一种蛋白核小球藻高F值寡肽及其制备方法和应用

本发明属于多肽制备，具体涉及一种蛋白核小球藻高f值寡肽及其制备方法和应用。

背景技术：

1、高f值寡肽是支链氨基酸含量与芳香族氨基酸含量的比值超过20，由3-9个氨基酸组成的寡肽体系。高f值寡肽因其独特的氨基酸组成而具备多种功能活性，如抗氧化、抗疲劳、抗醉酒和肝保护活性等，因此在缓减酒精性和化学性肝损伤方面具有重要的应用潜力。目前，国内外研究学者对高f值寡肽产品的开发涉及三种不同原料来源的蛋白质，有植物源蛋白，如玉米、火麻仁和松仁；水产源蛋白，如南极磷虾、牡蛎和贻贝等；乳源性蛋白，如羊乳和牛乳等。

2、高f值肽制备技术的重点就是最大程度的将芳香族氨基酸分离出来，同时尽可能保留支链氨基酸。目前，蛋白酶解法是制备高f值肽的主要途径，分为单一酶水解法和复合酶水解法。其中复合酶水解法由于效率高而更受欢迎。复合酶水解首先通过中性蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶等内切酶将原料中分子质量大的肽链键断裂，暴露芳香族氨基酸，之后选用风味蛋白酶等外切酶释放芳香族氨基酸。芳香族氨基酸的脱除是提高f值的一个关键点，主要有活性炭、树脂吸附，而活性炭由于易于操作、成本低，吸附性好而作为芳香族氨基酸吸附的一种常用材料。然而，在高f值肽的制备过程中存在酶切位点广泛、水解过程难以控制，支链和芳香族氨基酸释放率低，蛋白回收率低等问题，如何选择专一性酶切芳香族氨基酸的酶，实现定向制备和水解控制是亟需解决的问题；同时在芳香族氨基酸吸附过程中，差异性吸附手段有限。

3、蛋白核小球藻(chlorella)是微藻的一种，蛋白质含量高达50-60％，同时富含丰富的必须氨基酸，如亮氨酸、精氨酸和赖氨酸，约占总蛋白质含量的7％；其他必需氨基酸如异亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸和缬氨酸，通常约总蛋白质含量的4％。研究已经在蛋白核小球藻水解肽中发现多种生物活性，如抗氧化性、肝保护活性。因此，蛋白核小球藻是制备高f值肽的良好来源，但目前从蛋白核小球藻中制备高f值肽的效果并不好。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一种蛋白核小球藻高f值肽及其制备方法，本发明采用特定内切酶和外切酶结合酶解蛋白核小球藻，避免了因酶切位点广泛而造成的酶消耗量大，节约了成本，制备高效稳定且重复性好。同时，以小球藻为原料成功制备的高f值肽，解决了目前制备高f值肽原料来源匮乏的问题，本发明可用于制备具有醒酒护肝功效的药品、保健品和食品。

2、本发明所提供的蛋白核小球藻高f值肽，是将蛋白核小球藻进行粉碎，然后与水混合后，冻融并超声处理制成匀浆液；加入碱性蛋白酶进行酶解，然后再加入风味蛋白酶进行酶解；酶解产物用活性炭吸附后，上清液经过冷冻干燥即得到蛋白核小球藻高f值肽。

3、所述的将蛋白核小球藻进行粉碎，作为实施例的一种记载，是将蛋白核小球藻通过气流碰撞来粉碎。

4、作为本发明的一种优选方案，蛋白核小球藻与蒸馏水是按照重量体积比1:20-1:30(g/ml)进行混合的；

5、作为本发明的一种优选方案，所述的碱性蛋白酶酶解的ph为8.0-9.0，温度为50℃。

6、所述的风味蛋白酶的酶解体系ph为7.0-8.0，温度为50℃，酶解时间2.5-3.5h。

7、作为本发明的一种优选方案，所述的活性炭是采用一种粒径为200目、木质和椰壳混合的活性炭(thx-200a)进行脱除芳香族氨基酸处理的。

8、本发明再一个方面还提供所述的蛋白核小球藻高f值肽的一种用途，是在制备醒酒或护肝制品中的应用。

9、本发明还提供一种解酒或护肝的制品，其中包含有所述的蛋白核小球藻高f值肽。

10、本发明严格控制酶解和吸附过程中的参数，内切酶和外切酶酶解不仅高效水解小球藻蛋白质，产生更多具有生物活性的肽段，而且解决了因酶切位点广泛而造成工业化生产的成本高和稳定性差的特性。本发明所制备的蛋白核小球藻高f值肽达到36.90±8.18，与蛋白核小球藻原料相比(2.90±0.07)，其f值提高了12.72倍，除此之外，高f值寡肽分子量<1000da的肽占95-99.40％，符合寡肽的特征，分子量小，易消化吸收。本发明制得的高f值寡肽可以加速乙醇在肝脏内的代谢，保护酒精对肝脏的损伤，具有醒酒护肝的功效。

技术特征：

1.一种蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的蛋白核小球藻高f值肽是将蛋白核小球藻进行粉碎，然后与水混合后，冻融并超声处理制成匀浆液；加入碱性蛋白酶进行酶解，然后再加入风味蛋白酶进行酶解；酶解产物用活性炭吸附后，上清液经过冷冻干燥制备的。

2.如权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的将蛋白核小球藻进行粉碎，是将蛋白核小球藻通过气流碰撞来粉碎。

3.如权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的蛋白核小球藻与蒸馏水按照重量体积比1:20-1:30进行混合。

4.如权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的碱性蛋白酶酶解的ph为8.0-9.0，温度为50℃。

5.如权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的风味蛋白酶的酶解体系ph为7.0-8.0，温度为50℃，酶解时间2.5-3.5h。

6.如权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽，其特征在于，所述的活性炭是采用一种粒径为200目、木质和椰壳混合的活性炭进行脱除芳香族氨基酸处理。

7.权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽在制备醒酒或护肝制品中的应用。

8.一种解酒或护肝的制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求1所述的蛋白核小球藻高f值肽。

技术总结
本发明提供了一种蛋白核小球藻高F值肽及其制备方法，本发明严格控制酶解和吸附过程中的参数，内切酶和外切酶酶解不仅高效水解小球藻蛋白质，产生更多具有生物活性的肽段，而且解决了因酶切位点广泛而造成工业化生产的成本高和稳定性差的特性。本发明所制备的蛋白核小球藻高F值肽达到36.90±8.18，与蛋白核小球藻原料相比(2.90±0.07)，其F值提高了12.72倍，除此之外，高F值寡肽分子量<1000Da的肽占95‑99.40％，符合寡肽的特征，分子量小，易消化吸收。本发明制得的高F值寡肽可以加速乙醇在肝脏内的代谢，保护酒精对肝脏的损伤，具有醒酒护肝的功效。

技术研发人员：侯虎,孙艳,杨亭亭,樊燕,杨霞,赵雪
受保护的技术使用者：中国海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2025/2/17