一种鱼类弹状病毒结合蛋白及其制备方法与应用与流程

本发明属于水产病原微生物防控领域，具体涉及一种鱼类弹状病毒结合蛋白及其制备方法与应用。

背景技术：

1、2010年以来，世界水产养殖业产量增长迅速，鱼类弹状病毒病的爆发也日益频繁，严重影响了水产养殖的健康持续发展。1999年，中国学者张其亚在广东患病的鳜组织中首次观察到了鳜弹状病毒(siniperca chuatsi rhabdovirus,scrv)，scrv为弹状病毒科(rhabdoviridae)成员之一，为单股负链不分节段的rna病毒。随着鱼类养殖业的快速发展，鱼类弹状病毒病已成为养殖鱼类的重要病害之一。鱼类弹状病毒有很强的致病性，特别是vhsv、ihnv、hrv、shrv和svcv在世界各地广泛流行，给水产养殖业造成重大的经济损失。

2、目前，针对弹状病毒所引起的相关疾病仍旧缺乏有效的治疗方式，疫苗作为预防病毒感染最有效的方式在弹状病毒的预防上有一定的报道，然而，病毒防治效果仍然有限，使其难以满足大规模产业化要求。因此，寻找更加安全、高效的抗弹状病毒制剂成为促进水产养殖业健康发展所亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术中的问题，本发明提供一种鱼类弹状病毒结合蛋白，该蛋白能够针对鱼类弹状病毒与宿主细胞受体结合的位点高效结合，有效阻断鱼类弹状病毒侵害宿主细胞的入侵通道，从而阻断病毒感染细胞、避免病毒在宿主体内复制、增殖。本发明所提供的鱼类弹状病毒结合蛋白具有高效抗弹状病毒作用，以此为活性材料制备的预混合饲料添加剂能够显著提高鱼苗抗弹状病毒能力，且安全无污染，能够进行大规模产业化应用，进而提升鱼类养殖的经济效益。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、本发明第一方面提供一种鱼类弹状病毒结合蛋白，其特征在于：所述鱼类弹状病毒结合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明第二方面提供一种编码上述的鱼类弹状病毒结合蛋白的基因，所述的基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

5、本发明第三方面提供一种上述鱼类弹状病毒结合蛋白的制备方法，包括：将编码基因以bamhi和hindⅲ作为酶切位点连接至载体pet-30a（+）上，得到重组质粒；将重组质粒转化至大肠杆菌bl21-de3中，通过iptg诱导目的蛋白的表达，经纯化后得到鱼类弹状病毒结合蛋白。

6、本发明第四方面提供一种预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂，以质量份数计，包括上述的鱼类弹状病毒结合蛋白1-3份、基础辅料350-360份和植物提取物辅料30-40份。

7、优选的，以质量份数计，包括上述的鱼类弹状病毒结合蛋白1份、基础辅料360份和植物提取物辅料40份。

8、进一步的，基础辅料包括以下质量份数的原料：钙基蒙脱石1-5份，改性硅藻土1-3份，水玻璃0.1-1份，大蒜粉2-5份，破壁酵母粉2-10份，麦麸5-20份，混合油脂2-5份，食盐0.5-1份，鱼粉5-20份，花生渣5-15份。

9、其中，基础辅料颗粒细度为200目以上。

10、钙基蒙脱石，用作矿物质补充剂。

11、改性硅藻土，作为吸附剂或改善肠道健康的成分。

12、水玻璃（硅酸钠），作为分散剂，促进各原料的相互分散。

13、大蒜粉，具有抗菌和免疫增强作用。

14、破壁酵母粉，作为蛋白质和b族维生素的来源。

15、麦麸，作为纤维来源。

16、混合油脂，作为能量来源。

17、食盐，作为电解质和调味剂。

18、鱼粉、花生渣，作为蛋白质来源。

19、进一步的，植物提取物辅料包括以下质量份数的原料：金银花0.1-1份、忍冬藤0.1-1份，马齿苋0.1-1份，蒲公英0.1-1份，连翘0.1-1份，夏枯草0.1-1份，陈皮0.05-0.5份，丁香0.05-0.5份，肉桂0.05-0.5份，甘草0.5-2份。

20、其中，植物提取物辅料颗粒细度为200目以上。

21、金银花、忍冬藤、马齿苋、蒲公英、连翘、夏枯草，作为天然抗病毒和免疫增强剂。

22、陈皮、丁香、肉桂，具有调味作用，还具有一定的健康益处。

23、甘草，具有免疫调节作用。

24、本发明第五方面提供一种上述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂的制备方法：将上述的鱼类弹状病毒结合蛋白、基础辅料和植物提取物辅料依次添加至搅拌器中，通过搅拌器充分搅拌均匀，得到预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂。

25、本发明第六方面提供一种上述的鱼类弹状病毒结合蛋白或上述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂在制备预防鱼类弹状病毒饲料中的应用。

26、进一步的，所述预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂以0.1％~1％的质量百分比添加至预防鱼类弹状病毒饲料中。

27、上述本发明的一种或多种技术方案取得的有益效果如下：

28、本发明提供的鱼类弹状病毒结合蛋白，能够针对鱼类弹状病毒与宿主细胞受体结合的位点高效结合，有效阻断鱼弹状病毒侵害宿主细胞的入侵通道，从而阻断病毒感染细胞、避免病毒在宿主体内复制、增殖，实现高效抗弹状病毒作用，该蛋白加入到预混合饲料添加剂中，能够显著提高机体抗弹状病毒能力，且安全无污染，能够进行大规模产业化应用，进而提升鱼类养殖的经济效益。

技术特征：

1.一种鱼类弹状病毒结合蛋白，其特征在于：所述鱼类弹状病毒结合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种编码权利要求1所述的鱼类弹状病毒结合蛋白的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.一种权利要求1所述的鱼类弹状病毒结合蛋白的制备方法，其特征在于：包括：将编码基因以bamhi和hindⅲ作为酶切位点连接至载体pet-30a（+）上，得到重组质粒；将重组质粒转化至大肠杆菌bl21-de3中，通过iptg诱导目的蛋白的表达，经纯化后得到鱼类弹状病毒结合蛋白。

4.一种预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂，其特征在于：以质量份数计，包括权利要求1所述的鱼类弹状病毒结合蛋白1-3份、基础辅料350-360份和植物提取物辅料30-40份。

5.如权利要求4所述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂，其特征在于：以质量份数计，包括权利要求1所述的鱼类弹状病毒结合蛋白1份、基础辅料360份和植物提取物辅料40份。

6.如权利要求4所述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂，其特征在于：基础辅料包括以下质量份数的原料：钙基蒙脱石1-5份，改性硅藻土1-3份，水玻璃0.1-1份，大蒜粉2-5份，破壁酵母粉2-10份，麦麸5-20份，混合油脂2-5份，食盐0.5-1份，鱼粉5-20份，花生渣5-15份。

7.如权利要求4所述的预防鱼类弹状病毒的饲料添加剂，其特征在于：

8.权利要求4所述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂的制备方法，其特征在于：将鱼类弹状病毒结合蛋白、基础辅料和植物提取物辅料依次添加至搅拌器中，通过搅拌器充分搅拌均匀，得到预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂。

9.如权利要求1所述的鱼类弹状病毒结合蛋白或如权利要求4所述的预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂在制备预防鱼类弹状病毒饲料中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述预防鱼类弹状病毒的预混合饲料添加剂以0.1％-1％的质量百分比添加至预防鱼类弹状病毒饲料中。

技术总结
本发明属于水产病原微生物防控领域，具体涉及一种鱼类弹状病毒结合蛋白及其制备方法与应用。该蛋白能够针对鱼类弹状病毒与宿主细胞受体结合的位点高效结合，有效阻断鱼类弹状病毒侵害宿主细胞的入侵通道，从而阻断病毒感染细胞、避免病毒在宿主体内复制、增殖。本发明所提供的鱼类弹状病毒结合蛋白具有高效抗弹状病毒作用，以此为活性材料制备的预混合饲料添加剂能够显著提高鱼苗抗弹状病毒能力，且安全无污染，能够进行大规模产业化应用，进而提升鱼类养殖的经济效益。

技术研发人员：邹伟斌,李其昌,任学行,林梓栋,陈汉锶,林旭埜,卢创丰,巢伟
受保护的技术使用者：海泰达生物科技（广州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/4/6