劣的环境条件，为藏绵羊的辅助育种提供依据。

3、随着分子标记技术的迅猛发展，从基因层面寻找基因中的变异位点，通过其与性状间的关联分析发现基因与性状间的关系，进行早期选择，从而提高选种效率和准确性，可以从根本上提高藏绵羊的氧化应激能力，具有广阔的应用价值。因此，分子标记为人们在分子水平研究藏绵羊的氧化应激能力的遗传机理奠定了基础，筛选相应的分子标记以便于更高效的用于藏绵羊的育种中，是本领域的一个重要问题。现有技术中研究与藏绵羊氧化应激能力相关的分子标记进行辅助育种的并不多。提供一种与藏绵羊氧化应激能力相关的分子标记，从而用于藏绵羊分子标记辅助育种中，筛选抗氧化应激能力强的藏绵羊，显得尤为重要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于藏绵羊氧化能力鉴定的分子标记及其特异性引物对和应用。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种用于鉴定藏绵羊氧化应激能力的snp分子标记，所述snp分子标记位于国际绵羊基因组oar_v4.0版本第19号染色体上第5130748个碱基处，突变碱基为a或g。

4、优选的，突变碱基为a的藏绵羊的基因型为aa或ag；

5、突变碱基为g的藏绵羊的基因型为gg；

6、基因型为ag和gg的藏绵羊个体中抗氧化应激指标的含量显著高于基因型为aa的藏绵羊个体；

7、基因型为ag和gg的藏绵羊个体中抗氧化应激指标的含量差异不显著；

8、所述抗氧化应激指标包括活性氧和/或丙二醛。

9、本发明还提供了所述的snp分子标记用于非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择中的应用。

10、本发明还提供了所述的snp分子标记在藏绵羊辅助育种中的应用。

11、本发明还提供了扩增所述的snp的引物对，所述引物对如seq id no.2～3所示。

12、本发明还提供了所述的引物对在制备非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择的产品中的应用。

13、本发明还提供了所述的引物对在制备藏绵羊辅助育种的产品中的应用。

14、本发明还提供了一种非诊断目的的鉴定藏绵羊氧化应激能力的方法，包括如下步骤：

15、(1)提取藏绵羊基因组dna；

16、(2)以步骤(1)得到的藏绵羊基因组dna为模板，利用所述的引物对进行扩增，得到扩增产物；

17、(3)对所述的扩增产物进行基因型分析，得到不同基因型的藏绵羊；将藏绵羊的基因型与抗氧化应激指标关联；

18、所述抗氧化应激指标包括活性氧和/或丙二醛。

19、优选的，步骤(2)所述的扩增的体系为：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，模板dna 1μl；

20、步骤(2)所述的扩增的程序为：98℃2min；98℃10s，57℃10s，72℃10s，共40个循环；72℃延伸2min。

21、本发明还提供了一种非诊断目的鉴定藏绵羊氧化应激能力和/或藏绵羊辅助育种的试剂盒，包括检测所述的snp分子标记的试剂或所述的引物对。

22、本发明提供了用于藏绵羊氧化能力鉴定的分子标记及其特异性引物对和应用。本发明的snp分子标记位于国际绵羊基因组oar_v4.0版本第19号染色体上第5130748个碱基处；染色体上第5130748个碱基为a时，藏绵羊的基因型为aa或ag；当染色体上第5130748个碱基为g时，藏绵羊的基因型为gg；通过不同基因型与抗氧化应激指标ros、mda含量的关联分析，发现所述ag和gg基因型的藏绵羊个体的抗氧化应激指标ros、mda显著高于aa基因型个体(p<0.05)，ag和gg基因型的藏绵羊个体的抗氧化应激指标ros、mda差异不显著(p>0.05)。通过检测藏绵羊第19号染色体上第5130748个核苷酸位点的碱基，能够判断藏绵羊个体的抗氧化应激指标ros、mda含量，本发明为用于非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择提供了新的snp分子标记资源。为筛选抗氧化应激能力强的藏绵羊提供依据，为藏绵羊的辅助育种提供新方向。

技术特征：

1.一种用于鉴定藏绵羊氧化应激能力的snp分子标记，其特征在于，所述snp分子标记位于国际绵羊基因组oar_v4.0版本第19号染色体上第5130748个碱基处，突变碱基为a或g。

2.根据权利要求1所述的snp分子标记，其特征在于，突变碱基为a的藏绵羊的基因型为aa或ag；

3.权利要求1或2所述的snp分子标记用于非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择中的应用。

4.权利要求1或2所述的snp分子标记在藏绵羊辅助育种中的应用。

5.扩增权利要求1或2所述的snp的引物对，其特征在于，所述引物对如seq id no.2～3所示。

6.权利要求5所述的引物对在制备非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择的产品中的应用。

7.权利要求5所述的引物对在制备藏绵羊辅助育种的产品中的应用。

8.一种非诊断目的的鉴定藏绵羊氧化应激能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的扩增的体系为：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，模板dna 1μl；

10.一种非诊断目的鉴定藏绵羊氧化应激能力和/或藏绵羊辅助育种的试剂盒，其特征在于，包括检测权利要求1～2任意一项所述的snp分子标记的试剂或权利要求5所述的引物对。

技术总结
本发明属于分子生物学检测技术领域，尤其涉及用于藏绵羊氧化能力鉴定的分子标记及其特异性引物对和应用。本发明通过筛选得出与藏绵羊氧化应激能力有关的SNP分子标记，所述SNP分子标记位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本第19号染色体上第5130748个碱基处，突变碱基为A或G。利用该SNP分子标记可以检测藏绵羊个体中ROS和MDA的含量，为非诊断目的的藏绵羊抗氧化应激性状标记辅助选择提供了新的SNP分子标记资源，为筛选抗氧化应激能力强的藏绵羊提供依据，为藏绵羊的辅助育种提供新方向。

技术研发人员：刘建斌,卢曾奎,袁超,郭婷婷,安雪姣
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/11/18