一种抗癌药物的筛选方法与流程

本发明属于肿瘤药物筛选，具体涉及一种抗癌药物的筛选方法。

背景技术：

1、建立能准确体现药物反应的临床前肿瘤模型是推动肿瘤精准治疗发展的关键。传统研究使用的2d培养肿瘤细胞系易于管理、培养速度快、成本低，因此大量的肿瘤研究都使用了细胞系模型。但2d细胞系与人体细胞生理结构存在较大差异，细胞间接触面积小，仅单层面接触培养基，单层细胞结构单一，高度同质化等原因，导致细胞系并不能真实准确地反映肿瘤本身的特点和对药物的反应。这些缺点限制了细胞系在肿瘤药物开发研究中的应用和价值。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中细胞系并不能真实准确地反映肿瘤本身的特点和药物反应的问题，本发明提供了一种抗癌药物的筛选方法。

2、该抗癌药物的筛选方法包括以下步骤：

3、s1：利用微流控技术制备具有囊泡状结构的肿瘤细胞3d微球；

4、s2：将所述肿瘤细胞3d微球和一定浓度的待筛选抗癌药物放入培养基中培养；

5、s3：培养结束后，用试剂盒检测所述肿瘤细胞3d微球的细胞活力，计算ic50值；

6、s4：若ic50值小于50μm，则说明所述一定浓度的待筛选抗癌药物具有抗肿瘤效果，反之，则说明所述一定浓度的待筛选抗癌药物不具有抗肿瘤效果。

7、一定浓度可为任意浓度。

8、进一步地，步骤s1包括：

9、s11：利用微流控技术将细胞-基质胶混合物剪切成单分散液滴，固化后得到肿瘤细胞3d微球前体；

10、s12：将所述肿瘤细胞3d微球前体置于培养基中培养至具有囊泡状结构，得到所述肿瘤细胞3d微球。

11、进一步地，步骤s1包括：

12、s11：每微升基质胶加入3×104个癌细胞，混合均匀，得到细胞-基质胶混合物，利用微流控技术将所述细胞-基质胶混合物剪切成单分散液滴，将所述单分散液滴于37℃固化15分钟，固化后得到肿瘤细胞3d微球前体；

13、s12：将所述细胞3d微球前体接种于含有10％ fbs的dmem培养基中，37℃、5％ co2培养箱中进行培养7-10天，即得到所述肿瘤细胞3d微球。

14、进一步地，将所述肿瘤细胞3d微球接种于含有10％ fbs的dmem培养基中，使用避光96孔板培养，每个孔接种4-5个所述肿瘤细胞3d微球。

15、进一步地，步骤s1中，所述囊泡状结构大小在400-500μm之间。

16、进一步地，步骤s2中药物培养时间为6天，并在第3天进行含药物培养基更换。

17、进一步地，步骤s3中使用试剂盒检测肿瘤细胞3d微球的细胞活力的过程中，使用细胞裂解液对3d微球进行裂解，其中需用枪吹打细胞微球10-15次，并镜下观察是否将细胞微球结构解离完全。

18、进一步地，所述一定浓度的待筛选抗癌药物选自50nm，0.2μm，1μm，5μm，25μm，125μm的吉非替尼，60nm，0.3μm，1.5μm，7.5μm，37.5μm，187.5μm的吉西他滨，44.8nm，0.224μm，1.12μm，5.6μm，22.8μm，140μm的奥沙利铂，44.8nm，200nm，1.02μm，5.1μm，25.5μm，127.5μm的氟尿苷中的一种或多种。

19、有益效果：

20、与传统的2d细胞模型相比，通过该方法制备的肿瘤细胞3d微球，保留了细胞间的相互结构及肿瘤细胞的遗传特征，能显著提高药物筛选的准确率，在新药研发过程中具有广泛的应用前景。

技术特征：

1.一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤s1包括：

3.如权利要求2所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤s1包括：

4.如权利要求3所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，将所述肿瘤细胞3d微球接种于含有10％fbs的dmem培养基中，使用避光96孔板培养，每个孔接种4-5个所述肿瘤细胞3d微球。

5.如权利要求1所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤s1中，所述囊泡状结构大小在400-500μm之间。

6.如权利要求1所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤s2中药物培养时间为6天，并在第3天进行含药物培养基更换。

7.如权利要求1所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤s3中使用试剂盒检测肿瘤细胞3d微球的细胞活力的过程中，使用细胞裂解液对3d微球进行裂解，其中需用枪吹打细胞微球10-15次，并镜下观察是否将细胞微球结构解离完全。

8.如权利要求1所述的抗癌药物的筛选方法，其特征在于，所述一定浓度的待筛选抗癌药物选自50nm，0.2μm，1μm，5μm，25μm，125μm的吉非替尼，60nm，0.3μm，1.5μm，7.5μm，37.5μm，187.5μm的吉西他滨，44.8nm，0.224μm，1.12μm，5.6μm，22.8μm，140μm的奥沙利铂，44.8nm，200nm，1.02μm，5.1μm，25.5μm，127.5μm的氟尿苷中的一种或多种。

技术总结
本发明属于肿瘤药物筛选技术领域，提供了一种抗癌药物的筛选方法，包括：S1：利用微流控技术制备具有囊泡状结构的肿瘤细胞3D微球；S2：将肿瘤细胞3D微球和一定浓度的待筛选抗癌药物放入培养基中培养；S3：培养开始前和结束后，对所述肿瘤细胞3D微球进行明场拍照，死活细胞AO/PI染色，用试剂盒检测肿瘤细胞3D微球的细胞活力，计算IC<subgt;50</subgt;值；S4：若IC<subgt;50</subgt;值小于50μM，细胞解离完全则说明一定浓度的待筛选抗癌药物具有抗肿瘤效果，反之，则说明一定浓度的待筛选抗癌药物不具有抗肿瘤效果。与传统的2D细胞模型相比，通过该方法制备的肿瘤细胞3D微球，保留了细胞间的相互结构及肿瘤细胞的遗传特征，能显著提高药物筛选的准确率，在新药研发过程中具有广泛的应用前景。

技术研发人员：代小勇,蔡咏德,黄怡彬,黄纯娜,苏颖诗
受保护的技术使用者：深圳市西格诺生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/2/5