红藻氨酸受体Grik2b在防治橘小实蝇中的应用的制作方法

本发明属于生物技术和害虫绿色防控，具体涉及红藻氨酸受体grik2b在防治橘小实蝇中的应用。

背景技术：

1、橘小实蝇(bactrocera dorsalis)是属于双翅目、实蝇科、寡鬃实蝇亚科的一种果蔬毁灭性害虫。尽管橘小实蝇是一种多食性物种，危害的寄主植物超过250种，但主要的经济损失是由雌虫的产卵行为造成的，它们通过产卵对瓜果造成机械损伤，幼虫孵化后在果肉内取食导致果实快速腐烂变质和大量落果，严重威胁水果和蔬菜的生产。针对这种害虫，生产上主要以化学防治、类性诱剂杀雄和人工套袋等方式为主。然而由于抗药性、避害性和人工成本等因素导致这些方法均不能有效解决实蝇为害的问题，因此提出一种绿色无污染又能高效抑制雌蝇产卵行为的手段是十分必要的。

2、红藻氨酸受体是一种可以与神经递质谷氨酸结合的离子型受体，可被激动剂红藻氨酸选择性激活。作为离子型谷氨酸受体的一个亚型，其负责突触后信息传递和神经元兴奋性的控制。

技术实现思路

1、本发明通过前期对橘小实蝇雌虫不同发育阶段的产卵器进行转录组比较分析，发现红藻氨酸受体grik2b在产卵器中高表达。通过体内和体外实验，证明了在产卵器中特异性表达的grik2b可以调控雌虫的产卵行为。

2、本发明针对现有技术的缺陷与不足，提供红藻氨酸受体grik2b在防治橘小实蝇中的应用。

3、本发明的第一个目的是提供红藻氨酸受体grik2b在防治橘小实蝇中的应用，所述的红藻氨酸受体grik2b的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、优选，所述的应用为降低红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量和/或抑制红藻氨酸受体grik2b功能在降低雌性橘小实蝇产卵数量中的应用。

5、优选，所述的降低红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量为使用靶向grik2b的dsrna降低雌性橘小实蝇中的红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量。

6、优选，所述的靶向grik2b的dsrna的靶点区域的核苷酸序列如seq id no.2所示。

7、优选，所述的抑制红藻氨酸受体grik2b功能为使用红藻氨酸受体grik2b的抑制剂抑制雌性橘小实蝇红藻氨酸受体grik2b的功能。

8、优选，所述的红藻氨酸受体grik2b的抑制剂为d-ap5、cnqx和/或nbqx。

9、优选，所述的红藻氨酸受体grik2b的抑制剂的浓度为100μm。

10、优选，所述的雌性橘小实蝇为羽化12天后已交配的雌性橘小实蝇。

11、本发明的第二个目的是提供一种降低雌性橘小实蝇产卵量的制剂，包括以下a和/或b：

12、a.靶向红藻氨酸受体grik2b的dsrna

13、b.红藻氨酸受体grik2b的抑制剂；

14、所述的红藻氨酸受体grik2b的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

15、优选，制剂中所述的dsrna的靶点区域的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述的抑制剂为d-ap5、cnqx和/或nbqx。

16、本发明的有益效果：

17、本发明首次公开红藻氨酸受体grik2b作为靶点在防治橘小实蝇中的应用，设计针对grik2b的dsrna或选取与grik2b具有高亲和力的抑制剂，对雌虫进行体外注射，降低该受体的表达量或抑制该受体的功能，最终造成橘小实蝇雌虫产卵量显著降低，有效降低橘小实蝇的幼虫数量，进而达成高效控制其种群数量的目的。上述的防治方式在防治橘小实蝇的过程中，橘小实蝇不易产生抗药性，对环境友好，有极大的应用前景。

技术特征：

1.红藻氨酸受体grik2b在防治橘小实蝇中的应用，其特征在于，所述的红藻氨酸受体grik2b的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为降低红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量和/或抑制红藻氨酸受体grik2b功能在降低雌性橘小实蝇产卵数量中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的降低红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量为使用靶向grik2b的dsrna降低雌性橘小实蝇中的红藻氨酸受体grik2b的编码基因的表达量。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的靶向grik2b的dsrna的靶点区域的核苷酸序列如seq id no.2所示。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抑制红藻氨酸受体grik2b功能为使用红藻氨酸受体grik2b的抑制剂抑制雌性橘小实蝇红藻氨酸受体grik2b的功能。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的红藻氨酸受体grik2b的抑制剂为d-ap5、cnqx和/或nbqx。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的红藻氨酸受体grik2b的抑制剂的浓度为100μm。

8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的雌性橘小实蝇为羽化12天后已交配的雌性橘小实蝇。

9.一种降低雌性橘小实蝇产卵量的制剂，其特征在于，包括以下a和/或b：

10.根据权利要求9所述的制剂，其特征在于，所述的dsrna的靶点区域的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述的抑制剂为d-ap5、cnqx和/或nbqx。

技术总结
本发明公开了红藻氨酸受体Grik2b在防治橘小实蝇中的应用。本发明通过RNAi技术降低Grik2b的表达水平，证明了红藻氨酸受体对橘小实蝇雌虫产卵行为的调控作用；本发明还筛选了能够与Grik2b结合的抑制剂，抑制剂处理过后的雌虫表现出严重的产卵缺陷。因此，将Grik2b受体作为靶点可有效抑制雌虫的产卵行为，进而控制其种群数量，同时害虫产生抗药性的风险极低，有利于实现热带亚热带地区实蝇的高效安全防控。

技术研发人员：程代凤,刘彬,程康,程招星
受保护的技术使用者：庐山市绿游生态农业开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/3/18