NF2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗A型和B型流感病毒感染药物中的应用的制作方法

本发明属于生物基因工程，具体涉及nf2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用。

背景技术：

1、流感是一种由流感病毒引起的急性呼吸道感染，可引起季节性流行或偶尔大流行。季节性流感病毒通过不断进化以逃避宿主免疫，导致全球流行病反复发生。其中，a型和b型流感病毒属于正粘病毒科(orthomyxoviridae)；a型流感病毒(wsn)能够感染人和多种动物，多种亚型的a型流感病毒具有高致病性和/或高死亡率，严重威胁动物和人类的健康；b型流感病毒(yamagata)主要感染人，虽然对人的致病性相对较低，但由b型流感病毒感染引发的肺炎具有较高的死亡率。并且，由于流感病毒表面蛋白易发生抗原变异，从而对以流感病毒表面蛋白为靶点的药物产生抗药性。因此，目前存在的抗a型和b型流感病毒的药物疗效逐渐降低，治疗效果不理想。

2、crispr(clustered regularly inter spaced short palindromic repeat)系统是一种来自于细菌中的适应性免疫防御系统。crispr screen技术利用crispr cas基因编辑系统的有效性和灵活性，已经成为广泛应用于生物学发现的一种十分有效的工具。

3、目前，现有技术中多对单一类型的流感病毒的宿主因子进行探究，而对于多种不同亚型流感病毒的共同靶点的发现尚未发现，具体地，缺少针对于a型和b型流感病毒的共同靶点，以及能够同时有效抑制a型和b型流感病毒复制的药物。

4、nf2(merlin肿瘤抑制因子)基因/蛋白参与细胞增殖调控，并在细胞与细胞粘附和跨膜信号传导中发挥作用，并已被证明nf2基因/蛋白与细胞表面蛋白、参与细胞骨架动力学的蛋白和参与调节离子运输的蛋白相互作用；但nf2基因/蛋白是否影响流感病毒的感染，目前未见研究报道。

技术实现思路

1、本发明为解决现有技术中缺少a型和b型流感病毒的共同靶点，以及能够同时有效抑制a型和b型流感病感染的药物，提供了nf2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用。

2、本发明的目的之一在于提供nf2基因/蛋白作为靶点在制备用于预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

3、在本发明的一个优选实施例中，所述预防或治疗a型和b型流感病毒感染的药物具有以下至少一种功能：抑制a型和b型流感病毒吸附、抑制a型和b型流感病毒生长或增殖、抑制a型和b型流感病毒侵袭、抑制a型和b型流感病毒受体的表达。

4、本发明的目的之二在于提供nf2基因/蛋白表达抑制剂在制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

5、在本发明的一个优选实施例中，所述nf2基因/蛋白表达抑制剂是以nf2基因为靶点，抑制或沉默nf2基因的表达。

6、在本发明的一个优选实施例中，所述nf2基因/蛋白表达抑制剂为核酸分子、小分子化合物、多肽、蛋白、基因编辑载体或慢病毒中的至少一种。

7、本发明的目的之三在于提供nf2基因/蛋白表达增效剂在制备a型和b型流感病毒的复制增效剂或疫苗生产增效剂中的应用，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

8、在本发明的一个优选实施例中，所述的复制增效剂或生产增效剂是以nf2基因为靶点，促进nf2基因的表达。

9、在本发明的一个优选实施例中，所述nf2基因的qpcr引物为：

10、f：tacacaatcaaggacacagt，seq id no.2；

11、r：ctcttcagcattctcaggat，seq id no.3。

12、本发明的有益效果：本发明提供了nf2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用，

13、利用crispr screen制备技术构建了人的基因组基因的敲除文库，获取了大量的基因突变细胞，通过对上述突变细胞进行a型流感病毒(wsn)和b型(yamagata)流感病毒的感染，最终制备获得了能够同时影响a型和b型流感病毒在人的宿主细胞内的感染侵入的关键的共同新靶点nf2基因/蛋白。

14、本发明经过蛋白水平和mrna水平的表达检测，证明了本发明提供的a型和b型流感病毒共同新靶点nf2基因/蛋白，可应用于制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物，所述预防或治疗a型和b型流感病毒感染的药物具有以下至少一种功能：抑制a型和b型流感病毒吸附、抑制a型和b型流感病毒生长或增殖、抑制a型和b型流感病毒侵袭、抑制a型和b型流感病毒受体的表达。

15、本发明提供的a型和b型流感病毒共同的新靶点nf2基因/蛋白，同时对不同亚型流感病毒的流行实现了预防和控制的目的，以及普适性流感疫苗的研发和制备提供了可靠的研究基础和理论依据。

技术特征：

1.nf2基因/蛋白作为靶点在制备用于预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用，其特征在于，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防或治疗a型和b型流感病毒感染的药物具有以下至少一种功能：抑制a型和b型流感病毒吸附、抑制a型和b型流感病毒生长或增殖、抑制a型和b型流感病毒侵袭、抑制a型和b型流感病毒受体的表达。

3.nf2基因/蛋白表达抑制剂在制备预防或治疗a型和b型流感病毒感染药物中的应用，其特征在于，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述nf2基因/蛋白表达抑制剂是以nf2基因为靶点，抑制或沉默nf2基因的表达。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述nf2基因/蛋白表达抑制剂为核酸分子、小分子化合物、多肽、蛋白、基因编辑载体或慢病毒中的至少一种。

6.nf2基因/蛋白表达增效剂在制备a型和b型流感病毒的复制增效剂或疫苗生产增效剂中的应用，其特征在于，所述nf2基因cds区核苷酸序列为seq id no.1所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的复制增效剂或生产增效剂是以nf2基因为靶点，促进nf2基因的表达。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述nf2基因的qpcr引物为：

技术总结
NF2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗A型和B型流感病毒感染药物中的应用，属于生物基因工程技术领域。本发明为解决现有技术中缺少A型和B型流感病毒的共同靶点，以及能够同时有效抑制A型和B型流感病感染的药物，提供了NF2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗A型和B型流感病毒感染药物中的应用，利用CRISPR Screen筛选获得了A型和B型流感病毒在人的宿主细胞内感染侵入的共同新靶点NF2基因/蛋白，所述新靶点NF2基因/蛋白可应用于制备表达抑制剂，抑制A型和B型流感病毒的复制；以及可应用于制备NF2基因表达增效剂，制备A型和B型流感病毒的复制增效剂或疫苗生产增效剂。

技术研发人员：常德,李开龙,张咪,焦鹏涛
受保护的技术使用者：中国人民解放军总医院第八医学中心
技术研发日：
技术公布日：2025/2/20