一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基及培养方法

本发明属于虫黄藻培养，涉及一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基及培养方法。

背景技术：

1、珊瑚虫在生长发育过程中需要大量的能量，这种能量一部分靠共生虫黄藻提供，并且这是珊瑚重要的能量来源。珊瑚虫给虫黄藻提供了更安全的生活环境，作为回报，虫黄藻为珊瑚虫提供光合固碳的产物，而这部分物质占珊瑚虫所需能量的90％。1944年kawaguti最早开展了虫黄藻的人工离体培养，但是并未成功。1967年ahles对来自于70个不同宿主的虫黄藻进行了体外培养研究，只有四分之一的虫黄藻能够在海水培养基asp-8a中存活。1985年william用f/2培养基成功对几株虫黄藻的离体培养。起初我国研究人员仅中国海洋大学、广东海洋大学等团队对海葵等虫黄藻的离体培养进行了摸索，但虫黄藻离体后最多只能存活14天。因此，寻找虫黄藻适宜生长的培养基条件至关重要。

技术实现思路

1、基于以上，本发明的目的在于提供一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基及培养方法，离体虫黄藻在改良培养基中存活时间长、生长状态优良。

2、本发明为实现技术目的采用的技术方案为：

3、本发明提供了一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基，包含：nano3、nah2po4·h2o、vit.b1、vit.h、vit.b12、na2edta·2h2o、fecl3·6h2o、mncl2·4h2o、znso4·7h2o、cocl2·6h2o、cuso4·5h2o、na2moo4·2h2o、h2seo3、niso4·6h2o、na3vo4、k2cro4、氨苄霉素、卡那霉素、氯霉素、奇霉素、链霉素。

4、优选地，所述改良培养基中，氨苄霉素、卡那霉素、氯霉素、奇霉素和链霉素的终浓度均为50μgml-1。

5、优选地，所述改良培养基中，vit.b1的终浓度为2.96×10-7m，vit.h的终浓度为2.05×10-9m，vit.b12的终浓度为3.69×10-10m。

6、优选地，所述改良培养基中，nano3的终浓度为75μg l-1、nah2po4·h2o的终浓度为5μg l-1。

7、优选地，所述改良培养基中，na2edta·2h2o的终浓度为4.36μg l-1、fecl3·6h2o的终浓度为3.15μg l-1、mncl2·4h2o的终浓度为178.10μg l-1、znso4·7h2o的终浓度为23.00μg l-1、cocl2·6h2o的终浓度为11.90μg l-1、cuso4·5h2o的终浓度为2.50μg l-1、na2moo4·2h2o的终浓度为19.90μg l-1、h2seo3的终浓度为1.29μg l-1、niso4·6h2o的终浓度为2.63μgl-1、na3vo4的终浓度为1.84μg l-1、k2cro4的终浓度为1.94μg l-1。

8、本发明还提供了一种适用于虫黄藻离体培养的培养方法，采用上述改良培养基，包括：将虫黄藻的重悬液移入装有改良培养基的培养瓶，放置在25℃光照培养箱中培养，光照强度为60μmol photons·m-2·s-1，光暗周期为14h:10h。

9、优选地，所述虫黄藻的重悬液通过以下方法制备：取d系虫黄藻藻液于无菌离心管中，按照3000rpm/min、25℃条件设置离心5min后取出，于超净工作台中倒掉废弃培养液，向其中加入改良培养基后使虫黄藻重悬。

10、优选地，虫黄藻初始浓度为1×105cells/ml。

11、本发明的有益效果在于：

12、本发明提供了的一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基，通过调整所添加的不同抗生素的组成，不仅可以使虫黄藻细胞密度显著增加，同时也显著提高了虫黄藻最大光和效率(fv/fm)和虫黄藻中叶绿素a和类胡萝卜素含量，配方简单易配制、效果好，具有非常好的应用前景。

技术特征：

1.一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基，包含：nano3、nah2po4·h2o、vit.b1、vit.h、vit.b12、na2edta·2h2o、fecl3·6h2o、mncl2·4h2o、znso4·7h2o、cocl2·6h2o、cuso4·5h2o、na2moo4·2h2o、h2seo3、niso4·6h2o、na3vo4、k2cro4、氨苄霉素、卡那霉素、氯霉素、奇霉素、链霉素。

2.根据权利要求1所述的改良培养基，其特征在于，所述改良培养基中，氨苄霉素、卡那霉素、氯霉素、奇霉素和链霉素的终浓度均为50μgml-1。

3.根据权利要求1所述的改良培养基，其特征在于，所述改良培养基中，vit.b1的终浓度为2.96×10-7m，vit.h的终浓度为2.05×10-9m，vit.b12的终浓度为3.69×10-10m。

4.根据权利要求1所述的改良培养基，其特征在于，所述改良培养基中，nano3的终浓度为75μg l-1、nah2po4·h2o的终浓度为5μg l-1。

5.根据权利要求1所述的改良培养基，其特征在于，所述改良培养基中，na2edta·2h2o的终浓度为4.36μg l-1、fecl3·6h2o的终浓度为3.15μg l-1、mncl2·4h2o的终浓度为178.10μg l-1、znso4·7h2o的终浓度为23.00μg l-1、cocl2·6h2o的终浓度为11.90μg l-1、cuso4·5h2o的终浓度为2.50μg l-1、na2moo4·2h2o的终浓度为19.90μg l-1、h2seo3的终浓度为1.29μg l-1、niso4·6h2o的终浓度为2.63μg l-1、na3vo4的终浓度为1.84μg l-1、k2cro4的终浓度为1.94μg l-1。

6.一种适用于虫黄藻离体培养的培养方法，采用权利要求1～5任意一项所述的改良培养基，包括：将虫黄藻的重悬液移入装有改良培养基的培养瓶，放置在25℃光照培养箱中培养，光照强度为60μmol photons·m-2·s-1，光暗周期为14h:10h。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述虫黄藻的重悬液通过以下方法制备：取d系虫黄藻藻液于无菌离心管中，按照3000rpm/min、25℃条件设置离心5min后取出，于超净工作台中倒掉废弃培养液，向其中加入改良培养基后使虫黄藻重悬。

8.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，虫黄藻初始浓度为1×105cells/ml。

技术总结
本发明提供一种适用于虫黄藻离体培养的改良培养基及培养方法，改良培养基包含：NaNO<subgt;3</subgt;、NaH<subgt;2</subgt;PO<subgt;4</subgt;·H<subgt;2</subgt;O、Vit.B<subgt;1</subgt;、Vit.H、Vit.B<subgt;12</subgt;、Na<subgt;2</subgt;EDTA·2H<subgt;2</subgt;O、FeCl<subgt;3</subgt;·6H<subgt;2</subgt;O、MnCl<subgt;2</subgt;·4H<subgt;2</subgt;O、ZnSO<subgt;4</subgt;·7H<subgt;2</subgt;O、CoCl<subgt;2</subgt;·6H<subgt;2</subgt;O、CuSO<subgt;4</subgt;·5H<subgt;2</subgt;O、Na<subgt;2</subgt;MoO<subgt;4</subgt;·2H<subgt;2</subgt;O、H<subgt;2</subgt;SeO<subgt;3</subgt;、NiSO<subgt;4</subgt;·6H<subgt;2</subgt;O、Na<subgt;3</subgt;VO<subgt;4</subgt;、K<subgt;2</subgt;CrO<subgt;4</subgt;、氨苄霉素、卡那霉素、氯霉素、奇霉素、链霉素。本发明不仅可以使虫黄藻细胞密度显著增加，同时也显著提高了虫黄藻最大光和效率和虫黄藻中叶绿素a和类胡萝卜素含量，配方简单易配制、效果好，具有非常好的应用前景。

技术研发人员：傅鹏程,花燕莹,陈冠丞
受保护的技术使用者：海南大学
技术研发日：
技术公布日：2025/1/20