TRAIL在制备DKD诊断试剂盒和药物中的应用

涉及糖尿病肾脏疾病的诊断和治疗，更具体地说是涉及trail在制备dkd诊断试剂盒和药物中的应用。

背景技术：

1、糖尿病肾病(diabetic kidney disease,dkd)是因慢性高血糖导致代谢与血流动力学紊乱，以持续性蛋白尿和肾功能进行性下降为特征的临床综合征，是糖尿病最主要的并发症之一，也是导致终末期肾病(end-stage kidney disease，eskd)的主要原因。dkd早期临床表现并不典型，诊断困难，dkd一旦进展为后期不可避免地需要肾脏替代治疗，加重了患者和社会的经济负担，因此，确定新的dkd诊断靶点并开发有效的dkd治疗方法至关重要。

2、足细胞是终末分化上皮细胞，具有一级、二级和三级足突。其附着在肾小球基底膜(glomerular basement membrane,gbm)的外侧，与内皮细胞和gbm一起形成肾小球滤过屏障。足细胞数量或密度的降低导致基底膜破坏并促使蛋白尿的产生，进而导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化，加剧dkd进展。识别调控足细胞损伤的关键蛋白可为糖尿病肾病治疗提供策略和靶点，具有重要的临床意义。

3、因此，寻找与糖尿病肾病足细胞损伤相关的蛋白，并以此作为诊断和治疗dkd的靶点，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明将trail作为dkd诊断和治疗的生物标志物，为研发dkd诊断试剂盒和dkd治疗药物奠定了理论基础。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、检测trail的物质在制备dkd诊断试剂盒中的应用。

4、在上述方案中，所述检测trail的物质为引物序列，具体为：

5、trail-f 5’-cgtgatcttcacagtgctcct-3’，seq id no.1；

6、trail-r 5’-cagctcgttggtaaagtacacg-3’，seq id no.2；

7、β-actin-f 5’-catgtacgttgctatccaggc-3’，seq id no.7；

8、β-actin-r 5’-ctccttaatgtcacgcacgat-3’，seq id no.8。

9、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种dkd诊断试剂盒，其特征在于，包括seq id no.1～seq id no.2和seq id no.7～seq id no.8所示的引物。

10、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护敲低trail表达的物质在制备治疗dkd药物中的应用；敲低trail表达的物质为干扰rna，序列为：5’-ccauuucuacaguucaagaaa-3’，seq id no.9。

11、在上述技术方案中，与健康对照组相比，糖尿病肾病患者肾组织中trail表达升高，与uacr和肾小球硬化程度呈正相关，与egfr呈负相关。

12、优选的，与对照组相比，trail在tnf-α刺激的足细胞中表达升高。tnf-α刺激可以导致焦亡相关基因cleaved caspase1上调、凋亡相关基因cleaved caspase 3、bax上调和bcl-2下调以及坏死性凋亡相关基因p-mlkl、p-ripk上调，促进泛凋亡发生。而敲低trail可以减轻tnf-α诱导的足细胞泛凋亡，表现为逆转焦亡相关基因cleaved caspase1的上调、凋亡相关基因cleaved caspase 3、bax的上调和bcl-2的下调、坏死性凋亡相关基因p-mlkl、p-ripk的上调；过表达trail则与上述结果相反，表现为促进足细胞泛凋亡发生和相关基因的异常表达。

13、优选的，trail在stz诱导的dkd小鼠中表达升高。与野生型wt小鼠相比，stz组小鼠uacr增加，肾小球肥大、系膜基质增多、基底膜增厚、足细胞足突变宽；肾小球足细胞数量减少、凋亡增加，泛凋亡相关蛋白cleaved caspase1、cleaved caspase3、p-mlkl表达增加，提示stz组足细胞和肾小球发生损伤。而与stz组相比，trailko+stz组小鼠上述足细胞和肾小球损伤均得到改善，提示足细胞特异性敲除trail可以减轻stz诱导的dkd小鼠足细胞和肾小球损伤。

14、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开了trail在dkd诊断和靶向药物治疗中的作用，本发明发现trail在糖尿病肾病患者肾组织中表达升高，与egfr呈负相关、与uacr和肾小球硬化程度呈正相关。本发明还发现trail升高与足细胞损伤有关，敲低trail减轻足细胞泛凋亡，在一定程度上可以反映dkd进展。后续可以进一步通过体内、体外实验验证trail参与糖尿病肾病足细胞泛凋亡的具体机制，有助于为糖尿病肾病的治疗和为靶向药物的研发奠定理论基础。

技术特征：

1.检测trail的物质在制备dkd诊断试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测trail的物质如seq id no.1～seq id no.2和seq id no.7～seq id no.8所示：

3.一种dkd诊断试剂盒，其特征在于，包括seq id no.1～seq id no.2和seq id no.7～seq id no.8所示的引物。

4.敲低trail表达的物质在制备治疗dkd药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述敲低trail表达的物质为干扰rna，序列为：5’-ccauuucuacaguucaagaaa-3’，seq id no.9。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在糖尿病肾病患者肾组织中trail表达升高，与肾功能指标具有相关性。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，敲低trail减轻tnf-α诱导的足细胞泛凋亡，逆转其相关基因cleaved caspase1、cleaved caspase 3、bax、bcl-2、p-mlkl、p-ripk异常表达；过表达trail则促进足细胞泛凋亡发生和相关基因的异常表达。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，trail在stz诱导的dkd小鼠中表达升高，足细胞特异性敲除trail减轻stz诱导的dkd小鼠足细胞和肾小球损伤。

技术总结
本发明公开了TRAIL在制备DKD诊断试剂盒和药物中的应用，涉及糖尿病肾脏疾病的诊断和治疗技术领域，本发明发现TRAIL在糖尿病肾病患者肾组织中表达升高，与eGFR呈负相关、与UACR和肾小球硬化程度呈正相关。本发明还发现TRAIL升高与足细胞损伤有关，敲低TRAIL减轻足细胞泛凋亡，在一定程度上可以反映DKD进展。后续可以进一步通过体内、体外实验验证TRAIL参与糖尿病肾病足细胞泛凋亡的具体机制，有助于为糖尿病肾病的治疗和为靶向药物的研发奠定理论基础。

技术研发人员：吕智美,王荣,胡锦秀,刘冰
受保护的技术使用者：山东第一医科大学附属省立医院（山东省立医院）
技术研发日：
技术公布日：2025/1/28