高酶活抑制能力的差异化抗CD73单克隆抗体及其应用

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种高酶活抑制能力的差异化抗cd73单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、cd73，全称为胞外-5′-核苷酸酶，其在多种癌症中的高表达与不良预后密切相关，包括乳腺癌、肺癌、胰腺癌、胃癌和结直肠癌。在肿瘤微环境中，cd73可以将单磷酸腺苷(amp)水解产生大量腺苷(ado)，蓄积的腺苷与免疫细胞上的腺苷受体结合抑制体内抗肿瘤免疫反应，具体表现为阻断t细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞的免疫功能，同时增强调节性t细胞和髓系来源的抑制细胞功能，促进m2型巨噬细胞极化等，导致肿瘤的免疫逃逸，从而促进了肿瘤的生长和转移。肿瘤微环境中腺苷还可作用于内皮细胞上腺苷受体，促进瘤内血管生存，作用于肿瘤细胞直接促进其生长，作用于肿瘤相关成纤维细胞促进其免疫抑制功能。cd73还通过不依赖其酶活的机制直接促进肿瘤细胞的侵袭和转移。因此，cd73在肿瘤进展中发挥着重要功能，这使得它成为肿瘤免疫治疗的一个有吸引力的靶点。

2、目前，临床前研究的积极结果表明，靶向cd73的干预措施，无论是通过基因编辑技术还是药物治疗，均能有效抑制肿瘤生长，并增强传统放化疗及免疫检查点抑制剂(如pd-(l)1、ctla-4等)的治疗效果。这些发现推动了靶向cd73的治疗性抗体的开发，并将其推向了临床试验阶段。目前的临床i、ii期研究数据表明，cd73抗体与其他免疫检查点抑制剂、放疗等治疗方法的联合应用，不仅增强了治疗效果，而且展现了良好的安全性。大多数治疗相关不良事件为3级及以下，且发现肿瘤中cd73的高表达与治疗反应密切相关，暗示其作为潜在生物标志物的可能性。这些结果突显了靶向cd73疗法在临床转化方面的重要价值和其抗肿瘤潜力。

3、尽管cd73抗体在临床研究中显示出潜力，但目前存在的cd73抗体在抗原表位结合和酶活抑制方面的作用机制存在差异。这些差异导致对不同形式的cd73(包括游离型和细胞膜表面型)的酶活抑制不完全，例如tj004309对游离cd73酶活有显著抑制作用，但对细胞膜表面cd73的抑制作用较弱；cpi-006能几乎完全抑制细胞膜表面cd73酶活，但对游离cd73的抑制作用有限；medi9447对游离酶活存在“钩状效应”，对细胞膜cd73的酶活抑制不彻底。这种不完全抑制可能会削弱抗体对amp-cd73-ado轴的阻断效果，进而影响其治疗效果。因此，能够彻底抑制cd73酶活的抗体可能在临床应用中具有更优的治疗效果。

4、综上所述，cd73作为一个新兴的肿瘤治疗靶点，其在临床试验中的初步成效，为肿瘤治疗提供了新的思路。然而，当前临床在研的抗cd73抗体因在抗原表位结合和酶活抑制方面存在差异，可能会限制cd73靶点的疗效潜力的充分发挥，影响其临床治疗价值的实现。未来的研究需要开发功能更强大、作用机制差异化的抗cd73抗体，以实现该靶点的临床转化价值。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了高酶活抑制能力的差异化抗cd73单克隆抗体及其应用。本发明的抗cd73单克隆抗体识别抗原表位新颖，作用机制独特，对不同形式的cd73蛋白均具有高酶活抑制能力，因此可充分发挥cd73靶点的疗效潜力，提升治疗效果。

2、本发明的具体技术方案为：

3、第一方面，本发明提供了一种高酶活抑制能力的差异化抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区。其中：所述重链可变区包括如seq id no：1所示的氨基酸序列，或与其具有至少95％的同源性；所述轻链可变区包括如seq id no：2所示的氨基酸序列，或与其具有至少95％的同源性。

4、进一步地，所述抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链和轻链，其中：所述重链包括如seq id no：5所示的氨基酸序列；所述轻链包括如seq id no：6所示的氨基酸序列。

5、第二方面，本发明提供了一种编码上述抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的核苷酸，其包括编码重链可变区的部分和编码轻链可变区的部分。其中：所述编码重链可变区的部分包括如seq id no：3所示的核苷酸序列；所述编码轻链可变区的部分包括如seq idno：4所示的核苷酸序列。

6、进一步地，所述核苷酸包括如seq id no：7所示的编码重链的核苷酸序列，以及如seqid no：8所示的编码轻链的核苷酸序列。

7、第三方面，本发明提供了一种含有上述核苷酸的载体。

8、第四方面，本发明提供了一种含有上述核苷酸或载体的宿主细胞。

9、第五方面，本发明提供了一种上述抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的制备方法，包括以下步骤：培养含有可编码抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的核苷酸的宿主细胞，使其表达抗cd73单克隆抗体或者抗原结合片段，收集所表达的抗体或其抗原结合片段。

10、第六方面，本发明提供上抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段或上述核苷酸或上述载体或上述宿主细胞在制备药物中的应用。其中，所述药物为抑制cd73酶活性、抗肿瘤的药物。

11、进一步地，所述肿瘤为高表达、中/低表达cd73的肿瘤。

12、进一步优选，所述肿瘤为三阴性乳腺癌、结直肠癌。

13、作为优选，所述药物还包括药学上可接受的载体。

14、进一步优选，所述药物的剂型为注射制剂，以注射液的形式存在，可以是溶液或冻干粉等。

15、与现有技术对比，本发明的有益效果是：

16、(1)本发明的抗cd73单克隆抗体相较于当前临床在研抗cd73抗体，对不同形式(包括游离型和细胞膜表面型)的cd73蛋白均具有更好的酶活抑制能力。

17、(2)本发明的抗cd73单克隆抗体，动物实验显示其在体内能够发挥显著的抗肿瘤效应，有效剂量范围内未观察到明显的动物体重下降，血常规、生化指标异常。

18、(3)本发明的抗cd73单克隆抗体，识别抗原表位以及作用机制不同于当前临床在研抗cd73抗体，是潜在的临床新选择。

19、(4)本发明的编码抗cd73单克隆抗体，作用机制独特，能够通过单价的抗原结合片段(fab)形式发挥酶活抑制作用，可作为双特异性抗体的选择。

20、(5)本发明的抗cd73单克隆抗体能够起到共刺激作用，辅助t免疫细胞活化。

技术特征：

1.一种高酶活抑制能力的差异化抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：包括如seq id no:5所示的重链的氨基酸序列，以及如seq id no:6所示的轻链的氨基酸序列。

3.一种编码权利要求1或2所述抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的核苷酸，包括编码重链可变区的部分和编码轻链可变区的部分，其特征在于：

4.根据权利要求3所述的核苷酸，其特征在于：包括如seq id no:7所示的编码重链的核苷酸序列，以及如seq id no:8所示的编码轻链的核苷酸序列。

5.一种含有权利要求3或4所述核苷酸的载体。

6.一种含有权利要求4所述核苷酸或权利要求5所述载体的宿主细胞。

7.一种根据权利要求1或2所述抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的制备方法，其特征在于包括以下步骤：培养含有可编码抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段的核苷酸的宿主细胞，使其表达抗cd73单克隆抗体或者抗原结合片段，收集所表达的抗体或其抗原结合片段。

8.根据权利要求1或2所述的抗cd73单克隆抗体或其抗原结合片段或根据权利要求3或4所述的核苷酸或根据权利要求5所述的载体或根据权利要求6所述的宿主细胞在制备药物中的应用，其特征在于：所述药物为抑制cd73酶活性、抗肿瘤的药物。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为表达cd73的肿瘤。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为三阴性乳腺癌或结直肠癌。

技术总结
本发明涉及生物医药领域，公开了一种高酶活抑制能力的差异化抗CD73单克隆抗体及其应用。该抗CD73单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或与其具有至少95%的同源性；所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或与其具有至少95%的同源性。本发明的抗CD73单克隆抗体识别抗原表位新颖，作用机制独特，对不同形式的CD73蛋白均具有高酶活抑制能力，因此可充分发挥CD73靶点的疗效潜力，提升治疗效果。

技术研发人员：黄建,任国宏
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2025/4/6